BDNF、miR-381-3p、TXA2在抑郁癥中的表達(dá)及在烏靈膠囊干預(yù)效果評估中的價值

張 茹,李 萍,趙艷茹,楊 柳

(秦皇島市第一醫(yī)院 1.中醫(yī)科；2.營養(yǎng)科；3.心理科,河北 秦皇島066000)

抑郁癥為常見的慢性精神性疾病，臨床癥狀主要表現(xiàn)為情緒低落、行為缺乏主動和思維遲緩等，影響患者的生活質(zhì)量[1-2]。西藥是目前抑郁癥的主要治療手段，有些患者對西藥治療的耐受性和依從性較差，且治療后仍然有很多患者殘留認(rèn)知損害等[3]。烏靈膠囊是國家新發(fā)現(xiàn)的一種純中藥制劑，該藥多用于治療腦卒中等器質(zhì)性疾病伴發(fā)的抑郁狀態(tài)，關(guān)于抑郁癥的治療效果少有研究證實[4]。BDNF是神經(jīng)生長因子的家族成員之一，影響神經(jīng)元的生長、存活及誘導(dǎo)分化[5]。已有研究表明，miR-381-3p沉默可以保護(hù)神經(jīng)元，減輕抑郁癥對神經(jīng)元的損傷，很有可能成為治療抑郁的潛在靶點[6]。抑郁癥是一種與精神-神經(jīng)-免疫失調(diào)相關(guān)的疾病，而TXA2可以收縮血管和呼吸道平滑肌、刺激血小板活化，進(jìn)而影響抑郁癥[7]?；诖耍疚闹荚谘芯?，BDNF、miR-381-3p、TXA2在抑郁癥中的表達(dá)及在烏靈膠囊干預(yù)效果評估中的價值。

1 對象與方法

1.1 研究對象

本文選取于2020年3月-2021年3月在秦皇島第一醫(yī)院就診的50例抑郁癥患者為抑郁組，同時期在我院體檢的50例健康人為健康組，兩組患者年齡、性別、體質(zhì)量、收縮壓、舒張壓、空腹血糖均無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)，見表1。

表1 兩組患者一般資料比較

納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)符合美國精神病協(xié)會《精神障礙診斷與統(tǒng)計手冊(第4版)》[8]的診斷標(biāo)準(zhǔn)；(2)能夠理解和遵守研究要求；(3)漢密爾頓抑郁量表(Hamilton Depression Rating Scale，HAMD)評分≥17分；(4)近2周未患感染性、傳染性及過敏性疾?。?5)本文研究患者及其家屬均知情，簽署知情同意書，經(jīng)過我院倫理委員會批準(zhǔn)。

排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)腦器質(zhì)性精神障礙；(2)患有嚴(yán)重的軀體疾病或神經(jīng)系統(tǒng)疾病，近期外傷或近1周內(nèi)有感染或發(fā)熱者；(3)近3個月服用過影響認(rèn)知功能的藥物或激素類藥物；(4)處于哺乳期或妊娠期的女性患者。

1.2 治療方法

根據(jù)治療方式將抑郁組又分為對照治療組(23例)，烏靈膠囊治療組(27例)；對照治療組患者口服草酸艾司西酞普蘭(生產(chǎn)廠家山東京衛(wèi)制藥有限公司生產(chǎn)，批號：1308205，規(guī)格：5 mg/片) 10 mg/d，根據(jù)治療需要逐步調(diào)整劑量至10-20 mg/d。烏靈膠囊治療組在此基礎(chǔ)上加用烏靈膠囊(浙江佐力藥業(yè)股份有限公司，生產(chǎn)批號20120521，規(guī)格：0.33 g/粒)每次0.99 g，每天3次，兩組均治療8周。

1.3 指標(biāo)檢測

1.3.1實時熒光定量PCR檢測miR-381-3p、BDNF 采集所有研究對象入院第二天清晨空腹靜脈血5 ml，以2 000 r/min離心15 min分離血清，提取miR-381-3p、BDNF總RNA，對提取總RNA的純度、含量進(jìn)行檢測，隨后逆轉(zhuǎn)，逆轉(zhuǎn)錄處理后獲得cDNA，獲得cDNA后使用Primer5.0軟件設(shè)計引物，內(nèi)參U6。miR-381-3p引物序列：正義鏈：5’-TAATCTGACTACAAGGGCAAGCT-3’，反義鏈：5’-TATGGTTGTTCTGCTCTCTCTCTC-3’；BDNF引物序列：正義鏈：5’-CGTCGGATCCATGACCATCCTTACTATG-3’，反義鏈：5’-CGTCGATCCACTAGTACGCGTGATCCC-3’；內(nèi)參基因U6引物序列：正義鏈：5’-CTCGCTTCGGCAGCACA-3’，反義鏈：5’-AACGCTTCACGAATTTGCGT-3’,其余步驟按說明書嚴(yán)格進(jìn)行。采用2-△△Ct方法計算出需要檢測的miR-381-3p、BDNF相對表達(dá)量。

1.3.2放射免疫分析法檢測TXA2 抽取所有入選者的空腹靜脈血5 ml，取上清，采用放射免疫分析試劑盒(廠家：上海滬震實業(yè)有限公司，貨號：hz-10047)檢測TXA2表達(dá)，具體步驟嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行。

1.3.3檢測5-HIAA、NE、DA 兩組患者均采集入選第二天和治療后第二天清晨空腹靜脈血5 ml，以3 000 r/min離心10 min，半徑5 cm分離血清，置-25℃冰箱保存待測，5-HIAA、NE、DA的含量使用美國ESA公司生產(chǎn)的5600A型高效液相色譜-4通道庫侖化學(xué)檢測器測定，所需試劑盒購自上海西唐生物公司，嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行。

1.3.4療效評估[9]治療后所有患者填寫抑郁自評量表(Self-rating depression scale，SDS)，檢測5-HIAA、NE、DA水平，量表評分<53分、5-HIAA≥0.22 μmol/L，NE≥50 ng/L，DA≥424 nmol/24 h，則表示該藥有效，量表評分≥53分、5-HIAA<0.22 μmol/，NE<50 ng/L，DA<424 nmol/24 h則表示無效。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 BDNF、miR-381-3p相對表達(dá)及TXA2表達(dá)在兩組患者中的比較

如表2所示，健康組BDNF、miR-381-3p相對表達(dá)量高于抑郁組，TXA2表達(dá)低于抑郁組(P<0.05),烏靈膠囊治療組BDNF、miR-381-3p相對表達(dá)量高于對照治療組，TXA2表達(dá)低于對照治療組(P<0.05)。

表2 BDNF、miR-381-3p相對表達(dá)及TXA2表達(dá)在兩組患者中的比較

2.2 BDNF、miR-381-3p、TXA2表達(dá)與抑郁自評量表及抑郁癥相關(guān)指標(biāo)的分析

如表3所示，5-HIAA≥0.22，NE≥50，DA≥424，抑郁自評量表<53時BDNF、miR-381-3p相對表達(dá)量升高，TXA2表達(dá)降低(P<0.05)。5-HIAA<0.22，NE<50，DA<424，抑郁自評量表≥53時BDNF、miR-381-3p表達(dá)降低，TXA2表達(dá)升高(P<0.05)。

表3 BDNF、miR-381-3p、TXA2表達(dá)與抑郁自評量表及抑郁癥相關(guān)指標(biāo)的分析

2.3 BDNF、miR-381-3p、TXA2表達(dá)對烏靈膠囊治療效果的預(yù)測價值

如表4，與BDNF、miR-381-3p、TXA2單一預(yù)測相比，聯(lián)合預(yù)測對烏靈膠囊效果預(yù)測效能較高(P<0.05)。三項聯(lián)合檢測靈敏度、準(zhǔn)確度高于單一檢測(P<0.05)，見圖1。

圖1 BDNF、miR-381-3p、TXA2表達(dá)對烏靈膠囊治療效果的預(yù)測價值

表4 BDNF、miR-381-3p、TXA2表達(dá)對烏靈膠囊治療效果的預(yù)測價值

3 討論

抑郁癥的病理機(jī)制復(fù)雜，嚴(yán)重危害人類的身心健康。國內(nèi)外開展了許多關(guān)于抑郁癥發(fā)病機(jī)制的研究，研究方向主要涉及神經(jīng)遞質(zhì)、細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路、神經(jīng)-內(nèi)分泌系統(tǒng)、神經(jīng)元營養(yǎng)與調(diào)亡、神經(jīng)突觸重塑等[10]。目前有研究表明，烏靈膠囊可改善抑郁癥患者抑郁癥狀及各種軀體疾病伴發(fā)的抑郁狀態(tài)，且安全性良好[11]。

BDNF表達(dá)與抑郁癥的發(fā)生、發(fā)展有著密切聯(lián)系，通過接受抗抑郁治療可以增加該指標(biāo)的表達(dá)，同時BDNF受多種微小核糖核酸分子的調(diào)控[12]。本研究顯示，對于抑郁癥患者使用烏靈膠囊干預(yù)后，有效者BDNF表達(dá)量高于無效者，同時該因子對于抑郁癥具有一定的診斷價值，BDNF可以預(yù)測烏靈膠囊治療效果。究其原因，烏靈膠囊可增強(qiáng)谷氨酸酶活性，促進(jìn)腦部攝取谷氨酸、γ-氨基丁酸，增強(qiáng)大腦皮質(zhì)γ-氨基丁酸受體的活性，BDNF是突觸可塑性調(diào)節(jié)分子，其低表達(dá)可導(dǎo)致海馬神經(jīng)元萎縮和喪失，它還可以誘導(dǎo)谷氯酸釋放和樹突棘密度増加[13-14]。

本文研究結(jié)果表明，烏靈膠囊治療的有效患者miR-381-3p表達(dá)高于無效患者，同時該因子對于抑郁癥具有一定的診斷價值。烏靈膠囊具有益氣養(yǎng)神、健脾養(yǎng)心、安神解郁的作用，烏靈膠囊藥用成分主要為烏靈菌粉，同時含有賴氨酸、谷氨酸、γ-基丁酸等19種氨基酸，以及腺苷、多糖和鈣、鐵、鋅等多種礦物元素[15]。miR-381-3p參與了多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展，同時調(diào)控神經(jīng)干細(xì)胞增殖、分化，而BDNF作為miR-381-3p的靶向調(diào)控分子，其本身對神經(jīng)損傷和修復(fù)具有重要作用[16-17]。有研究表明，過表達(dá)miR-381-3p可以促進(jìn)BDNF相對表達(dá)，從而保護(hù)神經(jīng)元，減輕皮質(zhì)酮對神經(jīng)元的損傷，并且抑郁程度越重指標(biāo)表達(dá)越低[18]。

抑郁癥發(fā)病時大腦出現(xiàn)相應(yīng)的變化[19]。本研究中，對于抑郁癥患者使用烏靈膠囊干預(yù)后，有效患者TXA2表達(dá)低于無效患者。TXA2是血栓素合成酶催化前列腺素環(huán)內(nèi)過氧化物同分異構(gòu)化的產(chǎn)物，主要是由血小板、白細(xì)胞所分泌合成，過表達(dá)時可促使機(jī)體大量釋放腎上腺素，激活血小板，從而形成惡性循環(huán)，參與多種疾病的發(fā)生、發(fā)展[20-21]。有研究結(jié)果顯示，TXA2在抑郁癥患者的外周血中表達(dá)較高，隨著疾病的加重表達(dá)逐漸升高，猜測其可能與抑郁癥的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)，成為抗抑郁癥的潛在治療靶點[22]。

綜上所述，對于抑郁癥患者使用烏靈膠囊干預(yù)后，有效患者BDNF、miR-381-3p表達(dá)較高；TXA2表達(dá)較低，該變化與使用烏靈膠囊治療抑郁癥的療效有一定關(guān)系，三者聯(lián)合檢測對于抑郁癥具有診斷價值，對于烏靈膠囊治療效果有一定的預(yù)測價值，但是本文研究樣本較少，還需進(jìn)一步的探究。