基質(zhì)金屬蛋白酶-2 在不同病理類型的結(jié)直腸息肉患者中的表達(dá)及意義

辛遼遼 王一卓

結(jié)直腸息肉是一種常見的消化系統(tǒng)疾病，其中腺瘤性息肉（包括管狀腺瘤、絨毛管狀腺瘤、絨毛狀腺瘤等）屬于結(jié)直腸癌的癌前病變[1-3]。篩查癌前病變有助于預(yù)防腫瘤的發(fā)生，從而降低腫瘤的發(fā)病率和病死率。因此，盡早鑒定息肉的病理類型具有重要意義。目前主要采用糞便潛血試驗(yàn)、結(jié)腸鏡等方法篩查結(jié)直腸息肉，均存在一定的局限性，容易導(dǎo)致誤診和漏診，且結(jié)腸鏡是一項(xiàng)侵入性檢查。多項(xiàng)研究表明，基因表達(dá)在消化系統(tǒng)腫瘤及癌前病變的診斷中具有重要意義[4-6]。研究顯示，基質(zhì)金屬蛋白酶-2（MMP-2）在結(jié)直腸癌患者中表達(dá)水平升高，具有較高的診斷價(jià)值[7]。本研究檢測了MMP-2 在不同病理類型的結(jié)直腸息肉患者中的表達(dá)水平，并探討其在結(jié)直腸癌早期診斷中的價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2017 年3 月至2020 年2 月空軍軍醫(yī)大學(xué)第一附屬醫(yī)院收治的150 例結(jié)直腸息肉患者作為研究對(duì)象，包括炎性息肉36 例、增生性息肉33 例、管狀腺瘤30 例、絨毛管狀腺瘤27 例、絨毛狀腺瘤24 例；另選擇同期在該院就診的30 例結(jié)直腸癌患者，以及在該院體檢的30 名健康者（結(jié)腸黏膜正常）納入研究。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）年齡18～60 歲；（2）經(jīng)結(jié)腸鏡或手術(shù)及病理檢查診斷各組織類型；（3）受試者自愿參與研究，并簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）結(jié)直腸炎患者；（2）其他消化系統(tǒng)疾病患者；（3）意識(shí)障礙或精神疾病患者。各組患者的性別、年齡差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＞0.05），具有可比性（見表1）。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 組織中MMP-2 水平檢測

結(jié)直腸息肉和結(jié)直腸癌患者采用手術(shù)切除或結(jié)腸鏡下活體組織檢查的方式獲取病變結(jié)直腸組織標(biāo)本，健康體檢者采用結(jié)腸鏡下活體組織檢查的方式獲取正常結(jié)腸組織標(biāo)本。組織標(biāo)本離體后，立即用液氮速凍，并保存于－80 ℃的環(huán)境備用。使用免疫組織化學(xué)試劑盒[購自賽默飛世爾科技（中國）有限公司]檢測組織中MMP-2 的表達(dá)水平。H-E染色法的具體步驟如下：組織連續(xù)切片（厚度為4 μm）后，先浸入兩缸二甲苯10 min，再浸入兩缸無水乙醇3～5 min，之后進(jìn)行乙醇梯度脫水；蒸餾水潤洗2～3 次，加入碳酸鹽緩沖液，煮沸20 min，取出修復(fù)盒，自然冷卻至室溫。滴加一抗（1 ∶200），4 ℃孵育24 h，37 ℃恒溫箱復(fù)溫15 min，PBS 液沖洗3 次，每次3 min；滴加二抗，方法同一抗。使用DAB 液（購自北京梅科萬德生物科技有限公司）顯色，染色滿意后封片。隨機(jī)選取5 個(gè)視野，在高倍顯微鏡下計(jì)數(shù)（取均值）。

根據(jù)染色強(qiáng)度和陽性細(xì)胞所占比例計(jì)算各組患者組織中MMP-2 的陽性表達(dá)率。染色強(qiáng)度評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：未著色計(jì)0 分，淡黃色計(jì)1 分，棕黃色計(jì)2分，棕褐色計(jì)3 分。以細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性細(xì)胞，陽性細(xì)胞所占比例評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：無陽性細(xì)胞計(jì)0 分，＜25%計(jì)1 分，25%～50%（不含）計(jì)2 分，50%～75%計(jì)3 分，＞75%計(jì)4 分?？傇u(píng)分＝染色強(qiáng)度評(píng)分×陽性細(xì)胞所占比例評(píng)分，＜3 分為陰性，≥3 分為陽性[8]。

1.3 血清MMP-2 水平檢測

采用ELISA 法檢測各組患者血清MMP-2 的表達(dá)水平。所有受試者于晨起空腹?fàn)顟B(tài)下，抽取肘部靜脈血10 mL，以3 000 r/min 的轉(zhuǎn)速離心15 min，分離血清，置于－20 ℃環(huán)境待測。使用ELISA 試劑盒（購自上海哈靈生物科技有限公司）檢測血清MMP-2 的表達(dá)水平，嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。

1.4 觀察指標(biāo)

記錄各組患者組織中MMP-2 的陽性表達(dá)率及血清MMP-2 的表達(dá)水平。以病理診斷作為標(biāo)準(zhǔn)，計(jì)算血清MMP-2 水平診斷結(jié)直腸癌的敏感度、特異度和準(zhǔn)確率。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

應(yīng)用SPSS 21.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)數(shù)資料以例（%）表示，多組間比較釆用秩和檢驗(yàn)，兩組間比較采用χ2檢驗(yàn)；計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，多組間比較采用方差分析，兩組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。采用Pearson 相關(guān)系數(shù)分析連續(xù)性變量的相關(guān)性。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組織中MMP-2 的陽性表達(dá)率

正常結(jié)腸組織、炎性息肉、增生性息肉中MMP-2 表達(dá)為陰性。管狀腺瘤、絨毛管狀腺瘤、絨毛狀腺瘤、結(jié)直腸癌組織中MMP-2 的陽性表達(dá)率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F＝46.841，P＜0.05）。管狀腺瘤與絨毛管狀腺瘤中MMP-2 的陽性表達(dá)率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2＝2.130，P＝0.144），絨毛管狀腺瘤與絨毛狀腺瘤中MMP-2 的陽性表達(dá)率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2＝0.377，P＝0.539）。絨毛狀腺瘤中MMP-2 的陽性表達(dá)率高于管狀腺瘤，結(jié)直腸癌組織中MMP-2 的陽性表達(dá)率高于管狀腺瘤、絨毛管狀腺瘤及絨毛狀腺瘤，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.05）。見表2。

表2 各組織中MMP-2 的陽性表達(dá)率

2.2 不同病理類型的結(jié)直腸息肉患者的血清MMP-2 表達(dá)水平

結(jié)果表明，不同病理類型的結(jié)直腸息肉患者的血清MMP-2 表達(dá)水平相比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F＝186.954，P＝0.000）。與健康者比較，炎性息肉、增生性息肉、管狀腺瘤、絨毛管狀腺瘤、絨毛狀腺瘤、結(jié)直腸癌患者的血清MMP-2 表達(dá)水平均顯著升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.001）。與炎性息肉者比較，絨毛管狀腺瘤、絨毛狀腺瘤、結(jié)直腸癌患者的血清MMP-2 表達(dá)水平均明顯升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.001）。與增生性息肉者比較，絨毛管狀腺瘤、絨毛狀腺瘤、結(jié)直腸癌患者的血清MMP-2 表達(dá)水平均明顯升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.001）。與管狀腺瘤者比較，絨毛管狀腺瘤、絨毛狀腺瘤、結(jié)直腸癌患者的血清MMP-2 表達(dá)水平均升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.05）。結(jié)直腸癌患者的血清MMP-2 表達(dá)水平高于絨毛管狀腺瘤者及絨毛狀腺瘤者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.001）。見表3。

表3 不同病理類型的患者血清中MMP-2 的表達(dá)水平比較

2.3 血清MMP-2 水平診斷結(jié)直腸癌的價(jià)值

30 例結(jié)直腸癌患者通過結(jié)腸鏡下活體組織病理檢查或手術(shù)切除標(biāo)本病理檢查確診。以病理診斷為標(biāo)準(zhǔn)，血清MMP-2 水平診斷結(jié)直腸癌的敏感度為83.33%，特異度為91.11%，準(zhǔn)確率為90.00%。見表4。

表4 血清MMP-2 水平診斷結(jié)直腸癌的價(jià)值/例

3 討論

結(jié)直腸息肉可分為炎性息肉、增生性息肉、腺瘤性息肉等，其與結(jié)直腸癌密切相關(guān)[9]。近年來，隨著人們飲食結(jié)構(gòu)的改變及醫(yī)療技術(shù)的發(fā)展，結(jié)直腸息肉的檢出率呈逐年增高趨勢。準(zhǔn)確鑒別結(jié)直腸息肉的類型對(duì)于預(yù)防惡變具有重要意義。以往臨床上多采用結(jié)腸鏡下活體組織檢查作為鑒別方法，但因具有侵入性，導(dǎo)致患者依從性較差，無法進(jìn)行大規(guī)模的篩查工作。隨著分子遺傳學(xué)技術(shù)的發(fā)展，基因篩查技術(shù)已被廣泛應(yīng)用于結(jié)直腸癌的診斷中，其有助于評(píng)估患者的病變情況。

MMP-2 基因是MMP基因家族成員之一，位于16q12.2，包括17 個(gè)外顯子，其編碼蛋白主要降解Ⅳ型膠原，是腫瘤浸潤、轉(zhuǎn)移過程中的病理學(xué)基礎(chǔ)[10]。多項(xiàng)研究表明，腫瘤患者中MMP-2 呈高表達(dá)，可誘導(dǎo)新生血管生成及血管內(nèi)皮細(xì)胞遷移，從而促進(jìn)腫瘤的血管生成、侵襲及轉(zhuǎn)移[11-13]。目前關(guān)于該基因在癌前病變中表達(dá)情況的報(bào)道較少。本研究結(jié)果表明，在正常結(jié)腸組織、炎性息肉、增生性息肉中MMP-2 表達(dá)為陰性；而在腺瘤性息肉、結(jié)直腸癌組織中MMP-2 表達(dá)為陽性，且隨著疾病進(jìn)展，MMP-2 的陽性表達(dá)率呈升高趨勢。這與之前的研究報(bào)道相符[14-16]。此外，本研究結(jié)果還顯示，血清MMP-2 水平在正常結(jié)腸組織、結(jié)直腸息肉、結(jié)直腸癌組織中呈升高趨勢，且血清MMP-2 水平診斷結(jié)直腸癌的敏感度為83.33%，特異度為91.11%，準(zhǔn)確率為90.00%。該結(jié)果提示血清MMP-2 水平在結(jié)直腸癌的早期診斷中具有較高價(jià)值。