基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)探討四神煎治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的作用機(jī)制*

付靜思，姜泉，夏聰敏，但文超，鞏勛，岳銘，唐曉頗

1.中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院廣安門醫(yī)院，北京 100053； 2.北京中醫(yī)藥大學(xué)，北京 100029

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis，RA)是以關(guān)節(jié)疼痛、變形、功能損傷為主要臨床癥狀的系統(tǒng)性自身免疫性疾病，由于其高致殘率和多臟器損害而嚴(yán)重影響患者的身心健康[1]。目前，西醫(yī)對(duì)RA的治療以控制炎癥、調(diào)節(jié)免疫功能為主，臨床主要使用的藥物有非甾體類抗炎藥(nonsteroidal anti-inflammatory drugs，NSAIDS)、糖皮質(zhì)激素、抗風(fēng)濕藥(disease-modifying antirheumatic drugs，DMARDs)和生物制劑等。然而，這些藥物長(zhǎng)期應(yīng)用可引起肝腎功能損害、胃腸道不適、骨質(zhì)疏松等多種不良反應(yīng)[2]。臨床實(shí)踐證實(shí)，中藥復(fù)方治療RA具有療效確切、不良反應(yīng)小的特點(diǎn)。四神煎作為調(diào)治氣陰兩虛型RA的常用方[3]，有益氣養(yǎng)陰、祛風(fēng)通絡(luò)、清熱解毒之功效，其最早記錄于清·鮑相墩《驗(yàn)方新編·兩膝疼痛》，全方由生黃芪(半斤)、遠(yuǎn)志(三兩)、牛膝(三兩)、石斛(四兩)、金銀花(二兩)組成，用以治療鶴膝風(fēng)。近年來，臨床以四神煎為基本方加減治療RA取得滿意的療效。名老中醫(yī)岳美中先生善用四神煎治療關(guān)節(jié)炎，并在《岳美中論醫(yī)集》中稱贊四神煎“隨治隨效”；馮興華教授重視專病專方，推崇應(yīng)用四神煎專治氣陰兩傷兼有瘀血、痰濁、濕熱阻絡(luò)之RA[4]。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明，四神煎聯(lián)合甲氨蝶呤(methotrexate，MTX)對(duì)RA的作用效果較單用MTX更佳[5]；不同劑量的四神煎湯劑均可緩解佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠足部腫脹，顯著降低佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠血清炎癥因子的水平，且可以改善肝腎功能，作用效果優(yōu)于陽(yáng)性對(duì)照藥雷公藤多苷片[6]。然而，目前關(guān)于四神煎的物質(zhì)基礎(chǔ)及其治療RA的作用機(jī)制仍未闡明。

網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)是基于系統(tǒng)生物學(xué)、計(jì)算機(jī)技術(shù)、藥理學(xué)、醫(yī)學(xué)等有機(jī)組合的新興學(xué)科?；谏镄畔W(xué)，構(gòu)建“疾病-靶點(diǎn)-藥物”的多級(jí)網(wǎng)絡(luò)，分析它們之間的關(guān)聯(lián)，進(jìn)而在蛋白質(zhì)、分子和基因水平上明確藥物對(duì)疾病的作用機(jī)制[7]。本研究采用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法，獲取四神煎組方中藥的主要活性成分，分析其治療RA的主要作用靶點(diǎn)及相關(guān)通路，從物質(zhì)基礎(chǔ)和分子水平探索四神煎治療RA的作用機(jī)制，為四神煎的臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 四神煎活性成分及其相關(guān)靶點(diǎn)篩選采用中醫(yī)藥百科全書數(shù)據(jù)庫(kù)(encyclopedia of traditional chinese medicine，ETCM)[8]、中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)和分析平臺(tái)(traditional chinese medicine systems pharmacology database and analysis platform，TCMSP)[9]檢索并獲取四神煎組方中藥(黃芪、金銀花、牛膝、石斛、遠(yuǎn)志)的化學(xué)成分，并結(jié)合文獻(xiàn)進(jìn)行篩選、補(bǔ)充。將所得到的化學(xué)成分名稱輸入Pubchem數(shù)據(jù)庫(kù)(https：//pubchem.ncbi.nlm.nih.gov)進(jìn)行檢索，獲得化學(xué)成分的SMILES結(jié)構(gòu)式及2D結(jié)構(gòu)，導(dǎo)入Swiss ADME數(shù)據(jù)庫(kù)，以胃腸吸收(gatrointestinal absortion)結(jié)果為“HIGH”，且五種類藥性(lipinski、ghose、veber、egan、muegge)結(jié)果中有2個(gè)及2個(gè)以上是“YES”為標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行篩選，所得化合物即為活性化合物。將篩選后的活性化合物的SMILES結(jié)構(gòu)式或2D結(jié)構(gòu)導(dǎo)入Swiss Target Prediction數(shù)據(jù)庫(kù)[10]，研究對(duì)象設(shè)置為人源基因，篩選出置信度(probability)≥0.6的靶點(diǎn)。將得到的靶點(diǎn)去除重復(fù)后，導(dǎo)入U(xiǎn)niversal Protein(Uniprot)數(shù)據(jù)庫(kù)[11]規(guī)范靶點(diǎn)名稱，最終獲得藥物相關(guān)靶點(diǎn)。

1.2 RA疾病靶點(diǎn)篩選以“rheumatoid arthritis”作為關(guān)鍵詞，在人類基因數(shù)據(jù)庫(kù)(Gencards，https：//www.genecards.org)[12]、在線人類孟德爾遺傳數(shù)據(jù)庫(kù)(online mendelian inheritance in man，OMIM，http：//www.omim.org)、治療靶標(biāo)數(shù)據(jù)庫(kù)(therapeutic target database，TTD，http：//bidd.nus.edu.sg/group/cjttd)[13]及DrugBank數(shù)據(jù)庫(kù)(https：//www.drugbank.ca)[14]中檢索RA的潛在靶點(diǎn)。將從4個(gè)數(shù)據(jù)庫(kù)中獲得的靶點(diǎn)去除重復(fù)后，導(dǎo)入U(xiǎn)niprot數(shù)據(jù)庫(kù)規(guī)范靶點(diǎn)名稱，最終獲得RA疾病靶點(diǎn)。

1.3 “藥物-疾病”共同靶點(diǎn)的獲取及蛋白互作(protein protein interaction，PPI)網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建將四神煎活性成分相關(guān)靶點(diǎn)及RA疾病靶點(diǎn)導(dǎo)入生物信息學(xué)與進(jìn)化基因組學(xué)(Bioinformatics & Evolutionary Genomics)在線軟件作圖工具平臺(tái)(http：//bioinformatics.psb.ugent.be/webtools/Venn/)進(jìn)行映射，獲得“藥物-疾病”共同靶點(diǎn)，即為四神煎活性成分治療RA的關(guān)鍵靶點(diǎn)，并繪制韋恩圖(Venn diagram)。應(yīng)用String 11.0數(shù)據(jù)庫(kù)(https：//string-db.org)[15]分析“藥物-疾病”共同靶點(diǎn)之間的作用關(guān)系，設(shè)定Organism為“Homo sapiens”，最小互相作用閾值(minimum required interaction score)為“highest confidence(>0.9)”，同時(shí)隱藏網(wǎng)絡(luò)中的無關(guān)聯(lián)節(jié)點(diǎn)(hide disconnected nodes in the network)，得到PPI網(wǎng)絡(luò)。

1.4 基因本體(gene ontology，GO)生物功能分析和京都基因與基因組百科全書(kyoto encyclopedia of genes and genomes，KEGG) 通路富集分析將“藥物-疾病”共同靶點(diǎn)導(dǎo)入Metascape平臺(tái)(https：//metascape.org/)[16]，分別進(jìn)行基因本體(gene ontology，GO)生物功能分析和京都基因與基因組百科全書(kyoto encyclopedia of genes and genomes，KEGG) 通路富集分析，設(shè)置P<0.01，將獲得的數(shù)據(jù)結(jié)果應(yīng)用微生信平臺(tái)(http：//www.bioinformatics.com.cn)進(jìn)行可視化，并將排行前20的條目繪制GO生物功能分析柱狀圖和KEGG通路富集分析氣泡圖。

1.5 “藥物成分-靶點(diǎn)-信號(hào)通路”網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建應(yīng)用Cytoscape 3.7.1軟件構(gòu)建“藥物成分-靶點(diǎn)-信號(hào)通路”網(wǎng)絡(luò)，然后應(yīng)用網(wǎng)絡(luò)分析儀(network analyzer)功能獲得各成分、靶點(diǎn)的網(wǎng)絡(luò)拓?fù)鋮?shù)，獲得四神煎發(fā)揮治療RA作用的重要活性成分及核心靶點(diǎn)。

2 結(jié)果

2.1 四神煎活性成分及其相關(guān)靶點(diǎn)通過ETCM、TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)并結(jié)合文獻(xiàn)檢索獲得四神煎化學(xué)成分，經(jīng)Swiss ADME數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行篩選后，共獲得66個(gè)四神煎活性成分，其中金銀花17個(gè)、黃芪16個(gè)、牛膝16個(gè)、遠(yuǎn)志9個(gè)、石斛8個(gè)，去除五味藥物中重復(fù)成分后，最終獲得槲皮素(quercetin)、木犀草素(luteolin)、山柰酚(kaempferol)、漢黃芩素(wogonin)等60個(gè)四神煎活性成分。將獲得的60個(gè)活性成分的SMILES結(jié)構(gòu)式或2D結(jié)構(gòu)式上傳至Swiss Target Prediction數(shù)據(jù)庫(kù)，預(yù)測(cè)得到藥物作用靶點(diǎn)，去除重復(fù)靶點(diǎn)后，共得到四神煎活性成分相關(guān)靶點(diǎn)353個(gè)。見表1。

表1 四神煎活性成分信息

表1 四神煎活性成分信息

2.2 RA疾病靶點(diǎn)以“rheumatoid arthritis”作為關(guān)鍵詞，在GeneCards、OMIM、TTD、DrugBank四個(gè)數(shù)據(jù)庫(kù)中分別檢索得到1084個(gè)、45個(gè)、128個(gè)、151個(gè)RA的潛在靶點(diǎn)。去除重復(fù)靶點(diǎn)后，將潛在靶點(diǎn)在Uniprot數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行基因名稱規(guī)范，共獲得1277個(gè)RA潛在靶點(diǎn)。

2.3 “藥物-疾病”共同靶點(diǎn)及PPI網(wǎng)絡(luò)應(yīng)用Bioinformatics & Evolutionary Genomics在線平臺(tái)將353個(gè)四神煎活性成分靶點(diǎn)與1 277個(gè)RA疾病靶點(diǎn)進(jìn)行映射，并繪制Venn圖，最終得到“藥物-疾病”共同靶點(diǎn)151個(gè)。將獲得的151個(gè)“藥物-疾病”共同靶點(diǎn)上傳至String 11.0數(shù)據(jù)庫(kù)，構(gòu)建PPI網(wǎng)絡(luò)，該網(wǎng)絡(luò)包含151個(gè)節(jié)點(diǎn)和616條邊。見圖1，圖2。

圖1 “藥物-疾病”共同靶點(diǎn)Venn圖

2.4 GO生物功能和KEGG 通路富集分析將151個(gè)“藥物-疾病”共同靶點(diǎn)導(dǎo)入Metascape平臺(tái)，進(jìn)行GO生物功能分析和KEGG通路富集分析，以P<0.01為主要篩選標(biāo)準(zhǔn)，獲得GO生物功能條目 2 322 條，其中生物過程(biological processes，BP)2 089 條，主要涉及細(xì)胞因子介導(dǎo)的信號(hào)通路(cytokine-mediated signaling pathway)、對(duì)脂多糖的應(yīng)答(response to lipopolysaccharide)、對(duì)細(xì)菌源分子的應(yīng)答(response to molecule of bacterial origin)、對(duì)有毒物質(zhì)的應(yīng)答(response to toxic substance)、對(duì)細(xì)菌的應(yīng)答(response to bacterium)條；細(xì)胞組分(cellular components，CC)79條，主要涉及膜筏(membrane raft)、質(zhì)膜筏(plasma membrane raft)、囊腔(vesicle lumen)、細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix)、膜微區(qū)(membrane microdomain)等；分子功能(molecular functions，MF)154條，主要涉及細(xì)胞因子受體結(jié)合(cytokine receptor binding)、核受體活性(nuclear receptor activity)、細(xì)胞因子活性(cytokine activity)、氧化還原酶活性(oxidoreductase activity)、類固醇激素受體活性(steroid hormone receptor activity)等。KEGG通路富集分析共獲得174個(gè)信號(hào)通路，主要涉及白細(xì)胞介素-17信號(hào)通路(interleukin-17 signaling pathway)、腫瘤壞死因子信號(hào)通路(tumor necrosis factor signaling pathway)、Toll樣受體信號(hào)通路(Toll-like receptor signaling pathway)等。見圖3，圖4及表2。

圖3 KEGG通路富集分析氣泡圖

圖4 GO分析柱形圖

表2 KEGG通路富集分析結(jié)果

2.5 “藥物成分-靶點(diǎn)-通路”網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建應(yīng)用Cytoscape 3.7.1軟件構(gòu)建“藥物成分-靶點(diǎn)-通路”網(wǎng)絡(luò)圖，該網(wǎng)絡(luò)共有230個(gè)節(jié)點(diǎn)，978個(gè)相互關(guān)系。藍(lán)色六邊形代表藥物活性成分，黃色菱形代表作用靶點(diǎn)，綠色V形代表信號(hào)通路；節(jié)點(diǎn)越大、顏色越深表示自由度(degree)度值越高。應(yīng)用網(wǎng)絡(luò)分析儀(network analyzer)功能分析網(wǎng)絡(luò)中各成分、靶點(diǎn)的網(wǎng)絡(luò)拓?fù)鋮?shù)。degree度值反映網(wǎng)絡(luò)中與該節(jié)點(diǎn)具有聯(lián)系的節(jié)點(diǎn)數(shù)目，度值越高，參與的生物過程越多，可據(jù)此判斷出四神煎發(fā)揮治療RA作用的重要活性成分及核心靶點(diǎn)。主要活性成分的網(wǎng)絡(luò)拓?fù)鋵W(xué)分析結(jié)果顯示，槲皮素degree度值為80，介度0.243 458，接近中心性0.484 848；木犀草素degree度值37，介度0.059 619，接近中心性0.408 759；山柰酚degree度值34，介度0.086 115，接近中心性0.414 815；漢黃芩素degree度值28，介度0.031 893，接近中心性0.392 982。主要靶點(diǎn)的網(wǎng)絡(luò)拓?fù)鋵W(xué)分析結(jié)果顯示，degree度值最高靶點(diǎn)基因?yàn)镻TGS2，degree度值為39，介度0.135 553，接近中心性 0.443 564；其次為PTGS1、RELA、TNF、NFKB1、JUN、MAPK14、MAPK1、ESR1、IL-6。表3及表4，見圖5。

表3 主要活性成分網(wǎng)絡(luò)拓?fù)鋵W(xué)分析結(jié)果(degree度值前10位)

表4 主要作用靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)拓?fù)鋵W(xué)分析結(jié)果

圖5 “藥物成分-靶點(diǎn)-通路”網(wǎng)絡(luò)圖

3 討論

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎屬中醫(yī)“痹證”范疇，初起病因病機(jī)為素體虧虛、外感風(fēng)寒濕熱之邪，患者一般病程較長(zhǎng)，風(fēng)寒濕邪郁而化熱，耗傷氣陰，形成氣陰兩虛、邪氣阻絡(luò)之證[4]。四神煎作為臨床治療氣陰兩虛型RA的經(jīng)典方劑，方中重用黃芪為君，振奮正氣以驅(qū)散經(jīng)隧深部之邪氣；金銀花可清熱解毒；牛膝可補(bǔ)益肝腎兼通利關(guān)節(jié)；遠(yuǎn)志可祛痰消腫；石斛可養(yǎng)陰生津；諸藥合用切中病機(jī)，既補(bǔ)已損之氣陰，又驅(qū)除經(jīng)絡(luò)之郁邪。四神煎治療RA的作用機(jī)制仍不清楚，因此，本研究將采用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法分析四神煎治療RA的潛在作用機(jī)制。

本研究共挖掘出四神煎活性成分60個(gè)，藥物潛在靶點(diǎn)353個(gè)，RA疾病相關(guān)靶點(diǎn)1 277個(gè)，“藥物-疾病”共同靶點(diǎn)151個(gè)。KEGG通路富集分析發(fā)現(xiàn)四神煎主要通過調(diào)控IL-17信號(hào)通路、TNF信號(hào)通路、Th17細(xì)胞分化、破骨細(xì)胞分化、NF-κB信號(hào)通路等生物學(xué)途徑發(fā)揮抑制炎癥和免疫反應(yīng)、調(diào)節(jié)骨代謝的作用。①抑制炎癥和免疫反應(yīng)。TNF通路是RA發(fā)病機(jī)制中的經(jīng)典通路，TNF-α作為通路中最早參與的細(xì)胞因子，可促進(jìn)IL-1、IL-6 的分泌，刺激滑膜細(xì)胞產(chǎn)生基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinase，MMP)，引起滑膜炎癥。Th17細(xì)胞分化通路介導(dǎo)CD4+T細(xì)胞分化為Th17細(xì)胞，Th17細(xì)胞是以分泌IL-17為主的T細(xì)胞亞群，IL-17是RA患者關(guān)節(jié)滑膜損傷的重要因素之一，它可與IL-1β、IL-6、TNF-α等細(xì)胞因子協(xié)同，募集中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞到關(guān)節(jié)局部浸潤(rùn)，引起滑膜組織增生[17-19]。NF-κB信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路是引起炎癥反應(yīng)的重要信號(hào)通路，同時(shí)因?yàn)轶w內(nèi)炎癥因子的刺激會(huì)造成NF-κB的自分泌自擴(kuò)增循環(huán)，進(jìn)一步加重關(guān)節(jié)損壞[20]。②調(diào)節(jié)骨代謝。破骨細(xì)胞是骨骼系統(tǒng)中具備骨吸收功能的細(xì)胞，RA骨破壞的機(jī)制與破骨細(xì)胞的生成活化密切相關(guān)，抑制破骨細(xì)胞分化通路對(duì)于延緩RA骨破壞具有重要意義。人體內(nèi)骨代謝的重要通路包括NF-MMPs受體活化因子配體(receptor activator of nuclear factor-κB ligand，RANKL)/NF-κB受體活化因子(receptor activator of nuclear factor-κB，RANK)/骨保護(hù)素(osteoprotegerin，OPG)信號(hào)通路和Wingless/Integrated(Wnt)信號(hào)通路等。IL-17通過介導(dǎo)RANKL表達(dá)，調(diào)控破骨細(xì)胞的分化，促進(jìn)骨破壞的發(fā)生；還可促進(jìn)軟骨細(xì)胞中MMPs的分泌，分解軟骨蛋白聚糖及膠原，破壞軟骨組織[21]。TNF通過刺激骨細(xì)胞表達(dá)RANKL，激活破骨細(xì)胞形成，直接導(dǎo)致骨破壞[22]；還可通過上調(diào)Wnt信號(hào)通路拮抗劑DKK-1的表達(dá)，抑制成骨細(xì)胞介導(dǎo)的骨形成，間接導(dǎo)致骨破壞[23]。NF-κB 信號(hào)通路受到細(xì)胞因子(如RANKL、TNF-α 和IL-1)的嚴(yán)格調(diào)節(jié)，通過誘導(dǎo)破骨細(xì)胞分化破壞軟骨細(xì)胞[24]。此外，關(guān)鍵靶點(diǎn)還富集在糖尿病并發(fā)癥相關(guān)的AGE-RAGE信號(hào)通路、癌癥通路、流體剪切應(yīng)力和動(dòng)脈粥樣硬化通路，提示四神煎對(duì)氣陰兩虛型糖尿病、癌癥、動(dòng)脈粥樣硬化等疾病亦有治療效果。

對(duì)四神煎主要活性成分進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)拓?fù)浞治霭l(fā)現(xiàn)，degree度值較高的活性成分為：槲皮素、木犀草素、山柰酚及漢黃芩素等。研究表明，槲皮素可以劑量依賴的方式減少RA成纖維樣滑膜細(xì)胞中IL-6、IL-1β等細(xì)胞因子的分泌，抑制炎癥反應(yīng)[25]；還可通過抑制NF-κB信號(hào)通路下調(diào)MMP-13的表達(dá)，從而延緩RA軟骨破壞，發(fā)揮保護(hù)軟骨細(xì)胞的作用[26]。木犀草素可減少M(fèi)MP的分泌，抑制炎癥因子的表達(dá)[27]。木犀草素或木犀草素與綠原酸聯(lián)用可顯著下調(diào)IL-1β刺激的成纖維樣滑膜細(xì)胞中信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)因子糖蛋白130(glycoprotein 130，gp130)、Janus激酶1(janus kinases，JAK1)和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活因子3(signal transducer and activator of transcriptions 3，STAT3)的表達(dá)，進(jìn)而抑制JAK-STAT信號(hào)通路的激活[28]。這些結(jié)果表明，木犀草素可抑制RA成纖維樣滑膜細(xì)胞的增殖，阻斷成纖維樣滑膜細(xì)胞的致病作用。山柰酚通過拮抗堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(basic fibroblast growth factor，bFGF)誘導(dǎo)的RSK2表達(dá)，抑制RA成纖維樣滑膜細(xì)胞的增殖和遷移、Th17的分化和破骨細(xì)胞的形成[29]。漢黃芩素具有抗炎的作用，可以濃度依賴的方式增加RA成纖維樣滑膜細(xì)胞內(nèi)活性氧含量，進(jìn)而降低關(guān)節(jié)炎癥反應(yīng)[30]。由此推測(cè)，槲皮素、木犀草素、山柰酚、漢黃芩素等成分可能是四神煎治療RA的重要活性成分，且這些成分可通過抑制炎癥和免疫反應(yīng)、調(diào)節(jié)骨代謝發(fā)揮治療作用。

對(duì)四神煎治療RA的作用靶點(diǎn)進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)拓?fù)浞治霭l(fā)現(xiàn)，degree值較高的PTGS2、PTGS1、TNF、IL-6等均為RA臨床常用藥物的作用靶點(diǎn)。前列腺素內(nèi)過氧化物合酶(prostaglandin endoperoxidase synthase，PTGS)也稱環(huán)氧合酶(cyclooxy genase，COX)，是目前臨床治療RA常用的非甾體類抗炎藥的作用靶點(diǎn)，其中PTGS1(COX-1)可參與調(diào)節(jié)機(jī)體正常生理活動(dòng)；PTGS2(COX-2)可在IL-6、TNF-α等細(xì)胞因子的誘導(dǎo)下迅速表達(dá)，催化前列腺素(prostaglandin，PG)參與炎癥反應(yīng)[31]。TNF抑制劑和 IL-6 受體拮抗劑為臨床常用生物制劑，可較快緩解病情、降低疾病活動(dòng)度[32]。TNF包括TNF-α和TNF-β，TNF-α是RA發(fā)病過程中最早參與的細(xì)胞因子，參與機(jī)體免疫或炎癥反應(yīng)，誘導(dǎo)促進(jìn) IL-1、IL-6和MMPs的釋放，激活破骨細(xì)胞分泌蛋白酶消化骨基質(zhì)，形成骨吸收陷窩?；こ衫w維細(xì)胞在炎癥因子的刺激下可分泌IL-6，IL-6可誘導(dǎo)Th17和破骨細(xì)胞分化，促進(jìn)急性期蛋白合成，增強(qiáng)與滑膜增生和關(guān)節(jié)破壞有關(guān)的炎癥反應(yīng)[22]。

綜上所述，四神煎可通過多成分、多靶點(diǎn)、多通路抑制炎癥和免疫反應(yīng)、調(diào)節(jié)骨代謝發(fā)揮對(duì)RA的治療作用。本研究為后續(xù)開展四神煎的機(jī)制研究提供線索，為四神煎的臨床應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)。但由于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究是基于數(shù)學(xué)模型及生物信息學(xué)的研究方法，未涉及藥代動(dòng)力學(xué)、血清藥物化學(xué)等領(lǐng)域，故仍存在一些問題亟待解決，比如藥物提取濃縮過程中化學(xué)成分的變化、藥物在人體內(nèi)代謝發(fā)生的變化、藥物之間的配伍關(guān)系等，因此本研究結(jié)果需經(jīng)過動(dòng)物或細(xì)胞實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證，為四神煎治療RA提供更堅(jiān)實(shí)可靠的科學(xué)依據(jù)。