苔干和竹筍提取物及其復(fù)配物的抗菌活性研究

陳志軒 華奕 陳學(xué)紅 文浩 孫會(huì)剛

摘 要：本文通過(guò)對(duì)提取溫度、提取時(shí)間、乙醇濃度及復(fù)配比例等一系列參數(shù)進(jìn)行單因素抑菌實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)苔干和竹筍的乙醇提取液對(duì)金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、枯草芽孢桿菌及蠟樣芽孢桿菌有良好的抑制作用。在單一變量為復(fù)配比例時(shí)，苔干占比越高，抑菌效果越好。

關(guān)鍵詞：苔干;蘆筍;提取物;抑菌效果

Study of Antibacterial Activity of Extracts from Dried Moss and Bamboo Shoots and Their Mixtures

CHEN Zhixuan， HUA Yi， CHEN Xuehong， WEN Hao， SUN Huigang*

（College of Food and Biological Engineering， Xuzhou University of Technology， Xuzhou 221018， China）

Abstract： In this paper， through a series of parameters such as extraction temperature， extraction time， ethanol concentration and compound proportion， the single factor antibacterial test with different compound proportion were carried out. It was determined that the ethanol extract of dried moss and bamboo shoots had a good inhibitory effect on Staphylococcus aureus， Escherichia coli， Bacillus subtilis and Bacillus cereus. When the single variable is the compound ratio， the higher the proportion of dry moss， the better the antibacterial effect.

Keywords： gongcai; asparagus; extrat; antibacterial effect

植物中抑菌物質(zhì)種類研究和應(yīng)用是當(dāng)代研究熱點(diǎn)之一，許多專家和學(xué)者對(duì)植物的抑菌效果進(jìn)行了大量研究，發(fā)現(xiàn)具有有效抑菌活性的植物可達(dá)1 400種[1-2]。其中，具有一定抑菌作用效果的次級(jí)代謝產(chǎn)物已經(jīng)達(dá)到了40多萬(wàn)種，這些次級(jí)代謝產(chǎn)物大致可分為黃酮類、生物堿類、多炔族類、有機(jī)酸類、酚類、甙族、木脂素和香豆素等[3]。

苔干有很高的營(yíng)養(yǎng)和保健價(jià)值。張雪香等[4]分析測(cè)定了苔干中含有大量糖類、酚類、生物堿及黃酮類物質(zhì)。甄清等[5]對(duì)苔干抗菌作用進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)研究，得出苔干85 ℃的醇提取液具有抑菌性質(zhì)，結(jié)果分析苔干的醇提取液中含黃酮類物質(zhì)。甄清等[6]利用苔干的丙酮、乙酸乙酯提取液進(jìn)行抑菌實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)苔干提取液對(duì)短帚霉菌、犬小孢子菌等各類菌種都可能具有一定的抑制效果，竹筍也具有良好的抑菌作用。高雪娟等[7]用竹筍殼提取物進(jìn)行抑菌試驗(yàn)，結(jié)果表明，提取物對(duì)于根霉、黑曲霉、釀酒酵母這3種天然真菌沒(méi)有明顯的抑制作用，但是對(duì)于大腸桿菌、蠟樣芽孢桿菌、枯草黃芽孢桿菌及金黃色葡萄球菌等菌種具有顯著的抑制效果。彭昕等[8]對(duì)雷竹筍總甾醇和總黃酮的抑菌活性進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)雷竹筍有機(jī)溶劑提取物對(duì)黑曲霉、金黃色葡萄球菌和大腸桿菌等都具有良好的抑制作用，其對(duì)細(xì)菌抑制效果大于真菌，對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌抑制效果大于革蘭氏陰性菌，并且總黃酮的抑菌效果通常比總甾醇的抑菌效果要更好。本文對(duì)提取溫度、提取時(shí)間、乙醇濃度和復(fù)配比例等一系列參數(shù)進(jìn)行單因素抑菌實(shí)驗(yàn)，探究苔干和竹筍的乙醇提取液對(duì)金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、枯草芽孢桿菌及蠟樣芽孢桿菌的抑制

作用。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

1.1.1 植物

苔干，購(gòu)于安徽亳州;竹筍，購(gòu)于四川樂(lè)山。

1.1.2 培養(yǎng)基

LB固體培養(yǎng)基：蒸餾水400 mL，瓊脂8 g，氯化鈉（NaCl）4 g，酵母提取物2 g，胰蛋白胨4 g，pH為7.4～7.6。肉湯瓊脂固體培養(yǎng)基：蒸餾水400 mL，瓊脂

7.2 g，氯化鈉（NaCl）6 g，胰蛋白胨4 g，牛肉膏6 g。葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基：蒸餾水400 mL，瓊脂8 g，氯化鈉（NaCl）2 g，胰蛋白胨6 g，葡萄糖8 g，牛肉膏0.2 g。

1.1.3 菌種

枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis），徐州工程學(xué)院;蠟樣芽孢桿菌（Bacillus cereus），徐州工程學(xué)院;大腸桿菌（Escherichia coli），徐州工程學(xué)院;金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus），徐州工程學(xué)院。

1.2 儀器與設(shè)備

FA2140N電子天平，上海精密科學(xué)儀器;YP402N電子天平，上海精密科學(xué)儀器;立式高壓蒸汽滅菌鍋，日本Tomy Digital Biology;循環(huán)水真空泵，上海啟前電子科技;旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器，上海亞榮生化儀器;SW-CJ-1FD型單人單面凈化工作臺(tái)，蘇州凈化設(shè)備;KQ5200DE型數(shù)控超聲波清洗機(jī)，昆山市超聲儀器;烘箱，上海群基實(shí)驗(yàn)儀器技術(shù);GS-700高速多功能粉碎機(jī)，永康市天祺盛世工貿(mào);BCD-539WT電冰箱，青島海爾;BCD-212KA電冰箱，青島海爾;恒溫恒濕箱，上海新苗醫(yī)療機(jī)械。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 提取液的制備

以乙醇為溶劑，用超聲波輔助提取法[9]提取。精確稱量總量10 g的苔干與竹筍粉末，分別按不同質(zhì)量比（7∶3、5∶5、3∶7）混合置于燒瓶中，分別倒入100 mL 50%的乙醇溶液，攪拌。調(diào)整超聲波清洗機(jī)參數(shù)至55 ℃、60 min。室溫靜置、抽濾濃縮，旋蒸至10 mL，制成1 g/mL的原液備用。

1.3.2 抑菌實(shí)驗(yàn)

將4種菌液分別稀釋至10-3與10-4兩個(gè)梯度待用。用移液槍分別吸取100 μL的10-3和10-4兩個(gè)梯度菌液于合適的培養(yǎng)基上，用涂布器將菌液涂布均勻并做好標(biāo)記。采用打孔法[10]在培養(yǎng)基上打好孔，將提取出來(lái)的抗菌活性物質(zhì)注射適量到孔內(nèi)。蓋上蓋子，將平板置于36.8 ℃的恒溫恒濕箱中，培養(yǎng)17 h后用游標(biāo)卡尺測(cè)定抑菌圈大小。

1.3.3 單因素實(shí)驗(yàn)

在提取過(guò)程中影響苔干和竹筍提取抗菌活性物質(zhì)的主要參數(shù)有4個(gè)：復(fù)配比例、提取時(shí)間、提取溫度以及乙醇濃度。本實(shí)驗(yàn)對(duì)每項(xiàng)參數(shù)進(jìn)行3個(gè)水平的單因素實(shí)驗(yàn)，提取時(shí)間：30 min、60 min、

90 min;提取溫度：45 ℃、55 ℃、65 ℃;乙醇濃度：30%、50%、70%，并分別用7∶3、5∶5、3∶7這3個(gè)復(fù)配比例來(lái)對(duì)每個(gè)參數(shù)進(jìn)行重新提取，再測(cè)量其抑菌圈大小。每種方法測(cè)定兩種（10-3和10-4）菌液濃度。

2 結(jié)果與分析

2.1 抑菌實(shí)驗(yàn)

當(dāng)乙醇濃度為50%、提取溫度為55 ℃、提取時(shí)間為60 min時(shí)，苔干與竹筍的提取液及其復(fù)配液對(duì)10-3與10-4兩濃度的4種菌均有不同程度抑制效果。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖1所示。

A—10-4的蠟樣芽孢桿菌;B—10-4的枯草芽孢桿菌;C—10-4的蠟樣芽孢桿菌;D—10-4的枯草芽孢桿菌;E—10-3的大腸桿菌;F—10-3的金黃色葡萄球菌;a—苔干與竹筍復(fù)配比例7∶3;b—純苔干提取液;c—均為無(wú)菌水;d—純竹筍提取液;e—竹筍復(fù)配比例5∶5;。

2.2 不同提取條件的抑菌效果

通過(guò)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)4種指示菌的實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致，以大腸桿菌為例得出的最佳提取條件，如表1和表2所示（表中數(shù)據(jù)為3次重復(fù)實(shí)驗(yàn)平均值）。綜合實(shí)驗(yàn)結(jié)果，提取時(shí)間為60 min，乙醇濃度為50%時(shí)，提取溫度65 ℃效果最好，在上述最優(yōu)提取條件下，7∶3這個(gè)復(fù)配比例效果最好。

2.3 復(fù)配比例對(duì)不同微生物的抑菌效果

由表3可知，在最優(yōu)提取條件下（提取時(shí)間

60 min、提取溫度65 ℃、乙醇濃度50%），苔干占比越高，抑菌效果越好，即最佳復(fù)配比均為7∶3。

3 結(jié)論

本研究以金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、枯草芽孢桿菌及蠟樣芽孢桿菌為指示菌，通過(guò)一系列單因素抑菌實(shí)驗(yàn)得到，乙醇作為提取溶劑時(shí)，苔干蘆筍最佳提取條件為提取時(shí)間60 min、提取溫度65 ℃以及乙醇濃度50%。在此條件下又進(jìn)一步以復(fù)配比為變量，發(fā)現(xiàn)苔干竹筍復(fù)配比為7∶3時(shí)對(duì)4種菌抑制效果最好。

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