刺五加多糖調(diào)控PI3K/Akt/mTOR 通路改善大鼠抑郁行為的作用

丁繼紅，姜春玉，楊 樂，王顯艷

（1.齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院附屬第三醫(yī)院，黑龍江齊齊哈爾 161000；2.齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院病理學(xué)院，黑龍江齊齊哈爾 161006）

抑郁癥是一種常見的精神類疾病，其主要表現(xiàn)為情緒低落、樂趣降低及興趣缺乏[1]。據(jù)世界衛(wèi)生組織估算，全球大約有3.5 億人深受抑郁癥的困擾，且發(fā)病率逐年增加，已成為全球性公共衛(wèi)生問題[2]。服用抗抑郁藥是當(dāng)前治療抑郁癥的重要手段，但研究表明，經(jīng)一線抗抑郁藥治療的患者中仍有30%癥狀難以得到有效緩解[3]。此外，現(xiàn)有的抗抑郁藥存在不良反應(yīng)多、復(fù)發(fā)率高、有效率低及起效慢等缺點(diǎn)，而中藥在抗抑郁方面的研究近年來倍受矚目[4]。

刺五加為五加科植物刺五加（Acanthopanax senticosus（Rupr. Et Maxim.） Harms）的莖或根莖，為傳統(tǒng)中藥材，藥食兩用，具有降血壓、抗炎、抗氧化、抗衰老等多種藥理作用[5]。研究發(fā)現(xiàn)[6]，刺五加-云芝配伍組合對抑郁模型小鼠的抑郁行為具有緩解作用；同時(shí)，臨床研究也證實(shí)，刺五加治療抑郁癥療效顯著[7]。雖然刺五加的抗抑郁作用在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)及臨床研究中均已被證實(shí)，但其抗抑郁作用的功效成分目前為止并不清楚。植物多糖的抗抑郁作用已被多項(xiàng)研究證實(shí)[8?9]，其活性研究目前主要集中在保護(hù)肝臟損傷、增加免疫功能及抗炎、鎮(zhèn)痛等方面[10?12]，但刺五加多糖（Acanathopanax senticosuspolysaccharides，ASPs）的抗抑郁作用未見報(bào)道。

哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin，mTOR）與抑郁、阿爾茨海默病、癲癇等多種神經(jīng)系統(tǒng)疾病密切相關(guān)，mTOR 的表達(dá)受上游信號分子磷脂酰肌醇激酶（phosphatidylinositol 3 kinases，PI3K）及蛋白激酶B（protein kinase B，Akt）的調(diào)控[13]。此外，研究發(fā)現(xiàn)腦組織炎癥反應(yīng)和氧化應(yīng)激是相互影響的兩種病理過程，在包括抑郁癥在內(nèi)的多種神經(jīng)系統(tǒng)疾病中共同發(fā)揮致病作用[14?15]。本研究采用單籠孤養(yǎng)及慢性輕度不可知應(yīng)激刺激建立大鼠抑郁模型，在明確刺五加多糖具有改善抑郁行為作用的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步探討該作用與調(diào)控PI3K/Akt/mTOR 通路及抗炎、抗氧化應(yīng)激作用的相關(guān)性，旨在為刺五加多糖應(yīng)用于抑郁癥的預(yù)防及治療提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

刺五加多糖 純度>80%，西安源森生物科技有限公司；鹽酸氟西汀 20 mg/粒，禮來蘇州制藥有限公司；大鼠血清白細(xì)胞介素1β（interleukin 1β，IL-1β）、IL-6、腫瘤壞死因子α（tumor necrosis factorα，TNFα）檢測試劑盒 上海晶抗生物工程有限公司；大鼠海馬組織過氧化氫酶（catalase，CAT）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）、丙二醛（malondialdehyde，MDA）檢測試劑盒 上海研啟生物科技有限公司；二喹啉甲酸（bicinchoninic acid，BCA）蛋白檢測試劑盒 上海原鑫生物科技公司；兔抗大鼠磷酸化PI3K（phosphorylated PI3K，p-PI3K）、PI3K、磷酸化Akt（phosphorylated Akt，p-Akt）、Akt、磷酸化mTOR（phosphorylated mTOR，p-mTOR）、mTOR 多克隆抗體及二抗 武漢三鷹生物技術(shù)有限公司。

3K-30 型低溫高速離心機(jī) 美國Sigma 公司；HM525 型冰凍切片機(jī) 美國Thermo Fisher 公司；CX23 光學(xué)顯微鏡 日本奧林巴斯公司；HBS-1096A型酶標(biāo)儀 南京德鐵公司；PowerPac Basic 型電泳儀、Mini Transblot 型濕轉(zhuǎn)印槽 美國Bio-Rad 公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 分組、造模及藥物處理 Wistar 大鼠50 只，SPF 級，成年雄性，體重180~220 g，哈爾濱醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)部[SCXK（黑）2019-001]。本研究獲齊齊哈爾醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理委員會(huì)審批（QMU-AECC-2021-122）。飼養(yǎng)1 周適應(yīng)環(huán)境后，隨機(jī)分為正常對照組、模型對照組、鹽酸氟西汀組及刺五加多糖低、高劑量組，每組10 只。正常對照組大鼠按時(shí)給予食水，常規(guī)環(huán)境飼養(yǎng)；其余各組大鼠均采取單籠孤養(yǎng)，并接受隨機(jī)循環(huán)進(jìn)行的7 種慢性輕度不可知應(yīng)激刺激（懸尾、夾尾、禁水、禁食、冰水游泳、電擊足底、黑白顛倒），7 種刺激輪流進(jìn)行，每天進(jìn)行1 種刺激，每周以不同的順序循環(huán)1 次，其中禁水、禁食不可接續(xù)進(jìn)行，共計(jì)28 d[16]。從建模第1 d 開始灌胃給藥，鹽酸氟西汀及刺五加多糖均用蒸餾水溶解，鹽酸氟西汀組的給藥劑量為2.1 mg/kg[17]，刺五加多糖低、高劑量組的給藥劑量為60、120 mg/kg[18]；正常對照組和模型對照組灌胃蒸餾水，灌胃體積均為1 mL/100 g，1 次/d，共計(jì)28 d。給藥期間觀察并記錄各組動(dòng)物活動(dòng)、毛色光澤度及精神等一般狀態(tài)。

1.2.2 行為學(xué)指標(biāo)檢測

1.2.2.1 敞箱實(shí)驗(yàn) 自制敞箱，其內(nèi)漆為黑色，長、寬、高均80 cm，底部均分為25 個(gè)方格。大鼠在敞箱適應(yīng)2 min 后，拍攝記錄連續(xù)3 min 的自主活動(dòng)；通過回放錄像，計(jì)數(shù)大鼠三爪跨格的水平活動(dòng)次數(shù)[19]。

1.2.2.2 糖水偏好實(shí)驗(yàn) 大鼠禁食、禁水24 h，然后進(jìn)行糖水偏好實(shí)驗(yàn)。每個(gè)鼠籠放置1 瓶1%蔗糖水和1 瓶純水，且每間隔0.5 h 更換一次位置，以排除位置因素的干擾[20]。自由攝水2 h（8:00~10:00），測定蔗糖水和純水的消耗量，計(jì)算糖水偏好度。糖水偏好度（%）=糖水消耗量/（蔗糖水+純水）消耗量×100。

1.2.2.3 強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn) 在液面高度為50 cm、底面尺寸為30 cm×45 cm 的方形水桶進(jìn)行強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)前1 d，大鼠需練習(xí)游泳15 min。水溫24~26 ℃，水深50 cm，大鼠自由游泳時(shí)間5 min，通過回放錄像，計(jì)時(shí)不動(dòng)時(shí)間[21]。

1.2.3 海馬組織病理檢測 行為學(xué)指標(biāo)檢測結(jié)束后，大鼠經(jīng)10%水合氯醛麻醉，腹主動(dòng)脈取血，制備血清，低溫冰箱保存。大鼠處死后，冰上斷頭取腦，分離海馬組織，一部分放入液氮中保存；另外一部分經(jīng)固定、梯度脫水、包埋切片后，以常規(guī)方法[22]進(jìn)行蘇木精-伊紅（hematoxylin-eosin，HE）染色及尼氏染色。

1.2.4 炎癥及氧化應(yīng)激指標(biāo)檢測 取凍存的血清，嚴(yán)格按照試劑盒說明書的操作步驟分別檢測血清IL-1β、IL-6 及TNF-α水平等炎癥反應(yīng)指標(biāo)；取凍存的海馬組織，準(zhǔn)確稱重后制備勻漿液上清，按照試劑盒說明書中的方法分別檢測海馬組織CAT、SOD 活性及MDA 水平等氧化應(yīng)激指標(biāo)。

1.2.5 蛋白表達(dá)檢測 參考文獻(xiàn)[23]中的方法，通過Western blot 法檢測刺五加多糖對抑郁模型大鼠海馬組織p-PI3K、p-Akt 及p-mTOR 蛋白表達(dá)的影響。取凍存的海馬組織，加入液氮于研缽中研磨，再加入蛋白裂解液，在4 ℃下離心（12 000 r/min，10 min）制備上清液，并通過BCA 蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度。定量后，在沸水浴中使蛋白變性。配制濃縮膠（5%）及分離膠（12%），取30 μg 總蛋白進(jìn)行SDSPAGE 電泳，分離目的蛋白。電泳結(jié)束后，轉(zhuǎn)膜至聚偏氟乙烯膜上，經(jīng)脫脂奶粉（5%）封閉1 h，TBST 漂洗后，加入p-PI3K、PI3K、p-Akt、Akt、p-mTOR 及mTOR 多克隆抗體（均為1:1500 稀釋），4 ℃孵育過夜。TBST 漂洗后，加入二抗（1:5000 倍稀釋），常溫孵育2 h。TBST 漂洗后，加入發(fā)光劑顯影，拍照后用Image J 計(jì)算灰度值，分析目的蛋白相對表達(dá)量。

1.3 數(shù)據(jù)處理

2 結(jié)果與分析

2.1 刺五加多糖對抑郁模型大鼠一般狀態(tài)的影響

本研究采用單籠孤養(yǎng)及慢性輕度不可知應(yīng)激刺激建立大鼠抑郁模型，該模型操作簡便、成本低廉、結(jié)果可靠，能夠很好地模擬抑郁癥患者情緒低落、樂趣降低、興趣缺乏及活動(dòng)減少等典型癥狀[24]。建模前，各組大鼠尋覓探查等自主活動(dòng)較多，皮毛光澤順滑，精神狀態(tài)良好；從建模第7 d 開始，模型對照組大鼠常蜷縮不動(dòng)，自主活動(dòng)減少，毛色晦暗無光澤，精神狀態(tài)逐漸變差；各給藥組大鼠較模型對照組自主活動(dòng)增加，精神狀態(tài)有不同程度改善。

2.2 刺五加多糖對抑郁模型大鼠抑郁行為的影響

敞箱實(shí)驗(yàn)、糖水偏好實(shí)驗(yàn)及強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)是評價(jià)抑郁行為的經(jīng)典實(shí)驗(yàn)，其中敞箱實(shí)驗(yàn)和強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)?zāi)軌蚍从承∈蟮男袨榻^望，而糖水偏好實(shí)驗(yàn)?zāi)芊从晨旄腥狈Τ潭萚25?26]。王冰梅等[19]發(fā)現(xiàn)，合歡花-遠(yuǎn)志單味藥及復(fù)合藥對均可以增加大鼠水平活動(dòng)次數(shù)和糖水偏好度，縮短游泳不動(dòng)時(shí)間，進(jìn)而改善慢性不可預(yù)知應(yīng)激大鼠抑郁樣行為。本研究結(jié)果同樣發(fā)現(xiàn)，模型對照組大鼠的水平活動(dòng)次數(shù)、糖水偏好度極顯著低于正常對照組（P＜0.01），而游泳不動(dòng)時(shí)間極顯著高于正常對照組（P＜0.01），表現(xiàn)出明顯的抑郁行為。與模型對照組比較，鹽酸氟西汀組及刺五加多糖低、高劑量組大鼠水平活動(dòng)次數(shù)、糖水偏好度極顯著增加（P＜0.01），而游泳不動(dòng)時(shí)間顯著降低（P＜0.05、P＜0.01）。與鹽酸氟西汀組比較，刺五加多糖低劑量組大鼠水平活動(dòng)次數(shù)及低、高劑量組糖水偏好度極顯著降低（P＜0.01），而游泳不動(dòng)時(shí)間顯著增加（P＜0.05、P＜0.01），見表1。以上結(jié)果表明，刺五加多糖具有改善抑郁模型大鼠抑郁行為的作用。

表1 刺五加多糖對抑郁模型大鼠抑郁行為的影響（±s，n=10）Table 1 Effects of ASPs on depressive behavior in depression model rats (±s, n=10)

表1 刺五加多糖對抑郁模型大鼠抑郁行為的影響（±s，n=10）Table 1 Effects of ASPs on depressive behavior in depression model rats (±s, n=10)

注：與 正常對照組相比，**表示P＜0.01 ；與 模型對照組相比，#表示P＜0.05，##表示P＜0.01 ； 與鹽酸氟西汀組相比，＆表示P＜0.05，＆＆表示P＜0.01；表2~表4同。

分組 劑量（mg/kg） 水平活動(dòng)次數(shù)（次） 糖水偏好度（%） 游泳不動(dòng)時(shí)間（s）正常對照組 / 52.55±6.42 83.37±8.63 45.23±4.41模型對照組 / 31.38±3.87** 40.24±5.11** 66.47±8.45**鹽酸氟西汀組 2.1 48.19±4.30## 65.88±6.09## 49.15±5.12##刺五加多糖低劑量組 50 37.27±4.75##＆＆ 47.90±4.52##＆＆ 59.91±7.58#＆＆刺五加多糖高劑量組 100 44.85±5.69## 51.67±6.64##＆＆ 54.03±5.31##＆

2.3 刺五加多糖對抑郁模型大鼠海馬組織結(jié)構(gòu)的影響

海馬組織與機(jī)體的情緒調(diào)節(jié)關(guān)系密切，研究發(fā)現(xiàn)，在抑郁模型動(dòng)物的海馬組織中常常表現(xiàn)出較明顯的病理損傷，而抗抑郁藥可以通過改善海馬組織病理損傷，減輕抑郁癥狀[27]。本研究分別采用HE 染色及尼氏染色檢測了刺五加多糖對抑郁模型大鼠海馬組織結(jié)構(gòu)的影響，結(jié)果見圖1。HE 染色結(jié)果顯示，正常對照組海馬組織細(xì)胞未見炎性浸潤、壞死等病理改變，細(xì)胞排列緊密，細(xì)胞形態(tài)及胞核完整，核仁清晰；模型對照組可見明顯炎性細(xì)胞浸潤、壞死等病理改變，細(xì)胞排列紊亂，結(jié)構(gòu)模糊，核固縮；鹽酸氟西汀組及刺五加多糖低、高劑量組炎性細(xì)胞浸潤、壞死等病理改變得到一定程度改善，且鹽酸氟西汀組改善效果更為明顯。尼氏染色結(jié)果顯示，正常對照組海馬組織染色均勻，尼氏體豐富，細(xì)胞排列整齊，胞核清晰；模型對照組尼氏體表達(dá)較低，細(xì)胞排列紊亂；鹽酸氟西汀組及刺五加多糖低、高劑量組尼氏體增多，細(xì)胞形態(tài)較完整，細(xì)胞狀態(tài)明顯好轉(zhuǎn)，且鹽酸氟西汀組效果更為明顯。馮楚鈺等[28]利用單籠孤養(yǎng)及慢性輕度不可知應(yīng)激刺激方法復(fù)制抑郁模型，發(fā)現(xiàn)刺激4周后，大鼠海馬組織出現(xiàn)炎性細(xì)胞浸潤、壞死等病理改變，與本實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致；而給予藥物治療后，海馬組織病理改變明顯減輕，進(jìn)而發(fā)揮抗抑郁作用。以上結(jié)果提示，刺五加多糖也可以通過減輕海馬組織病理改變，從而起到緩解抑郁行為作用。

圖1 HE 染色及尼氏染色檢測刺五加多糖對抑郁模型大鼠海馬組織結(jié)構(gòu)的影響（200×）Fig.1 Effects of ASPs on the structure of hippocampus in depression model rats evaluated by HE staining and Nissl staining （200×）

2.4 刺五加多糖對抑郁模型大鼠血清IL-1β、IL-6 及TNF-α水平的影響

炎癥反應(yīng)是機(jī)體的一種自我保護(hù)機(jī)制，可限制有害刺激對身體的損害；同時(shí)，炎癥反應(yīng)也是導(dǎo)致多種中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的重要原因，例如抑郁癥、癲癇及神經(jīng)退行性疾病等[29]。研究表明，炎癥因子如IL-1β、IL-6 和TNF-α參與抑郁的發(fā)病過程，抗抑郁藥作用后，抑郁癥患者血清中炎癥因子恢復(fù)正常水平[30]。刺五加多糖對刀豆蛋白A 誘導(dǎo)的小鼠免疫性肝損傷的保護(hù)作用主要與抗炎作用有關(guān)，可以降低該模型小鼠IL-1β及TNF-α水平[31]。在本研究中，造模28 d后與正常對照組比較，模型對照組大鼠血清IL-1β、IL-6 及TNF-α水平均極顯著增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；與模型對照組比較，鹽酸氟西汀組及刺五加多糖低、高劑量組大鼠血清IL-1β、IL-6 及TNF-α水平均顯著降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05、P＜0.01）；與鹽酸氟西汀組比較，刺五加多糖低、高劑量組大鼠血清IL-1β、IL-6 及TNF-α水平均極顯著增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），見表2。以上結(jié)果提示，刺五加多糖能夠降低抑郁模型大鼠血清炎癥因子的水平，其改善抑郁行為作用與抗炎作用有關(guān)。

表2 刺五加多糖對抑郁模型大鼠血清IL-1β、IL-6 及TNF-α水平的影響（±s，n=10）Table 2 Effects of ASPs on levels of serum IL-1β, IL-6 and TNF-αin depression model rats (±s, n=10)

表2 刺五加多糖對抑郁模型大鼠血清IL-1β、IL-6 及TNF-α水平的影響（±s，n=10）Table 2 Effects of ASPs on levels of serum IL-1β, IL-6 and TNF-αin depression model rats (±s, n=10)

分組 劑量（mg/kg） IL-1β（pg/mL） IL-6（pg/mL） TNF-α（pg/mL）正常對照組 / 12.93±1.47 5.74±0.61 44.23±5.46模型對照組 / 40.55±5.54** 71.31±8.70** 82.46±9.33**鹽酸氟西汀組 2.1 16.30±2.73## 13.54±1.18## 49.57±5.18##刺五加多糖低劑量組 50 27.58±3.45##＆＆ 42.96±5.43##＆＆ 73.79±6.51#＆＆刺五加多糖高劑量組 100 23.17±2.58##＆＆ 26.24±3.02##＆＆ 61.14±8.32##＆＆

2.5 刺五加多糖對抑郁模型大鼠海馬組織CAT、SOD 活性及MDA 水平的影響

抑郁癥發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，氧化應(yīng)激水平異常升高被認(rèn)為是關(guān)鍵因素之一，臨床及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)均證實(shí)，抑制升高的氧化應(yīng)激水平可減輕機(jī)體抑郁行為，是抑郁癥治療的重要策略之一[32?33]。機(jī)體內(nèi)CAT、SOD 等酶在體內(nèi)發(fā)揮重要的抗氧化作用，而MDA 水平可反映機(jī)體氧自由基含量[34]。研究[35]發(fā)現(xiàn)刺五加多糖具有保護(hù)氧糖剝奪誘導(dǎo)的神經(jīng)元氧化損傷作用，該作用與提高SOD 活性及降低MDA 水平有關(guān)。本研究結(jié)果同樣發(fā)現(xiàn)，與正常對照組比較，模型對照組大鼠海馬組織CAT、SOD 活性極顯著降低，MDA 水平極顯著增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；與模型對照組比較，鹽酸氟西汀組及刺五加多糖低、高劑量組大鼠海馬組織CAT、SOD 活性顯著增加，MDA水平極顯著降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05、P＜0.01）；與鹽酸氟西汀組比較，刺五加多糖低、高劑量組大鼠海馬組織CAT、SOD 活性顯著降低，MDA水平極顯著增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05、P＜0.01），見表3。以上結(jié)果提示，刺五加多糖改善抑郁模型大鼠抑郁行為的作用與抗氧化應(yīng)激作用有關(guān)。

表3 刺五加多糖對抑郁模型大鼠海馬組織CAT、SOD 活性及MDA 水平的影響（±s，n=10）Table 3 Effects of ASPs on CAT, SOD activities and MDA level of hippocampus in depression model rats (±s, n=10)

表3 刺五加多糖對抑郁模型大鼠海馬組織CAT、SOD 活性及MDA 水平的影響（±s，n=10）Table 3 Effects of ASPs on CAT, SOD activities and MDA level of hippocampus in depression model rats (±s, n=10)

分組 劑量（mg/kg）CAT（U/mg）SOD（U/mg）MDA（nmol/mg）正常對照組 / 11.30±1.48 71.62±8.55 6.12±0.81模型對照組 / 5.49±0.69** 32.87±4.61** 18.51±2.25**鹽酸氟西汀組 2.1 10.92±1.21## 63.02±7.28## 10.18±1.34##刺五加多糖低劑量組 50 6.34±0.83#＆＆ 37.86±4.83#＆＆ 15.64±2.08##＆＆刺五加多糖高劑量組 100 9.48±1.06##＆ 46.65±5.30##＆＆ 13.17±1.56##＆＆

2.6 刺五加多糖對抑郁模型大鼠海馬組織p-PI3K、p-Akt 及p-mTOR 蛋白表達(dá)的影響

在真核細(xì)胞中PI3K/Akt/mTOR 通路廣泛存在，參與神經(jīng)元細(xì)胞的生長、分化和發(fā)育過程，抑制PI3K/Akt/mTOR 通路的活性可引起神經(jīng)元損傷[36]。在單籠孤養(yǎng)及慢性輕度不可知應(yīng)激刺激誘導(dǎo)的抑郁模型中，PI3K、Akt 及mTOR 的磷酸化水平下調(diào)，而甘草素可以通過上調(diào)PI3K/Akt/mTOR 通路的活性減輕小鼠抑郁行為[37]。刺五加多糖激活PI3K/Akt通路的作用在糖尿病大鼠模型中同樣被證實(shí)，其可以增加該模型大鼠PI3K 及Akt 蛋白的磷酸化水平，進(jìn)而調(diào)節(jié)糖、脂代謝功能[18]。本研究通過Western blot法進(jìn)一步探討了刺五加多糖對抑郁模型大鼠海馬組織p-PI3K、p-Akt 及p-mTOR 蛋白表達(dá)的影響，結(jié)果見圖2 及表4。與正常對照組比較，模型對照組大鼠海馬組織p-PI3K、p-Akt 及p-mTOR 蛋白表達(dá)極顯著降低（P＜0.01），提示抑郁模型大鼠PI3K/Ak/mTOR通路的激活受到一定程度的抑制；與模型對照組比較，鹽酸氟西汀組及刺五加多糖低、高劑量組大鼠海馬組織p-PI3K、p-Akt 及p-mTOR 蛋白表達(dá)顯著增加（P＜0.05、P＜0.01）；與鹽酸氟西汀組比較，刺五加多糖低、高劑量組大鼠海馬組織p-PI3K、p-Akt 及p-mTOR 蛋白表達(dá)極顯著降低（P＜0.01）。以上結(jié)果表明，刺五加多糖可以激活抑郁模型大鼠PI3K/Ak/mTOR 通路。

圖2 Western blot 法檢測刺五加多糖對抑郁模型大鼠海馬組織p-PI3K、p-Akt 及p-mTOR 蛋白表達(dá)的影響Fig.2 Effects of ASPs on the p-PI3K, p-Akt and p-mTOR protein expressions of hippocampus in depression model rats evaluated by Western blot

表4 刺五加多糖對抑郁模型大鼠海馬組織p-PI3K、p-Akt 及p-mTOR 蛋白表達(dá)的影響（±s，n=10）Table 4 Effects of ASPs on p-PI3K, p-Akt and p-mTOR protein expressions of hippocampus in depression model rats (±s, n=10)

表4 刺五加多糖對抑郁模型大鼠海馬組織p-PI3K、p-Akt 及p-mTOR 蛋白表達(dá)的影響（±s，n=10）Table 4 Effects of ASPs on p-PI3K, p-Akt and p-mTOR protein expressions of hippocampus in depression model rats (±s, n=10)

分組 劑量（mg/kg） p-PI3K（PI3K） p-Akt（Akt） p-mTOR（mTOR）正常對照組 / 0.88±0.07 1.34±0.15 0.90±0.11模型對照組 / 0.37±0.04** 0.56±0.04** 0.23±0.03**鹽酸氟西汀組 2.1 0.75±0.08## 1.19±0.13## 0.81±0.09##刺五加多糖低劑量組 50 0.51±0.05##＆＆ 0.64±0.06#＆＆ 0.45±0.06##＆＆刺五加多糖高劑量組 100 0.63±0.08##＆＆ 0.92±0.10##＆＆ 0.66±0.05##＆＆

3 討論與結(jié)論

本研究采用單籠孤養(yǎng)及慢性輕度不可知應(yīng)激刺激建立大鼠抑郁模型，探討刺五加多糖對抑郁行為的影響及分子機(jī)制。首先，通過行為學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與模型對照組比較，刺五加多糖低、高劑量組大鼠水平活動(dòng)次數(shù)、糖水偏好度明顯增加，游泳不動(dòng)時(shí)間降低，且海馬組織結(jié)構(gòu)病理變化得到緩解，表明刺五加多糖具有改善抑郁模型大鼠抑郁行為作用。進(jìn)一步的研究證實(shí)，與模型對照組比較，刺五加多糖低、高劑量組大鼠IL-1β、IL-6、TNF-α及MDA 水平降低，CAT、SOD 活性及p-PI3K、p-Akt、p-mTOR 蛋白表達(dá)增加，表明刺五加多糖改善抑郁行為作用與調(diào)控PI3K/Akt/mTOR 通路及抗炎、抗氧化應(yīng)激作用有關(guān)。