胃癌患者外周血中髓源抑制性細(xì)胞表達(dá)及預(yù)后的多因素分析

周穎昊 劉寒江 周子博

（鄭州市骨科醫(yī)院，河南 鄭州 450000）

胃癌是臨床常見的消化道惡性腫瘤之一，由于胃癌早期無明顯癥狀，患者確診時大多已發(fā)展到疾病中晚期，經(jīng)手術(shù)及放化療治療可取得一定效果，但5年生存率仍然不高，這與抑制腫瘤免疫應(yīng)答的多種因素有關(guān)[1]。近些年，在小鼠模型及多種人類腫瘤中均發(fā)現(xiàn)有髓源抑制性細(xì)胞（Myeloid-derived suppressor cells，MDSCs），MDSCs是一種未成熟的髓細(xì)胞，其被募集到外周血后激活，發(fā)揮免疫抑制作用，有利于腫瘤細(xì)胞逃避機(jī)體免疫系統(tǒng)。本研究采用流式細(xì)胞術(shù)分析胃癌及健康者外周血MDSCs水平，探討其與臨床預(yù)后的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料：選取2015年1月至2017年1月在本院就診的42例胃癌患者作為胃癌組，患者均為經(jīng)胃鏡活檢或手術(shù)病理確診的初診患者。其中男31例，女11例，年齡41~82歲，平均（64.12±9.32）歲，根據(jù)TNM分期標(biāo)準(zhǔn)[2]：ⅠA、ⅠB期（早期）胃癌9例，ⅡA~Ⅳ期（中晚期）胃癌33例。另選取同期30例體檢健康者作為健康對照組，入組者均無腫瘤家族史，且肝腎功能正常。其中男19例，女11例，年齡38~81歲，平均（62.38±8.25）歲。兩組性別、年齡相似（P>0.05），具有可比性。本研究經(jīng)本院倫理委員會批準(zhǔn)同意。

1.2 流式細(xì)胞術(shù)分析MDSCs：采集受試者外周血2 mL并進(jìn)行EDTA抗凝處理，將APC標(biāo)記的CD11B單克隆抗體和PE-Cy5標(biāo)記的CD33單克隆抗體各0.25μg加入25μL外周血中，低溫環(huán)境下避光孵育0.5h，然后加入1mL紅細(xì)胞裂解液，在37℃溫箱孵育10min，離心重懸后，采用流式細(xì)胞儀檢測分析，記錄MDSCs占單核樣細(xì)胞百分比。根據(jù)MDSCs比例進(jìn)行分組，低于MDSCs比例中位數(shù)的患者為MDSCs低表達(dá)組，高于MDSCs比例中位數(shù)的患者為MDSCs高表達(dá)組。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析：運(yùn)用SPSS 20.0軟件分析數(shù)據(jù)，計量資料比較行獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，采用Kaplan-Meier法進(jìn)行生存分析，組間比較采用Log-rank檢驗(yàn)，多因素分析采用Cox多因素分析模型，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組MDSCs表達(dá)情況比較：對胃癌組和健康組外周血樣本進(jìn)行檢測，結(jié)果顯示胃癌組患者外周血中MDSCs比例為（2.58±0.69）%，健康組外周血中MDSCs比例為（0.61±0.19）%，胃癌組MDSCs比例高于健康組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），詳見圖1。

圖1 流式細(xì)胞術(shù)分析胃癌組和健康組外周血MDSCs表達(dá)情況

2.2 外周血MDSCs表達(dá)與胃癌病理特征的關(guān)系：外周血MDSCs比例高低與性別、年齡、腫瘤大小、分化程度、腫瘤浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關(guān)（P>0.05），與腫瘤分期有關(guān)（P<0.05），詳見表1。

表1 外周血MDSCs表達(dá)與胃癌病理特征的關(guān)系（±s）

表1 外周血MDSCs表達(dá)與胃癌病理特征的關(guān)系（±s）

臨床資料 n MDSCs(%,images/BZ_37_977_783_993_820.png±s)t值 P值性別 男 31 3.20±0.72 1.179 0.245女 11 3.51±0.83年齡(歲) ＞60 25 3.55±1.08 2.011 0.051≤60 17 2.94±0.76腫瘤大小(cm) ＞5 22 3.46±0.77 1.396 0.171≤5 20 3.14±0.71分化程度 低分化 12 3.76±0.82 1.837 0.074中高分化 30 3.19±0.94腫瘤分期 早期 9 1.85±0.62 5.915 0.000中晚期 33 4.47±1.28腫瘤浸潤深度 T1+T2 11 2.81±1.04 1.851 0.072 T3+T4 31 3.58±1.23淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移 無 7 2.74±1.01 1.629 0.111有 35 3.62±1.35

2.3 外周血MDSCs表達(dá)與預(yù)后的關(guān)系：根據(jù)MDSCs比例進(jìn)行分組，MDSCs低表達(dá)組20例，MDSCs高表達(dá)組22例。Kaplan-Meier法生存分析顯示，MDSCs高表達(dá)組中位生存期為18個月，3年生存率為21.24%，MDSCs低表達(dá)組中位生存期為37個月，3年生存率為43.16%，兩組生存曲線差異明顯（P<0.05），詳見圖2。

圖2 Kaplan-Meier方法分析MDSCs表達(dá)與預(yù)后的關(guān)系

2.4 胃癌預(yù)后單因素分析：經(jīng)單因素分析，分化程度、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及MDSCs高表達(dá)均是胃癌預(yù)后的影響因素（P<0.05），詳見表2。

表2 胃癌預(yù)后影響因素的Cox單因素分析

2.5 胃癌預(yù)后多因素分析：經(jīng)多因素分析，臨床分期、化療、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及MDSCs高表達(dá)是影響胃癌預(yù)后的獨(dú)立危險因素（P<0.05），詳見表3。

表3 胃癌預(yù)后影響因素的Cox多因素分析

3 討論

在腫瘤微環(huán)境中，抑制性細(xì)胞群體在介導(dǎo)腫瘤免疫耐受中發(fā)揮重要作用，MDSCs作為一種新發(fā)現(xiàn)的抑制性細(xì)胞群體，可顯著抑制腫瘤免疫應(yīng)答，受到越來越多的重視。在動物模型中，MDSCs數(shù)量隨著腫瘤進(jìn)展而迅速增多，在脾臟中水平可達(dá)到20%以上，并可在淋巴組織、腫瘤組織中浸潤。MDSCs在小鼠體內(nèi)的研究較多，其表達(dá)的分子標(biāo)志物已得到廣泛的認(rèn)證，都表達(dá)GR-1和CD11b分子，依據(jù)細(xì)胞形態(tài)可分為單核MDSCs和多核MDSCs。健康成年鼠中，僅骨髓中存在大量的MDSCs，外周血和脾臟中少于4%，腫瘤組織中大約有5%[3]。在人類腫瘤中，同樣發(fā)現(xiàn)MDSCs的迅速擴(kuò)增，是腫瘤免疫逃逸的重要機(jī)制之一[4]。

許多惡性腫瘤患者外周血中MDSCs水平均表現(xiàn)異常。如張勇超[5]等人發(fā)現(xiàn)，術(shù)前直腸癌患者外周血MDSCs比例（3.52±0.68）%，較健康組的（0.92±0.21）%明顯升高，且MDSCs比例升高可促進(jìn)腫瘤進(jìn)展，提示預(yù)后不佳。周其趙等[6]對前列腺癌與健康者外周血MDSCs分布情況，結(jié)果顯示前列腺癌患者外周血MDSCs比例為6.5%，顯著高于健康組。本研究采用流式細(xì)胞術(shù)分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)，胃癌組MDSCs比例高于健康組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，提示胃癌患者外周血MDSCs比例明顯升高，MDSCs可能與胃癌的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。進(jìn)一步分析，發(fā)現(xiàn)外周血MDSCs比例高低與腫瘤分期相關(guān)，MDSCs比例越高，腫瘤分期越晚，提示MDSCs水平在一定程度上可作為胃癌臨床分期的參考指標(biāo)。

本研究結(jié)果顯示，MDSCs高表達(dá)組中位生存期明顯短于MDSCs低表達(dá)組，MDSCs高表達(dá)組3年生存率明顯低于MDSCs低表達(dá)組，提示MDSCs比例可能成為胃癌生存率預(yù)測指標(biāo)之一。為了進(jìn)一步探討MDSCs是否是胃癌預(yù)后的獨(dú)立影響因素，本研究將其納入Cox模型進(jìn)行多因素分析，結(jié)果證實(shí)MDSCs與胃癌預(yù)后密切相關(guān)。正常情況下，MDSCs可分化為巨噬細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞、中性粒細(xì)胞等；在病理情況下，MDSCs可募集到外周血或病變部位，并進(jìn)行擴(kuò)增、活化，介導(dǎo)炎癥反應(yīng)、降解基質(zhì)酶、新生血管生成、免疫耐受等過程。鑒于此，抑制MDSCs擴(kuò)增及活化，同時促進(jìn)MDSCs分化為成熟的巨噬細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞、中性粒細(xì)胞為治療腫瘤的一種新途徑。有體外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，全反式維甲酸可促進(jìn)MDSCs分化，用其治療癌癥患者可有效降低MDSCs數(shù)量，進(jìn)而提高機(jī)體免疫應(yīng)答能力。另外，本研究發(fā)現(xiàn)臨床分期、化療、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及MDSCs高表達(dá)是影響胃癌預(yù)后的獨(dú)立危險因素，化療的應(yīng)用可延長胃癌患者的生存時間，其作為胃癌患者的保護(hù)因素應(yīng)獲得臨床足夠的重視。

綜上所述，MDSCs存在于胃癌患者外周血中，并在外周血中進(jìn)行擴(kuò)增，其水平的增加可參與胃癌進(jìn)展，影響胃癌預(yù)后，逆轉(zhuǎn)MDSCs免疫抑制作用將增強(qiáng)腫瘤免疫，可能成為潛在的新治療靶點(diǎn)。