貴州香豬保種場(chǎng)主要疫病的血清學(xué)抗體檢測(cè)分析

陸濤峰， 吳延軍， 趙 海， 李 倩， 王士勇， 吳曙光

(貴州中醫(yī)藥大學(xué)，貴州貴陽550025)

畜禽種質(zhì)資源是畜牧業(yè)發(fā)展最基本的生產(chǎn)資料，也是人類生存發(fā)展最根本的物質(zhì)基礎(chǔ)和進(jìn)行科學(xué)研究的寶貴素材，關(guān)系到國(guó)家安全以及經(jīng)濟(jì)的可持續(xù)發(fā)展。貴州香豬是貴州省特有的動(dòng)物遺傳資源，集中分布在貴州從江、劍河、榕江等地。貴州香豬具有肉質(zhì)鮮美、抗逆性強(qiáng)、體型小、性成熟早、基因純合度高等優(yōu)點(diǎn)，不僅有重要的經(jīng)濟(jì)價(jià)值，而且可以作為良好的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物素材用于生命科學(xué)研究[1～3]。隨著我國(guó)經(jīng)濟(jì)社會(huì)的快速發(fā)展，交通條件不斷改善，養(yǎng)殖動(dòng)物的流動(dòng)性日益頻繁，與此同時(shí)也給動(dòng)物疫病防控工作帶來巨大挑戰(zhàn)。我國(guó)生豬疫病流行情況復(fù)雜，具有病種多、病情復(fù)雜、流行范圍廣等特點(diǎn)，防控形勢(shì)異常嚴(yán)峻[4，5]。豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)、豬瘟病毒(CSFV)、豬O型口蹄疫病毒(FMDV-O)、非洲豬瘟(ASFV)是豬的重要傳染性病毒，一旦豬群發(fā)生感染會(huì)對(duì)貴州香豬資源帶來毀滅性打擊。目前除了非洲豬瘟尚無有效疫苗進(jìn)行免疫外，疫苗免疫是豬疫病防控的主要手段，及時(shí)接種疫苗并開展免疫水平監(jiān)測(cè)可以為豬疫病防控提供精準(zhǔn)的決策依據(jù)[6，7]。另外，對(duì)動(dòng)物資源群體及時(shí)開展重要疫病的血清抗體監(jiān)測(cè)，可以及時(shí)了解病原感染狀況，特別是對(duì)于非免疫群體具有更重要的意義。因此，本研究對(duì)貴州香豬資源保種場(chǎng)開展主要疫病的血清抗體監(jiān)測(cè)，以了解貴州香豬主要疫病的免疫或感染狀況，為貴州香豬資源疫病防控提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 樣品來源根據(jù)貴州香豬資源保種場(chǎng)的規(guī)模，按照我國(guó)農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)《實(shí)驗(yàn)用豬微生物學(xué)等級(jí)及監(jiān)測(cè)》(NY/T 3466—2019)對(duì)樣品采集數(shù)量的要求，于2021年6月采集貴陽(A場(chǎng))、從江(B場(chǎng))、榕江(C場(chǎng))、劍河(D場(chǎng))4個(gè)貴州香豬資源保種場(chǎng)的香豬血清樣品分別為19、16、12、20份，共計(jì)67份。疫苗免疫情況：貴陽(A場(chǎng))于2021年3月集中免疫了PRRSV、CSFV、FMDV-O疫苗；從江(B場(chǎng))于2021年4月免疫了PRRSV疫苗；榕江(C場(chǎng))、劍河(D場(chǎng))于2021年3月免疫了PRRSV、CSFV疫苗；各場(chǎng)均未免疫ASFV疫苗。

1.1.2 主要試劑和儀器PRRSV、CSFV血清抗體ELISA檢測(cè)試劑盒，購自愛德士(IDEXX)生物公司；FMDV-O、ASFV血清抗體ELISA檢測(cè)試劑盒，購自北京金諾百特科技有限公司；生物安全柜(HR40-IIA2)，購自青島海爾公司；多功能冷凍離心機(jī)(ALLegra X-30R)，購自德國(guó)貝克曼公司；酶標(biāo)儀(ReadMax 1900)，購自上海閃譜生物科技有限公司。

1.2 方法

1.2.1 血清分離在動(dòng)物空腹情況下采集前腔靜脈血10 mL，放入盛有冰袋的保溫箱中(約4 ℃)，運(yùn)輸?shù)綄?shí)驗(yàn)室，1 500 r/min離心10 min分離血清，分裝后置于-80 ℃冰箱中保存?zhèn)溆谩Ｋ袑?shí)驗(yàn)室操作均在生物安全柜中進(jìn)行。

1.2.2 抗體檢測(cè)檢測(cè)前將待檢血清置于60 ℃恒溫金屬浴中20 min進(jìn)行病原滅活。PRRSV、CSFV、FMDV-O、ASFV血清抗體檢測(cè)按照各ELISA試劑盒說明書進(jìn)行，用酶標(biāo)儀讀取數(shù)值，按照各試劑盒判定標(biāo)準(zhǔn)對(duì)結(jié)果進(jìn)行判定。若已免疫相關(guān)疫苗，則檢測(cè)抗體為免疫抗體；若未免疫相關(guān)疫苗，則檢測(cè)抗體為病毒感染抗體。

1.2.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)采用Excel 2010軟件統(tǒng)計(jì)陽性個(gè)體數(shù)，計(jì)算各場(chǎng)陽性率和總陽性率。

2 結(jié)果

2.1 貴州香豬群體4種病毒血清抗體由表1可見：4個(gè)貴州香豬資源保種場(chǎng)的PRRSV、CSFV、FMDV-O 免疫抗體合格率(陽性率)分別為100%、74.6%、28.4%，ASFV抗體陽性率為0%。其中PRRSV、CSFV的免疫抗體合格率達(dá)到農(nóng)業(yè)農(nóng)村部規(guī)定≥70%的要求，F(xiàn)MDV-O的免疫抗體合格率未達(dá)到規(guī)定要求；在貴州香豬群體中未檢測(cè)到ASFV抗體，表明沒有ASFV感染情況。

表1 貴州香豬群體4種病毒血清抗體檢測(cè)結(jié)果 %

2.2 不同保種場(chǎng)4種病毒血清抗體分析結(jié)合免疫情況分析不同貴州香豬資源保種場(chǎng)4種病毒血清抗體情況：貴陽(A場(chǎng))保種場(chǎng)均免疫了PRRSV、CSFV、FMDV-O疫苗，且免疫效果良好；從江(B場(chǎng))保種場(chǎng)只免疫了PRRSV疫苗，沒有免疫CSFV和FMDV-O疫苗，抗體檢測(cè)結(jié)果與免疫情況一致；榕江(C場(chǎng))、劍河(D場(chǎng))保種場(chǎng)只免疫了PRRSV和CSFV疫苗，沒有免疫FMDV-O疫苗，抗體檢測(cè)結(jié)果與免疫情況一致。除貴陽(A場(chǎng))外，其他3個(gè)貴州香豬資源保種場(chǎng)對(duì)豬主要疫病的免疫不夠重視，特別是列入《2021年國(guó)家動(dòng)物疫病強(qiáng)制免疫計(jì)劃》的FMDV-O均沒有進(jìn)行免疫。

3 討論

3.1開展動(dòng)物免疫抗體水平監(jiān)測(cè)是檢驗(yàn)疫苗免疫效果及動(dòng)物機(jī)體免疫狀況的重要手段，也是養(yǎng)殖場(chǎng)進(jìn)行補(bǔ)充免疫和防疫措施落實(shí)的重要依據(jù)，并可以為政府主管部門科學(xué)制定動(dòng)物疫病預(yù)防控制規(guī)劃和疫病預(yù)警提供決策依據(jù)[8～10]。貴州香豬作為貴州特有的動(dòng)物遺傳資源，逐漸成為貴州特色養(yǎng)殖對(duì)外交流合作的名片[11]。本次監(jiān)測(cè)結(jié)果表明，各香豬資源保種場(chǎng)均能按要求開展PRRSV疫苗免疫，且免疫合格率均為100%，但其他疫病的免疫情況參差不齊。從江(B場(chǎng))沒有免疫CSFV疫苗，抽檢沒有發(fā)現(xiàn)CSFV抗體陽性樣品，表明香豬群體沒有發(fā)生CSFV感染。從江(B場(chǎng))、榕江(C場(chǎng))、劍河(D場(chǎng))未免疫FMDV-O疫苗，抽檢沒有發(fā)現(xiàn)FMDV-O抗體陽性個(gè)體，表明香豬群體沒有發(fā)生FMDV-O感染。所有貴州香豬資源群體中均沒有檢測(cè)到ASFV抗體，表明香豬群體沒有發(fā)生ASFV感染，防控效果良好。

3.2本次對(duì)貴州香豬資源保種場(chǎng)的監(jiān)測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)最突出的問題是：列入《2021年國(guó)家動(dòng)物疫病強(qiáng)制免疫計(jì)劃》的FMDV-O疫苗免疫情況不理想，4個(gè)香豬資源保種場(chǎng)中有3個(gè)場(chǎng)存在未及時(shí)免疫的現(xiàn)象。建議相關(guān)保種場(chǎng)及時(shí)進(jìn)行補(bǔ)免，調(diào)整免疫程序或者重新設(shè)計(jì)合理的免疫程序，并定期對(duì)豬群開展檢測(cè)，提高群體免疫效果。隨著貴州香豬資源保種場(chǎng)防疫意識(shí)增強(qiáng)和防疫水平的提高，再加上貴州山區(qū)天然的隔離屏障，個(gè)別貴州香豬資源保種場(chǎng)已具備開展非免疫實(shí)驗(yàn)動(dòng)物豬生產(chǎn)的基本條件，因此貴州香豬實(shí)驗(yàn)動(dòng)物化將是貴州香豬產(chǎn)業(yè)的1個(gè)增長(zhǎng)點(diǎn)。

4 結(jié)論

本次監(jiān)測(cè)結(jié)果表明，貴州香豬資源群體中沒有ASFV感染；PRRSV、CSFV的免疫抗體水平達(dá)到國(guó)家規(guī)定的要求；部分貴州香豬資源保種場(chǎng)對(duì)豬主要疫病的免疫不夠重視，特別是對(duì)FMDV-O應(yīng)重視和加強(qiáng)免疫工作。