巴拉圭茶對(duì)高脂膳食小鼠氧化還原狀態(tài)的影響

李翔輝，劉瑞霞，趙俊芳，張媛媛，王 嬌

（漯河食品職業(yè)學(xué)院，河南漯河 462300）

改革開(kāi)放以來(lái)，我國(guó)居民生活水平逐年提高，膳食結(jié)構(gòu)發(fā)生較大變化。統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)，1982~2012 年我國(guó)居民碳水化合物供能比例呈下降趨勢(shì)，脂肪供能呈上升趨勢(shì)，已超出中國(guó)居民膳食指南推薦值[1?2]，長(zhǎng)期過(guò)多的脂肪攝入會(huì)導(dǎo)致機(jī)體氧化還原狀態(tài)失衡，產(chǎn)生過(guò)量的活性氧自由基，造成氧化應(yīng)激，誘發(fā)肥胖、脂類(lèi)代謝紊亂，心血管疾病等各類(lèi)慢性疾病[3?4]。目前研究已經(jīng)明確，可以通過(guò)攝入適量的抗氧化劑來(lái)改善機(jī)體氧化還原狀態(tài)。如陳麗梅等[5]研究表明抗氧化劑槲皮素可以調(diào)節(jié)高脂膳食小鼠肝臟組織氧化還原狀態(tài)。Prior 等[6]發(fā)現(xiàn)，攝入外源性抗氧化劑可以幫助機(jī)體清除過(guò)量的活性氧自由基，增強(qiáng)抗氧化酶活性，降低脂質(zhì)過(guò)氧化物。

巴拉圭茶（Ilex paraguariensis）是其樹(shù)葉經(jīng)過(guò)發(fā)酵、干燥、粉碎等工藝制成的一種茶，主要產(chǎn)于南美的阿根廷、巴西、智利、烏拉圭等國(guó)家。巴拉圭茶是深受人們喜愛(ài)的一種飲品，至今已有超過(guò)四百余年的歷史。巴拉圭茶被稱(chēng)為茶主要因?yàn)樗c中國(guó)的茶有著類(lèi)似的沖泡方式，實(shí)際上兩者是不同的植物，巴拉圭茶茶樹(shù)屬于冬青科冬青屬植物，而茶樹(shù)屬于山茶科山茶屬灌木。雖然兩者是不同的植物，但是兩者在化學(xué)成分、功能性作用、飲用方式等方面具有相似之處。巴拉圭茶的主要功能性成分為多酚類(lèi)化合物，其根、莖、葉中都可以提取到多酚，其中葉子中含量最高，Zwyrzykowska 等[7]采用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用，鑒定巴拉圭茶的甲醇水提物中多酚類(lèi)物質(zhì)，結(jié)果顯示從提取物中鑒定出多達(dá)20 種多酚化合物，包括蘆丁、奎尼酸及綠原酸等。巴拉圭茶除多酚類(lèi)化合物外，還含有皂苷、黃嘌呤生物堿、維生素等活性成分，Mateos 等[8]采用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用鑒定巴拉圭茶中甲基黃嘌呤的含量高達(dá)8.2~10.2 mg/g。已有研究表明，巴拉圭茶具有抗氧化、抗菌、抗癌、減肥、保護(hù)心血管等功效，如Daniel 等[9]發(fā)現(xiàn)巴拉圭茶體外抗氧化能力與其濃度呈正相關(guān)，Teselkin 等[10]發(fā)現(xiàn)健康志愿者飲用巴拉圭茶2 h 后，檢測(cè)到其血漿中抗氧化能力相關(guān)指標(biāo)有所提高，Colpo 等[11]選取經(jīng)慢性固定應(yīng)激誘導(dǎo)后的大鼠，給予適量馬黛茶處理，各項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)顯示馬黛茶在一定程度上可以減弱脂質(zhì)和蛋白質(zhì)的氧化，顯示馬黛提取物對(duì)慢性固定應(yīng)激大鼠的大腦具有抗氧化作用。Noureddine 等[12]對(duì)馬黛水提物的抗菌活性研究顯示馬黛水提物對(duì)大多數(shù)菌株均有較強(qiáng)的抗菌活性，對(duì)革蘭陽(yáng)性菌的抗菌活性更強(qiáng)，Ronco 等[13]關(guān)于巴拉圭茶與乳腺癌患病風(fēng)險(xiǎn)的病例對(duì)照研究顯示巴拉圭茶攝入量與患乳腺癌風(fēng)險(xiǎn)呈負(fù)相關(guān)。我國(guó)于2004 年把巴拉圭茶列入食品用香料名單，由于其具有多種功效，近年來(lái)逐漸被我國(guó)消費(fèi)者接受，銷(xiāo)量逐年增加，但目前關(guān)于巴拉圭茶的研究主要集中在活性成分鑒定、提取、降血脂、減肥等方面[14?16]，對(duì)其抗氧化活性的機(jī)制尚不完全明確，本課題擬通過(guò)給高脂膳食小鼠灌胃巴拉圭茶來(lái)探討巴拉圭茶對(duì)小鼠肝臟抗氧化能力變化的影響，對(duì)肝臟FoxO3a基因通路的影響，探究其抗氧化活性機(jī)制，為進(jìn)一步研究巴拉圭茶降血脂、減肥等功效與抗氧化之間的關(guān)系，以及開(kāi)發(fā)有關(guān)功能食品提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

巴拉圭茶 阿根廷克羅尼亞列比格公司；C57BL/6J 雄性小鼠SPF 級(jí) 河南斯克貝斯生物科技股份有限公司；基礎(chǔ)日糧、高脂日糧（見(jiàn)表1） 河南斯克貝斯生物科技股份有限公司；活性氧自由基（Reactive oxygen species，ROS）、丙二醛（Malondialdehyde，MDA）、過(guò)氧化氫酶（Catalase，CAT）、超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase，SOD）、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（Glutathione peroxidase，GSH-Px）、谷胱甘肽/氧化型谷胱甘肽（Glutathione/Oxidized glutathione，GSH/GSSG）比值、總抗氧化能力（Total antioxidant capacity，T-AOC）測(cè)定試劑盒 南京建成生物工程研究所有限公司；Trizol、引物、M-AMV 逆轉(zhuǎn)錄酶 生工生物工程（上海）股份有限公司；其他試劑 均為分析純。

表1 飼料營(yíng)養(yǎng)成分Table 1 Feed nutrient

Quant Studio1 實(shí)時(shí)熒光定量PCR 儀 美國(guó)ABI公司；UV2600 紫外可見(jiàn)分光光度計(jì) 日本島津公司；BSA124S 電子分析天平 德國(guó)賽多利斯公司；CenLee 5R 離心機(jī) 湖南湘立科學(xué)儀器有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì) 選取6 周齡C57BL/6J 雄性小鼠48 只，飼喂基礎(chǔ)日糧預(yù)養(yǎng)一周后，隨機(jī)分為四組：對(duì)照組（ND 組，基礎(chǔ)日糧），高脂組（HF 組，高脂日糧），高脂+低劑量巴拉圭茶組（HFL 組，高脂日糧，按1 g/kg 劑量灌胃巴拉圭茶），高脂+高劑量巴拉圭茶組（HFH 組，高脂日糧，按2 g/kg 劑量灌胃巴拉圭茶）。巴拉圭茶組灌胃容量20 mL/kg，ND 組和HF 組按照等劑量的蒸餾水灌胃，每日一次，連續(xù)灌胃6 周，處死前測(cè)定小鼠體質(zhì)量，期間自由攝食和飲水。

1.2.2 巴拉圭茶的制作 參考Pereira 等[17]制作方法，分別用20 mL 蒸餾水（90 ℃）沖泡5、10 g 巴拉圭干茶，3 min 之后過(guò)濾，重復(fù)上述操作5 次，5 次濾液共100 mL 混勻放置至室溫備用, 茶液濃度為0.05、0.10 g/mL。每次灌胃均使用新鮮制作的茶液。

1.2.3 樣品采集 連續(xù)灌胃6 周后，小鼠禁食12 h，斷頸椎處死小鼠，迅速取出0.2 g 左右肝臟組織置于液氮速凍，轉(zhuǎn)移至?70 ℃超低溫冰箱中保存用于實(shí)時(shí)定量RT-PCR 實(shí)驗(yàn)，剩余肝臟組織按照比例稱(chēng)取肝臟組織和生理鹽水（w:v=1:9）混合勻漿，以3000 r/min，4 ℃低溫離心15 min，取上清液，置于?20 ℃環(huán)境中備用。

1.2.4 肝臟中氧化還原指標(biāo)的測(cè)定 肝臟中ROS 水平、MDA 含量、CAT 活性、SOD 活性、GSH-Px 活性、GSH/GSSG 比值、T-AOC 的測(cè)定嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明進(jìn)行。

1.2.5 肝臟中mRNA 表達(dá)量的測(cè)定 Trizol 裂解法提取肝臟組織中總RNA，適量的DEPC 水稀釋?zhuān)止夤舛扔?jì)測(cè)定260 nm/280 nm 比值，反轉(zhuǎn)錄得到cDNA，將反轉(zhuǎn)錄得到cDNA 以β-actin 為內(nèi)參基因，對(duì)目的基因進(jìn)行RT-PCR 進(jìn)行擴(kuò)增，檢查各模板的Ct 值，結(jié)果用2?△△Ct表示相對(duì)基因的表達(dá)量。引物序列見(jiàn)表2。

表2 基因的引物序列Table 2 Sequence of the primers

1.3 數(shù)據(jù)處理

使用SPSS 22.0 軟件對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，采用單因素方差分析，Duncan 檢驗(yàn)進(jìn)行多重比較，結(jié)果用±s 表示，P＜0.01 表示差異極顯著；P＜0.05 表示差異顯著。采用Pearson 相關(guān)系數(shù)分析兩變量之間的相關(guān)性。

2 結(jié)果與分析

2.1 巴拉圭茶對(duì)高脂膳食小鼠體質(zhì)量的影響

由表3 可知，飼喂高脂日糧的HF 組小鼠體質(zhì)量顯著高于對(duì)照組小鼠體質(zhì)量（P＜0.05），灌胃低劑量巴拉圭茶的HFL 組和灌胃高劑量巴拉圭茶的HFH 組小鼠體質(zhì)量均顯著低于飼喂高脂日糧的HF 組小鼠體質(zhì)量（P＜0.05），灌胃高劑量巴拉圭茶的HFH 組小鼠體質(zhì)量與對(duì)照組小鼠體質(zhì)量無(wú)顯著差異（P>0.05）。C57BL/6J 品系小鼠具有對(duì)膳食脂肪更強(qiáng)的敏感性，高脂膳食條件下更容易導(dǎo)致肥胖，與人體肥胖的發(fā)生與發(fā)展具有相似性[18]。Uecker 等[19]在巴拉圭茶對(duì)高脂膳食大鼠體重變化影響的研究中發(fā)現(xiàn)，經(jīng)過(guò)34 d 喂養(yǎng)，高脂膳食組大鼠體重增加量明顯高于正常日糧組，而巴拉圭茶高脂膳食組大鼠體重增加量顯著低于高脂膳食組。高脂膳食小鼠由于脂肪能量攝入過(guò)多，無(wú)法及時(shí)消耗，造成脂肪堆積，體重增加，巴拉圭茶能夠降低高脂膳食小鼠體重，可能是因?yàn)槠涮岣吡烁咧攀承∈竽芰肯?，減少了脂肪堆積量。

表3 巴拉圭茶對(duì)高脂膳食小鼠體質(zhì)量的影響Table 3 Effects ofIlex paraguariensison body weight of high fat diet fed mice

2.2 巴拉圭茶對(duì)高脂膳食小鼠肝臟ROS 水平的影響

從圖1 可知，與ND 組相比，HF 組小鼠肝臟ROS 水平顯著升高（P＜0.05）；與HF 組相比，灌胃低劑量巴拉圭茶的HFL 組和灌胃高劑量巴拉圭茶的HFH 組小鼠肝臟ROS 水平顯著降低（P＜0.05）。上述結(jié)果說(shuō)明長(zhǎng)期的高脂膳食會(huì)造成小鼠肝臟ROS水平升高，機(jī)體氧化還原狀態(tài)失衡，通過(guò)灌胃不同劑量的巴拉圭茶，可以顯著降低ROS 累積量，使機(jī)體恢復(fù)氧化還原狀態(tài)的平衡。ROS 是反映機(jī)體氧化還原狀態(tài)的重要指標(biāo)，當(dāng)機(jī)體的ROS 生成速率超過(guò)抗氧化防御系統(tǒng)的清除速率時(shí)，會(huì)使ROS 累積量維持在一個(gè)較高水平，導(dǎo)致機(jī)體出現(xiàn)嚴(yán)重的氧化應(yīng)激[20]。李龍囡等[21]在抗氧化劑硫辛酸對(duì)高脂膳食小鼠脂類(lèi)代謝的研究中也發(fā)現(xiàn)高脂膳食會(huì)造成小鼠肝臟ROS水平顯著提高，其原因在于脂類(lèi)代謝伴隨ROS 的產(chǎn)生，長(zhǎng)期高脂膳食會(huì)導(dǎo)致過(guò)量的ROS 得不到及時(shí)清除，在體內(nèi)累積造成機(jī)體氧化還原狀態(tài)失衡。由于多酚類(lèi)化合物含有一個(gè)或多個(gè)羥基基團(tuán)的苯環(huán)結(jié)構(gòu)，具有捕捉活性氧自由基的功能，能夠降低體內(nèi)過(guò)量自由基，通過(guò)灌胃富含多酚類(lèi)化合物的巴拉圭茶后，ROS水平顯著降低，可能是多酚類(lèi)化合物在起作用。

圖1 巴拉圭茶對(duì)高脂膳食小鼠肝臟活性氧自由基水平的影響Fig.1 Effects ofIlex paraguariensison liver ROS levels of high-fat diet fed mice

2.3 巴拉圭茶對(duì)高脂膳食小鼠肝臟中MDA 含量的影響

從圖2 可知，與ND 組相比，HF 組小鼠肝臟MDA含量顯著升高（P＜0.05）；與HF 組相比，灌胃低劑量巴拉圭茶的HFL 組和灌胃高劑量巴拉圭茶的HFH組小鼠肝臟MDA 含量顯著降低（P＜0.05）。上述結(jié)果表明，長(zhǎng)期高脂膳食會(huì)造成小鼠肝臟MDA 含量升高，巴拉圭茶可以有效降低MDA 含量，且具有一定的劑量效應(yīng)。MDA 的產(chǎn)生是由于過(guò)量ROS 攻擊生物膜中的多不飽和脂肪酸而引起的脂質(zhì)過(guò)氧化作用造成的，其含量的多少可反映組織細(xì)胞的脂質(zhì)過(guò)氧化速率或強(qiáng)度[22]。由于高脂膳食造成小鼠ROS 水平明顯增加，過(guò)量的ROS 沒(méi)有得以及時(shí)清除，攻擊細(xì)胞膜上的多不飽和脂肪酸，引起脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)生過(guò)量的MDA，結(jié)合ROS 試驗(yàn)結(jié)果來(lái)看，巴拉圭茶干預(yù)的小鼠ROS 水平降低，MDA 含量也降低，也進(jìn)一步反映了ROS 與MDA 之間的關(guān)系，這說(shuō)明巴拉圭茶可以降低組織細(xì)胞受自由基攻擊的程度，這與巴拉圭茶改善機(jī)體氧化還原狀態(tài)有一定關(guān)系。Brasilino 等[23]研究發(fā)現(xiàn)每天給予受到氧化應(yīng)激小鼠20 mg/kg 巴拉圭茶，28 d 后檢測(cè)到其血漿中MDA 含量與對(duì)照組相比明顯下降。

圖2 巴拉圭茶對(duì)高脂膳食小鼠肝臟中MDA含量的影響Fig.2 Effects ofIlex paraguariensison content of MDA in liver of high-fat diet fed mice

2.4 巴拉圭茶對(duì)高脂膳食小鼠肝臟抗氧化酶活性的影響

從圖3 可知，與ND 組相比，HF 組小鼠肝臟CAT、SOD、GSH-Px 活性顯著降低（P＜0.05）；與HF 組相比，灌胃低劑量巴拉圭茶的HFL 組和灌胃高劑量巴拉圭茶的HFH 組小鼠肝臟CAT、SOD、GSH-Px 活性顯著提高（P＜0.05）。上述結(jié)果表明，長(zhǎng)期高脂膳食會(huì)造成小鼠肝臟CAT、SOD、GSH-Px 活性降低，灌胃巴拉圭茶可以有效提高CAT、SOD、GSH-Px 活性，且具有一定的劑量效應(yīng)。機(jī)體在代謝過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生ROS，也會(huì)清除ROS，使之處于動(dòng)態(tài)平衡的狀態(tài)。機(jī)體自身的防御體系負(fù)責(zé)清除ROS，包括酶促和非酶促兩個(gè)體系，酶促系統(tǒng)包括CAT、SOD、GSH-Px等。CAT 就是被細(xì)胞用來(lái)催化過(guò)氧化氫分解的工具，能夠催化機(jī)體代謝過(guò)程中產(chǎn)生的過(guò)氧化氫，生成無(wú)害的水和氧氣，避免過(guò)氧化氫對(duì)機(jī)體造成損害[24]。SOD 是抵御活性氧損傷的第一道防線，它能降低過(guò)高濃度的活性氧物質(zhì)，保護(hù)細(xì)胞免受損傷[25]。GSHPx 在機(jī)體中能夠催化過(guò)氧化物分解，并且能特異催化GSH 對(duì)氫過(guò)氧化物的反應(yīng)，以及和其他抗氧化酶協(xié)同作用清除多余的ROS 使得ROS 處于正常生理范圍內(nèi)[26]。從試驗(yàn)結(jié)果來(lái)看，高脂膳食造成小鼠肝臟CAT、SOD、GSH-Px 活性降低，負(fù)責(zé)清除ROS的酶促體系受到影響，進(jìn)而影響小鼠的氧化還原狀態(tài)，而灌胃巴拉圭茶能夠顯著恢復(fù)高脂膳食小鼠酶促體系中三種酶的活性，這有利于機(jī)體清除過(guò)量的ROS，保持機(jī)體氧化還原狀態(tài)平衡。Pereira 等[17]給予大鼠20 mg/kg 劑量的巴拉圭茶，檢測(cè)發(fā)現(xiàn)巴拉圭茶能夠增加肝臟中CAT、SOD、GSH-Px 的活性，Bremer 等[27]通過(guò)與對(duì)照組相比，攝入200 mL 巴拉圭茶的志愿者血漿中CAT 活性增加28.7%，SOD 活性增加21.3%，GSH-Px 活性增加9.6%，這些結(jié)果都表明巴拉圭茶可以在一定程度上提高機(jī)體抗氧化酶活性，發(fā)揮抗氧化作用。

圖3 巴拉圭茶對(duì)高脂膳食小鼠肝臟CAT、SOD、GSH-Px活性的影響Fig.3 Effects ofIlex paraguariensison the activity of CAT,SOD,GSH-Px in liver of high-fat diet fed mice

2.5 巴拉圭茶對(duì)高脂膳食小鼠肝臟GSH/GSSG 比值的影響

從圖4 可知，與ND 組相比，HF 組小鼠肝臟GSH/GSSG 比值顯著降低（P＜0.05）；與HF 組相比，灌胃低劑量巴拉圭茶的HFL 組和灌胃高劑量巴拉圭茶的HFH 組小鼠肝臟GSH/GSSG 比值顯著提高（P＜0.05）。上述結(jié)果表明，長(zhǎng)期高脂膳食會(huì)造成小鼠肝臟GSH/GSSG 比值降低，灌胃巴拉圭茶可以有效提高GSH/GSSG 比值。還原型谷胱甘肽（GSH）廣泛地存在于活體細(xì)胞中，可與ROS 結(jié)合，自身被氧化成氧化型谷胱甘肽（GSSG），加速ROS 的排泄，減輕ROS 對(duì)機(jī)體的損傷[28]。正常情況下，機(jī)體中的GSH/GSSG 比值處于一定水平，當(dāng)機(jī)體受到高脂膳食影響，機(jī)體處于氧化應(yīng)激狀態(tài)，GSH 被氧化成GSSG，造成GSH/GSSG 比值下降。高脂組小鼠膳食脂肪代謝產(chǎn)生過(guò)多的ROS，GSH 與ROS 結(jié)合后，其被氧化為GSSG，導(dǎo)致GSH/GSSG 比值降低，這可能是HF 組小鼠肝臟GSH/GSSG 比值顯著降低的原因。巴拉圭茶的干預(yù)后，HFL 組和HFH 組小鼠肝臟GSH/GSSG 比值提高，可能是由于抗氧化酶活性的提高，ROS 水平降低，GSH 與ROS 結(jié)合被氧化成GSSG 的反應(yīng)減少，最終相比HF 組GSH/GSSG 比值有所提高。Silva 等[29]研究巴拉圭茶對(duì)高脂膳食大鼠海馬和肝臟組織氧化還原狀態(tài)中發(fā)現(xiàn)，高脂膳食造成肝臟組織中GSH 含量下降，巴拉圭茶高脂組肝臟組織中GSH 含量有所升高，這也說(shuō)明了巴拉圭茶的抗氧化作用與GSH 有一定的關(guān)系。

圖4 巴拉圭茶對(duì)高脂膳食小鼠肝臟GSH/GSSG 比值的影響Fig.4 Effects ofIlex paraguariensison liver GSH/GSSG of high-fat diet fed mice

2.6 巴拉圭茶對(duì)高脂膳食小鼠肝臟T-AOC 的影響

T-AOC 反應(yīng)機(jī)體酶促和非酶促兩個(gè)自身防御體系抗氧化物質(zhì)的總體水平，是反映機(jī)體抗氧化能力最全面的指標(biāo)之一，能全面衡量機(jī)體氧化還原狀態(tài)[30]。從圖5 可知，與ND 組相比，HF 組小鼠肝臟T-AOC顯著降低（P＜0.05）；與HF 組相比，灌胃低劑量巴拉圭茶的HFL 組和灌胃高劑量巴拉圭茶的HFH 組小鼠肝臟T-AOC 顯著提高（P＜0.05）。結(jié)合巴拉圭茶對(duì)酶促反應(yīng)體系中抗氧化酶活性的影響以及對(duì)非酶促反應(yīng)體系中GSH/GSSG 比值的影響來(lái)看，相比ND 組，HF 組T-AOC 下降可能是由于抗氧化酶活性降低、GSH/GSSG 比值下降兩方面原因造成的，巴拉圭茶干預(yù)后，抗氧化酶活性、GSH/GSSG 比值均有所恢復(fù)，進(jìn)而T-AOC 有所提高，這說(shuō)明巴拉圭茶對(duì)提高機(jī)體抗氧化防御體系能力有一定作用。

圖5 巴拉圭茶對(duì)高脂膳食小鼠肝臟T-AOC 的影響Fig.5 Effects ofIlex paraguariensison liver T-AOC of high fat diet fed mice

2.7 巴拉圭茶對(duì)高脂膳食小鼠肝臟FoxO3a、catalase、MnSOD基因表達(dá)的的影響

FoxO3a是人類(lèi)叉頭框O （forkhead box O, FOXO）蛋白家族的一個(gè)重要成員，在細(xì)胞增殖、分化、代謝，改善氧化應(yīng)激，延長(zhǎng)壽命等方面具有重要意義[31]。catalase和MnSOD是FoxO3a的下游基因。從圖6可知，與ND 組相比，HF 組小鼠肝臟FoxO3a及下游catalase和MnSOD基因表達(dá)量顯著下降（P＜0.05）；與HF 組相比，灌胃低劑量巴拉圭茶的HFL 組和灌胃高劑量巴拉圭茶的HFH 組小鼠肝臟FoxO3a、catalase、MnSOD基因表達(dá)量顯著提高（P＜0.05）。FoxO3a被激活后可誘導(dǎo)下游抗氧化基因表達(dá)，發(fā)揮生物學(xué)作用[32]。FoxO3a被激活后，可以上調(diào)catalase基因表達(dá)，可以增加CAT 的表達(dá)，CAT 能夠作用于過(guò)氧化氫使其分解為水和氧氣，進(jìn)而改善機(jī)體氧化還原狀態(tài)[33?34]。Callaway 等[35]研究發(fā)現(xiàn)當(dāng)FoxO3a轉(zhuǎn)錄活性受到抑制時(shí)，MnSOD的表達(dá)減少，這說(shuō)明FoxO3a可以調(diào)控MnSOD的表達(dá)。本研究中，兩種劑量的巴拉圭茶均可顯著（P＜0.05）上調(diào)高脂膳食小鼠肝臟FoxO3a、catalase、MnSOD基因表達(dá)，CAT、SOD 活性也得到顯著（P＜0.05）增加。CAT 活性增加有助于機(jī)體中過(guò)氧化氫的分解，SOD 活性增加能降低過(guò)高濃度的活性氧物質(zhì)，保護(hù)細(xì)胞免受損傷。這一結(jié)果和上述研究類(lèi)似，說(shuō)明巴拉圭茶可以通過(guò)激活FoxO3a基因通路，上調(diào)catalase、MnSOD基因表達(dá)，提高CAT、SOD 活性，改善機(jī)體氧化還原狀態(tài)。Shalini 等[36]研究發(fā)現(xiàn)當(dāng)小鼠肝臟細(xì)胞中的FoxO3a的活性被抑制時(shí)，會(huì)導(dǎo)致機(jī)體的GSH-Px、SOD 表達(dá)減少，ROS 無(wú)法有效清除，機(jī)體的抗氧化能力減弱，氧化還原狀態(tài)失衡，這說(shuō)明FoxO3a基因通路在調(diào)節(jié)機(jī)體抗氧化酶上具有一定作用。根據(jù)上述結(jié)果推測(cè)，巴拉圭茶改善高脂膳食造成的機(jī)體氧化還原狀態(tài)失衡狀態(tài)的原因可能是通過(guò)上調(diào)高脂膳食小鼠肝臟FoxO3a、catalase、MnSOD基因表達(dá)，提高機(jī)體CAT、SOD、GSH-Px 等抗氧化酶活性來(lái)實(shí)現(xiàn)的。

圖6 巴拉圭茶對(duì)高脂膳食小鼠肝臟FoxO3a、catalase、MnSOD基因表達(dá)的影響Fig.6 Effects ofIlex paraguariensison liverFoxO3a, catalaseandMnSODgene expression in mice fed with high-fat diet

2.8 小鼠肝臟氧化還原與抗氧化基因相關(guān)性分析

通過(guò)對(duì)小鼠肝臟氧化還原指標(biāo)與抗氧化基因表達(dá)的相關(guān)性分析，結(jié)果顯示，兩者具有顯著相關(guān)性（表4）。ROS 與FoxO3a、catalase、MnSOD基因表達(dá)量呈極顯著負(fù)相關(guān)（P＜0.01），CAT、SOD、GSHPx 與FoxO3a、catalase、MnSOD基因表達(dá)量呈極顯著正相關(guān)（P＜0.01），結(jié)合基因表達(dá)量和抗氧化酶活性、ROS 水平等試驗(yàn)結(jié)果數(shù)據(jù)，可以推測(cè)，巴拉圭茶可能是通過(guò)調(diào)控FoxO3a、catalase、MnSOD基因表達(dá)量，影響機(jī)體酶促反應(yīng)中抗氧化酶活性，進(jìn)而調(diào)節(jié)機(jī)體ROS 水平，影響機(jī)體氧化還原狀態(tài)。

表4 肝臟氧化還原指標(biāo)與FoxO3a、catalase、MnSOD基因表達(dá)的相關(guān)性分析Table 4 The correlation between hepatic redox indes and theFoxO3a,catalaseandMnSODgene expression

3 結(jié)論

本課題研究了巴拉圭茶對(duì)高脂膳食小鼠肝臟氧化還原狀態(tài)的改善作用，結(jié)果表明，巴拉圭茶可降低高脂膳食小鼠肝臟中ROS 水平、MDA 含量，可增加酶促反應(yīng)體系SOD、CAT、GSH-Px 抗氧化酶的活性，可增加T-AOC 水平、GSH/GSSG 比值，可以上調(diào)FoxO3a、catalase、MnSOD基因表達(dá)量，并且具有一定的劑量關(guān)系，相關(guān)性分析顯示FoxO3a、catalase、MnSOD基因表達(dá)量與SOD、CAT、GSH-Px 抗氧化酶的活性呈正相關(guān)，與ROS 水平呈負(fù)相關(guān)，說(shuō)明巴拉圭茶對(duì)改善高脂膳食造成小鼠肝臟氧化還原狀態(tài)失衡的現(xiàn)象具有積極的作用，此作用可能與巴拉圭茶上調(diào)FoxO3a基因通路基因表達(dá)量，提高機(jī)體抗氧化酶活性，機(jī)體過(guò)量的ROS 得以及時(shí)清除有一定關(guān)系。本研究結(jié)果為開(kāi)發(fā)有關(guān)巴拉圭茶的功能性食品提供了一定的理論依據(jù)。