柑橘中黃酮類化合物的提取技術(shù)、功能特性及應(yīng)用研究進(jìn)展

李 陽，曹 婷，安 琪，屈沙沙，宋 悅，范 剛, ，任婧楠，潘思軼

（1.華中農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)技術(shù)學(xué)院，環(huán)境食品學(xué)教育部重點實驗室，湖北 武漢 430070；2.武漢食品化妝品檢驗所，湖北 武漢 430040）

全球范圍內(nèi)柑橘類水果的年產(chǎn)量高達(dá)1.24億噸，主要生產(chǎn)地集中在巴西、中國、印度及美國等[1]。每年，全球加工業(yè)產(chǎn)生的如皮渣、種子和膜渣等柑橘廢棄物超過了5400噸[2]，相當(dāng)于50%～60%的果實質(zhì)量。其中，黃酮類化合物（flavonoids）是柑橘最重要的生理功能活性成分之一，含量相對較高，尤其是在柑橘屬果皮、果肉以及種子中，安全無毒，易于分離。柑橘黃酮的化學(xué)結(jié)構(gòu)是由15個碳原子組成的C6-C3-C6骨架，骨架由兩個苯環(huán)（A環(huán)和B環(huán)）通過一個吡喃雜環(huán)（環(huán)C）連接而成[3]，如圖1所示。在過去的十年里，柑橘黃酮因其具有的眾多對人體有益的生理功能而在實驗研究中受到極大的關(guān)注，目前已被廣泛應(yīng)用于食品、醫(yī)藥、保健品以及化妝品等行業(yè)。

圖1 黃酮基本結(jié)構(gòu)Fig.1 The basic structure for flavonoid

本文介紹了黃酮類化合物的主要種類，并綜述了近年來有關(guān)柑橘中黃酮類化合物的提取技術(shù)、功能活性以及應(yīng)用現(xiàn)狀的研究進(jìn)展，旨在為柑橘黃酮進(jìn)一步的開發(fā)利用提供參考。

1 柑橘中黃酮類化合物的種類

柑橘類水果中的黃酮類物質(zhì)大致可分為兩類，一是黃烷酮類化合物（flavanone），含量最高，大多以糖苷的形式存在，如橙皮苷（hesperidin）、蕓香柚皮苷（narirutin）、新橙皮苷（neohesperidin）及柚皮苷（naringin）等[4]。上述幾種黃烷酮化合物間的主要區(qū)別是黃酮母體結(jié)構(gòu)A環(huán)-7位和C環(huán)-3’、-4’位置上的取代基團(tuán)不同，A環(huán)-7位以蕓香糖苷和新橙皮糖苷為主，形成了如橙皮苷/新橙皮苷、蕓香柚皮苷/柚皮苷等多種同分異構(gòu)體。第二類是多甲氧基黃酮類化合物，它是柑橘屬植物中的特有成分，可用作柑橘分類的標(biāo)識物，較為常見的有川陳皮素（nobiletin，NOB）、橘皮素（tangeretin，TAN）以及甜橙黃酮（sinensetin）。它們之間的主要區(qū)別在于黃酮母體結(jié)構(gòu)A環(huán)-8位和C環(huán)-3’位甲氧基數(shù)目和位置不同。NOB純品是一類淺黃色結(jié)晶性粉末，經(jīng)水解加氫可以得到柚苷二氫查耳酮，它的甜度約為蔗糖的150倍，甜味持久且安全性高，是新一代無毒、低能量、防齲齒的高甜度甜味劑[5]；TAN純品為白色晶體，難溶于水，易溶于乙醇、乙醚等有機溶劑；甜橙黃酮多存在于柑橘屬植物的果實與果汁中，具有抗菌、抗炎以及抗癌等功效。目前，提取橘皮中黃酮類化合物的工藝逐漸多樣，建立更加安全、有效及環(huán)保的提取方法也成為了黃酮開發(fā)、利用的研究熱點。

2 柑橘中黃酮類化合物提取工藝的研究進(jìn)展

分離和純化是測定柑橘皮渣中黃酮類化合物濃度和生物活性的基礎(chǔ)和前提。就分離目的而言，首選具有優(yōu)異性能的先進(jìn)技術(shù)，例如分離時間短、成本低、重現(xiàn)性以及自動化程度高[6]。目前對于黃酮類化合物提取工藝的研究，主要有溶劑浸提法、高效液相色譜法（HPLC）、超聲波輔助提取法及酶法提取等。

2.1 溶劑浸提法

李繼偉等[7]以柑橘皮渣為原料，分別選用石灰水、NaOH溶液和乙醇作為提取劑，通過單因素實驗和正交試驗優(yōu)化柑橘皮渣黃酮的提取條件。結(jié)合實驗數(shù)據(jù)及后期純化綜合比較，發(fā)現(xiàn)將飽和石灰水稀釋4倍后，采取液料比為30 mL/g、90 ℃水浴2 h的實驗條件，可以得到較高的提取率，為（5.15±0.03）mg/g。單飛獅等[8]采用乙醇-堿液法提取紅橘果皮中的橙皮苷，通過正交試驗探究其最優(yōu)提取工藝，所得橙皮苷產(chǎn)率為3.63%。與現(xiàn)有的其他醇類或醚類提取黃酮類化合物的方法相比[9]，使用乙醇-堿液作為提取劑的優(yōu)勢在于提取所得橙皮苷的紫外與紅外光譜圖更加接近標(biāo)品，為橙皮苷未來的工業(yè)化提取提供了參考。MIYAKE等[10]考察了不同濃度的乙醇溶液對柑橘中多甲氧基黃酮（Polymethoxylated flavones，PMFs）的萃取效率，結(jié)果表明，75%濃度的乙醇濃度可以做到完全提取。此外，PMFs的提取率還受到溫度的影響，在一定范圍內(nèi)溫度越高，提取率越高。溶劑浸提相對于其他高新技術(shù), 是較為傳統(tǒng)且應(yīng)用較多的提取方法。其最大的不足就是耗時較長，同時大量提取劑的回收也是阻礙溶劑浸提技術(shù)廣泛應(yīng)用的難題，因此在未來還需不斷對溶劑浸提法進(jìn)行改進(jìn)或者與其他技術(shù)聯(lián)用才能避免在眾多提取方法中被淘汰。

2.2 超臨界流體萃取法

呂凜等[11]使用超臨界C O2萃取柑橘皮中的黃酮類化合物，經(jīng)過單因素實驗確定了影響提取效果的主要因素依次為夾帶劑用量、萃取壓力、萃取溫度及萃取時間，最終所得的柑橘黃酮提取率為2.723%。姜澤放等[12]以柑橘屬植物海南山柚為原料，使用超臨界流體萃取技術(shù)萃取山柚油，當(dāng)萃取溫度為40 ℃，萃取壓力為25 MPa，萃取流量為20 L/min，萃取時間為90 min的條件下，萃取率達(dá)到最大，為80.05%。超臨界流體萃取與傳統(tǒng)溶劑提取法相比，由于其高擴散性和低黏度性，使得超臨界流體能夠迅速滲透進(jìn)入復(fù)雜基質(zhì)的孔隙中，從而大大提高提取效率。另外，超臨界流體萃取得到的提取物在減壓之后能夠被高度濃縮，可以大大縮短提取周期，實現(xiàn)高效、快速連續(xù)提取，是一種公認(rèn)的綠色提取方法。

2.3 超聲波輔助提取法

超聲處理的過程是通過空化現(xiàn)象在液體介質(zhì)中傳輸大于16 kHz的超聲波，具有高強度的功率特性[13]。IDARESIT等[14]研究了使用超聲波對食品級溶劑中的黃酮類化合物蘆丁產(chǎn)生的影響，實驗對經(jīng)過超聲處理后樣品溶劑中的總酚含量進(jìn)行了測量，結(jié)果發(fā)現(xiàn)與超聲處理前相比，總酚含量提升了超過56%。這是由于蘆丁水解為槲皮素、3,4二羥基苯甲酸、兒茶酚以及山奈酚等衍生物所導(dǎo)致的[15?16]，而槲皮素具有比蘆丁更高的抗氧化活性（2.3倍）[17]。因此，可以證實使用超聲處理具有增加蘆丁水解為其苷元以及抗氧化的能力。此外，超聲波處理還增加了蘆丁的左旋對映體[14]，可用于進(jìn)一步改變其他食品成分的物理化學(xué)性質(zhì)。

黨婭等[18]利用超聲波輔助提取橘皮中的黃酮類化合物，并探討了超聲波頻率、溶劑濃度、提取時間、提取溫度及料液比對于提取效果的影響，從單因素實驗數(shù)據(jù)來看，超聲波頻率25.5 kHz、乙醇濃度60%、提取時間40 min、提取溫度75 ℃及料液比1:10（g/mL）時，提取效果最好。低共熔溶劑（Deep eutectic，DES），是指由一定化學(xué)計量比的氫鍵受體（如季銨鹽）和氫鍵供體（如酰胺、羧酸和多元醇等化合物）組合而成的兩組分或三組分低共熔混合物[19]，其凝固點顯著低于各個組分純物質(zhì)的熔點，是一種快速興起的替代傳統(tǒng)溶劑和離子液體的新型綠色溶劑。劉丹寧等[20]利用超聲波輔助低共熔溶劑提取枳實中的蕓香柚皮苷、柚皮苷和橙皮苷，當(dāng)超聲功率升高時，可以促進(jìn)細(xì)胞壁的破碎，有利于有效成分的溶出，但若功率過高，熱效應(yīng)則會導(dǎo)致有效成分被破壞。實驗首先合成了16種低共熔溶劑，隨后經(jīng)由單因素實驗以及Box-Behnken（BBD）優(yōu)化，結(jié)果證明，氯化膽堿/醋酸低共熔溶劑提取枳實黃酮的效果最好。超聲波輔助提取法的工藝成本低，提取效果相較于傳統(tǒng)的提取方法更加快捷，效果更好。

2.4 酶法提取

酶法提取的反應(yīng)條件需要嚴(yán)格控制，即使條件微小的波動，也有可能引起酶活性的下降。實驗中所用到的酶可能會與溶劑中的其他化學(xué)物質(zhì)發(fā)生反應(yīng)，從而影響反應(yīng)速率和產(chǎn)物純度。故實驗室或工業(yè)生產(chǎn)中，多采用酶法與其他技術(shù)聯(lián)合的方式進(jìn)行提取，發(fā)揮協(xié)同作用，提高有效成分的提取效率。李建鳳等[21]首先利用超聲波輔助法提取夏橙中的橙皮苷，得出最優(yōu)提取工藝，隨后按照最佳工藝配比進(jìn)一步使用纖維素酶對樣品進(jìn)行預(yù)處理，混合均勻并用保鮮膜封住瓶口酶解一段時間后再次測量，數(shù)據(jù)顯示橙皮苷的提取率由之前的3.18%上升到了3.71%，且試驗重現(xiàn)性好。任明等[22]在堿提酸沉法的基礎(chǔ)上，利用纖維素酶、木聚糖酶、蛋白酶、果膠酶等降解枳實細(xì)胞壁及間質(zhì)成分，打開細(xì)胞結(jié)構(gòu)對橙皮苷的包裹，進(jìn)而促進(jìn)有效成分的溶出，這是將復(fù)合酶法應(yīng)用于黃酮類化合物提取的首次探索。酶反應(yīng)可以溫和地將植物組織分解，較大幅度提高收率，故酶法提取不失為一種最大限度從植物體內(nèi)提取有效成分的方法，是一項很有前途的新技術(shù)。

2.5 其他方法

除上述提取方法之外，提取柑橘黃酮還有亞臨界水萃取、分子印跡技術(shù)、閃式提取等方法。亞臨界水萃取技術(shù)是以亞臨界狀態(tài)的水為溶劑，通過改變溫度和壓力使水在較高溫度下保持液態(tài)，同時改變水的極性使其介電常數(shù)接近有機溶劑，能讓中性乃至非極性的組分可以溶解于水中的一種綠色萃取技術(shù)[23]。齊兵等[24]采用亞臨界水萃取技術(shù)提取陳皮中的橙皮苷，設(shè)定提取溫度為140 ℃、壓力為6 MPa、流速為40 mL/min、提取時間為100 min時，橙皮苷提取率最大，為（3.54%±0.05%），相較于傳統(tǒng)的乙醇熱回流法，亞臨界水流體萃取縮短了提取時間，柑橘黃酮得率高且無溶劑殘留，為實現(xiàn)天然產(chǎn)物的綠色、高效工業(yè)化提取提供了新的路徑。另外，SHAO等[25]首次將分子印跡固相萃取整體柱與高效液相色譜聯(lián)用，用于柑橘果肉中橙皮素（hesperitin，HES）的提取。謝捷等[26]利用閃式提取器高速轉(zhuǎn)動時所產(chǎn)生的巨大機械剪切作用、振動作用和負(fù)壓渦流，將陳皮的細(xì)胞組織破碎，從而提取組織內(nèi)的橙皮苷。結(jié)果顯示經(jīng)閃式提取處理的橙皮苷得率為6.35%。

從上文中所提到的幾種針對黃酮類化合物最常見的提取方法中可以看出，溶劑提取法盡管較為常見，但是效率偏低且污染較嚴(yán)重。超臨界流體萃取法相對而言更加綠色環(huán)保，快速高效，缺點是成本較高。超聲波輔助提取法能夠加快提取速度，與其他幾種提取方法配合使用可以達(dá)到較好的效果。酶法提取較為溫和，在未來有很大的發(fā)展前景。但是總體而言，當(dāng)前有關(guān)柑橘黃酮的提取技術(shù)仍局限在實驗室階段，工業(yè)化程度不高。這與其提取成本較高有緊密關(guān)系，若能進(jìn)一步的優(yōu)化黃酮類化合物提取工藝體系，提高終產(chǎn)物的產(chǎn)量，推動黃酮類化合物研究從實驗室向工業(yè)化、連續(xù)化生產(chǎn)轉(zhuǎn)變，這將使得果蔬黃酮得到大規(guī)模應(yīng)用，經(jīng)濟(jì)效益可觀。

3 柑橘中黃酮類化合物功能活性的研究進(jìn)展

3.1 抗氧化活性

在過去的幾十年里，柑橘黃酮的抗氧化能力已經(jīng)通過例如DPPH和ABTS自由基清除能力試驗等各種體外自由基清除試驗得到證實[27]。楊雪妍[4]選用大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞PC12為實驗樣本，以高濃度的谷氨酸（Glu）來建立神經(jīng)細(xì)胞氧化損傷模型，模擬體內(nèi)毒性興奮狀態(tài)，通過檢測熒光信號的淬滅強度來檢測四種柑橘黃酮，即NOB、TAN、HES、柚皮素（naringenin，NAR）抑制自由基的能力?？寡趸钚缘膹娙跬ㄟ^待測樣品的氧自由基吸收能力（ORAC）來判別，其中，以NOB的ORAC值最高，活性最強；HES、NAR次之，TAN的ORAC值最低。由此可見，柑橘中的黃酮類化合物單體具有良好的抗氧化活性。文紅波等[28]以甲醇為溶劑提取柑橘皮總黃酮，通過體外抗氧化活性研究結(jié)果表明，柑橘黃酮的自由基清除能力隨提取劑濃度的增加而增強，且對超氧陰離子自由基（）和二苯代苦味?；诫拢―PPH·）自由基的清除率均高于對照物蘆丁。

陳慶菊[29]研究了柑橘黃酮對于仔豬血清抗氧化功能的影響，試驗選取50頭28日齡健康的斷奶仔豬，將其隨機分為5組，經(jīng)過28 d的單欄飼養(yǎng)后發(fā)現(xiàn)，柑橘黃酮能夠顯著提高仔豬血清和肝臟中的總抗氧化能力（T-AOC）以及過氧化氫酶（CAT）與總超氧化物歧化酶（T-SOD）的含量，同時顯著降低了血清和肝臟中的丙二醛（MDA）含量。MDA是脂質(zhì)過氧化的代謝產(chǎn)物，可反映細(xì)胞膜被氧化的程度，表明在仔豬日糧中添加柑橘類黃酮能夠促進(jìn)血清中的抗氧化酶將超氧自由基轉(zhuǎn)化為水，從而達(dá)到清除自由基目的，使細(xì)胞免受氧化損傷。經(jīng)過張華等[30]對柑橘果實中主要酚類物質(zhì)抗氧化活性的比較，總結(jié)出柑橘黃酮的抗氧化活性強弱與結(jié)構(gòu)中的酚羥基數(shù)目有關(guān)，酚羥基數(shù)目越多，則抗氧化活性越強。

3.2 抗炎抑菌

急性肺損傷（ALI）是一種低氧性呼吸衰竭，其癥狀主要表現(xiàn)為肺部炎癥、中性粒細(xì)胞積聚及氣體交換受損等[31]。MA等[32]研究探討了柑橘中所含有的HES對于大鼠因呼吸機所致的急性肺損傷的保護(hù)作用。大鼠在機械通氣誘導(dǎo)急性肺損傷前2 h口服HES（含量分別為10、20或40 mg/kg）。然后按照不同條件將其分為六個實驗組，結(jié)果顯示，HES對通氣誘導(dǎo)的肺損傷有保護(hù)作用，這種抗炎作用源于其增加過氧化物酶體增殖物激活受體（PPAR）-γ的表達(dá)和抑制核因子-κB途徑的激活的能力。這些結(jié)果表明，HES可能是一種用于保護(hù)呼吸機誘導(dǎo)的急性肺損傷的潛在新型治療候選物。

丘曉花等[33]使用乙酸乙酯溶劑萃取經(jīng)過甲醇浸泡后的柑橘皮中的黃酮類化合物，經(jīng)過打孔法和最低濃度抑菌法（MIC）的驗證，得出其對于大腸桿菌（E.coli）、金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）以及綠膿桿菌（Pseudomonas aeruginosa）均具有較好的抑菌性。鐘桂云等[34]測定了柑橘干燥果皮中黃酮類提取物對禾谷鐮孢菌（Fusarium graminearum）、番茄早疫病菌（Tomato Early Blight）等7種病菌的殺菌活性，由普篩結(jié)果可以發(fā)現(xiàn)柑橘黃酮對蘆筍莖枯（Asparagusstem blight）、水稻紋枯（Rhizoctonia solani）以及水稻曲（Aspergillus oryzae）三種病菌均具有很強的抑制作用，殺滅率為100%，對剩余4種病菌也具有中等強度的抑制作用。柑橘黃酮關(guān)于抗炎抑菌的特性，在日化產(chǎn)業(yè)領(lǐng)域的應(yīng)用前景十分廣闊。國內(nèi)外已有部分企業(yè)嘗試將柑橘黃酮添加到牙膏產(chǎn)品中，對于治療牙齦炎起到了很好的效果。

3.3 抗衰老

秀麗隱桿線蟲（Caenorhabditis elegans，C. elegans）是最簡單的真核生物之一，也是研究衰老通路應(yīng)用最廣泛的生物模型。楊雪妍[4]以線蟲為實驗對象，選用柑橘中各項活性都較高的NOB進(jìn)行抗衰老活性檢測。首先使用不同濃度（3.13、6.25、12.5 μmol/L）的NOB處理線蟲，并比較它們與對照組之間線蟲的壽命及宏觀生命表征差異，包括運動力、脂褐素含量、體長、產(chǎn)卵量等。結(jié)果顯示NOB可顯著延長線蟲的壽命，同時還可以改善在衰老過程中線蟲的各項指標(biāo)健康水平。另外，NOB對于線蟲的體長和繁殖能力沒有顯著影響，為后續(xù)保健食品的開發(fā)提供了非常好的理論數(shù)據(jù)和發(fā)展方向。POZZO等[35]發(fā)現(xiàn)柑橘中的NAR還能預(yù)防心臟細(xì)胞的衰老。通過建立衰老心肌細(xì)胞模型，使用比色、熒光和免疫測定技術(shù)的評估發(fā)現(xiàn)，例如X-gal染色、細(xì)胞周期調(diào)節(jié)劑水平等相關(guān)的衰老標(biāo)記，在NAR的存在下顯著降低。這一發(fā)現(xiàn)為未來將柑橘中的NAR應(yīng)用于保健食品中奠定了基礎(chǔ)。

毛玉霞[36]將30只12月齡的老年小鼠分為兩組，分別使用生理鹽水與黃酮類化合物給小鼠灌胃，觀察小鼠體內(nèi)超氧化物歧化酶（SOD）與谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）的活性以及小鼠穿越平臺的次數(shù)。結(jié)果顯示，服用了柑橘中存在的黃酮類化合物的研究組小鼠SOD及GSH-Px酶活性明顯低于服用生理鹽水的對照組，研究組小鼠穿越平臺次數(shù)也明顯少于對照組。說明黃酮類化合物對于衰老小鼠的學(xué)習(xí)記憶功能具有一定的改善和提高作用，在一定程度上減少了腦內(nèi)炎癥，有明顯的抗衰老作用，為未來對抗神經(jīng)炎性反應(yīng)和神經(jīng)退行性變的藥物研制提供了一個很好的選項。

3.4 神經(jīng)保護(hù)活性

帕金森?。≒arkinson's disease，PD）是常見的中老年神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病，其發(fā)病機理與人體內(nèi)黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元的進(jìn)行性退化和成人腦中紋狀體多巴胺及其代謝物水平的降低有關(guān)[37]。最近的研究已經(jīng)確定過量活性氧（ROS）產(chǎn)生誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激廣泛參與了帕金森的發(fā)病機制，這種氧化還原的平衡遭到任何程度的破壞都會導(dǎo)致黑質(zhì)紋狀體多巴胺通路的神經(jīng)退化和神經(jīng)功能障礙。KIM等[38]建立了體內(nèi)和體外的帕金森病模型，研究了柑橘黃酮（柚皮素和橙皮苷）的神經(jīng)保護(hù)活性。結(jié)果顯示NAR和橙皮苷都可以穿過血腦屏障，防止神經(jīng)元退化，對神經(jīng)變性起到保護(hù)作用[39]。另外，還可通過抑制α-突觸聚集、誘導(dǎo)神經(jīng)營養(yǎng)因子和抑制神經(jīng)毒性炎癥來保護(hù)黑質(zhì)紋狀體多巴胺系統(tǒng)[40?42]，在日常膳食中適當(dāng)補充黃酮類化合物有望起到對于帕金森病預(yù)防和治療的作用。張海萍等[43]的研究發(fā)現(xiàn)柑橘黃酮可通過下調(diào)SNHGl表達(dá)來促進(jìn)1-甲基-4-苯基-吡啶離子（MPP+）誘導(dǎo)SH-SY5Y細(xì)胞增殖，并抑制其凋亡，證實了黃酮類化合物可作為治療帕金森的潛在藥物，但其具體作用機制還有待深入研究。

阿爾茨海默?。ˋlzheimer's Disease，AD）是一種常見的以進(jìn)行性認(rèn)知功能障礙、記憶損害和行為異常為特征的神經(jīng)退行性疾病，其病理特征之一為老年斑沉積。β-淀粉樣蛋白（Aβ）是AD老年斑的主要成分，它能夠抑制海馬神經(jīng)元細(xì)胞蛋白激酶A（PKA）的磷酸化和谷氨酸受體1（GluR1）的跨膜運輸。YAMAKUNI等[44]的體外實驗證實，柑橘黃酮川陳皮素可以逆轉(zhuǎn)這種抑制作用，從而減輕Aβ對神經(jīng)元的損傷，起到預(yù)防AD的神經(jīng)保護(hù)作用。此外，畢俊英[45]從柑橘果皮中提取出NOB，并探索其對麻醉后大鼠學(xué)習(xí)記憶功能損傷的調(diào)節(jié)作用。結(jié)果顯示NOB能夠顯著降低這種損害，且較大劑量的NOB改善作用更為明顯。NOB能夠防治AD這一作用機理的揭示，不僅為傳統(tǒng)中藥藥理提供了科學(xué)依據(jù)，而且還有益于進(jìn)一步推動開發(fā)利用我國豐富的柑橘資源。

3.5 抗血小板過度聚集作用

血小板是血液的一種成分，是最小的非核血細(xì)胞，其功能（與凝血因子一起）是通過凝塊對血管損傷出血作出反應(yīng)，從而引發(fā)血凝塊。然而，若血小板過度聚集則容易引發(fā)心血管疾病，特別是可能增加患冠心病的風(fēng)險，所以必須嚴(yán)格控制聚集過程。ZARAGOZA等[46]探究了柑橘中所含有的NAR、柚皮苷以及香豆素類藥物抑制血小板活性的作用，試驗從40名健康的不吸煙者身上采集血液，分別測定柚皮苷、NAR等與GPIIb/IIIa受體結(jié)合的百分比。結(jié)果表明，柚皮苷呈現(xiàn)出最大的抗血小板活性，在血小板受體中所占的百分比為（14.82%±0.81%），另外，NAR、七葉亭也表現(xiàn)出顯著的抗血小板能力和一些受體結(jié)合能力，香豆素抗血小板和受體結(jié)合能力相對較低。

此外，黃曼婷等[47]比較了柑橘中不同種類黃酮抑制血小板的活性強弱，通過比濁法檢測TAN、NOB等六種成分在大鼠富血小板血漿（PRP）或洗滌血小板中對二磷酸腺苷（ADP）誘導(dǎo)的大鼠血小板聚集的抑制作用。結(jié)果表明NOB的抑制作用最強，橘紅素次之，隨后是HES、NAR、橙皮苷以及柚皮苷。根據(jù)以上研究推斷，柑橘黃酮有望成為破壞血小板聚集的天然調(diào)節(jié)劑和抗血小板藥物。但目前許多關(guān)于柑橘類水果抗血小板潛力的研究都還受到體外觀察濃度和體內(nèi)生理血漿濃度之間缺乏聯(lián)系的限制，在未來還需要對柑橘類黃酮的抗血小板潛能進(jìn)行更加詳細(xì)特別是基于體內(nèi)模型的研究[48]。

4 柑橘中黃酮類化合物的應(yīng)用現(xiàn)狀

隨著社會的進(jìn)步和食品工業(yè)的發(fā)展，人們的消費水平提高，更加注重健康養(yǎng)生，飲食營養(yǎng)均衡。人體獲取黃酮類化合物的唯一途徑就是通過食品攝入。果蔬黃酮以其成分的天然、安全性，且具有抗氧化、抗炎及調(diào)節(jié)內(nèi)分泌等多種生理活性功能優(yōu)勢，逐漸成為人們選購保健食品、藥品等產(chǎn)品時的目標(biāo)，市場上相關(guān)品牌也逐漸增多。除此之外，柑橘黃酮還可作為添加劑用于化妝品行業(yè)、肉類果蔬保鮮以及飼料加工等方面。這些產(chǎn)品在調(diào)節(jié)人體生理功能，預(yù)防疾病，提高人們的生活質(zhì)量，為食用者帶來健康體魄方面都具有重要作用。

4.1 食品、化妝品添加劑

柑橘類黃酮在功能性食品、膳食補充劑、功能飲料開發(fā)等方面的優(yōu)勢顯著。從柑橘屬黃酮新橙皮苷中衍生氫化得到的新橙皮苷二氫查耳酮（Neohesperidin dihydrochalcone，NHDC）的甜度為蔗糖的950倍，熱量小，余味持久，可直接用作食品、醫(yī)療及飼料等領(lǐng)域的功能性甜味劑[49]。從酸橙中分離出的黃酮糖苷新地奧明，可以抑制水果在加工過程中由于柚皮苷和檸檬苦素（Limonin）所帶來的苦味。若考慮將新地奧明復(fù)配與環(huán)糊精包合，有望作為苦味抑制劑改善橘子果酒的風(fēng)味[50]。除此之外，有試驗證明將柑橘黃酮中的柚皮苷作為抗氧化劑添加到植物油中時，可以有效延長植物油的穩(wěn)定性，且風(fēng)味要強于2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚（BHT）。另外，由于柑橘黃酮的抑菌性，還可用作食品防腐劑，延長食品的保藏期[51]。

牛麗娜等[52]利用柑橘黃酮提取物制作保濕護(hù)膚霜，分別測定不同時間段受試者皮膚的含水量，以此來驗證柑橘保濕霜的保濕作用。占晨等[53]將黃酮加入到美白霜化妝品中，挑選志愿者進(jìn)行半臉試用，試驗8周后對美白霜的理化性質(zhì)及使用效果進(jìn)行檢測，比較志愿者使用美白霜前后臉部色澤的變化。驗證了含有黃酮類化合物的化妝品具有美白效果，且無毒無副作用，制備工藝簡單可行。

4.2 肉類、果蔬保鮮

眾所周知，柑橘黃酮具有抑菌、抗氧化等功能，從植物中提取生理活性成分應(yīng)用于肉類及果蔬的保鮮，既能延長產(chǎn)品貨架期又對人體無副作用，因此成為近幾年的研究熱點。姚曉琳等[54]利用從柑橘中提取出的PMFs良好的抑菌活性，將制備好的PMFs溶液對鮮豬肉進(jìn)行均勻涂膜處理，并采用PE有氧包裝形式，選取肉質(zhì)色澤、pH、細(xì)菌總數(shù)等作為判斷豬肉新鮮程度和品質(zhì)變化指標(biāo)，結(jié)果顯示，經(jīng)PMFs涂膜后的冷卻肉保質(zhì)期可達(dá)8 d，且對肉色無不良影響，與氣調(diào)包裝的保鮮效果接近[55]。

王曉君[56]研究了橙皮黃酮對于番茄的保鮮效果，用75%的乙醇溶液配制成不同濃度的柑橘黃酮溶液均勻噴涂到紙上制成橙皮黃酮保鮮紙（OPF保鮮紙），將其晾干后進(jìn)行番茄的單果包裝，放入最適溫度（10±1）℃下貯藏，每隔三天測定一次指標(biāo)。根據(jù)結(jié)果可以看出使用了OPF保鮮紙包裝的番茄相較于沒有任何包裝普通貯藏的番茄，水分散失量和硬度下降，呼吸強度減弱，說明黃酮類化合物延遲了番茄呼吸髙峰的到來時間，抑制丙二醛（MDA）含量的增加同時保持著較髙的活性酶活，減緩了番茄在貯藏期膜脂的氧化速率，從而增強番茄在貯藏期間的抗衰老能力，對番茄起到良好的保鮮作用，具有一定的現(xiàn)實意義。

4.3 保健品成分

NAR是一種存在于柑橘皮渣中的黃酮類化合物，美國路易斯安那州立大學(xué)生物醫(yī)學(xué)研究中心最近的一項研究表明，NAR能夠激活那些負(fù)責(zé)改善血糖控制和增加燃燒熱量的基因，有助于人體維持健康體重[57]。流行病學(xué)研究表明，攝入黃酮類化合物可降低肥胖誘發(fā)的炎癥。SILVEIRA等[58]將35名健康志愿者分為正常體重組與超重組，將柑橘榨汁，并讓所有志愿者連續(xù)8周每日飲用富含黃酮類化合物的柑橘汁，分別在最初和最后一天進(jìn)行臨床和生化評估，對比前后數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn)兩組志愿者在食用紅橙汁后的腹型肥胖無變化，但低密度脂蛋白膽固醇、C-反應(yīng)蛋白下降（CRP），血清抗氧化活性增加。正常體重組志愿者的胰島素抵抗和收縮壓降低，超重志愿者的舒張壓降低。紅橙汁在試驗中顯示出抗炎、抗氧化和降脂的特性，可以防止代謝綜合征的發(fā)展，添加至保健品中有較好效果。

4.4 家禽飼料成分

由于肉用雞（肉雞）生長速度的遺傳選擇以及飼養(yǎng)它們的環(huán)境條件等因素，使得肉用雞非常容易受到氧化應(yīng)激的影響，在這種狀態(tài)下，雞體內(nèi)活性氧（ROS）和活性氮（RNS）的產(chǎn)生已經(jīng)超過了其自身抗氧化系統(tǒng)的清除能力，這會為家禽的產(chǎn)量與健康帶來不良影響[59]。RAFIEIA等[60]研究發(fā)現(xiàn)將柑橘中所含有的黃酮類化合物作為天然抗氧化劑加入到肉用雞飼料中，既可以減輕肉用雞的氧化應(yīng)激現(xiàn)象同時又可以提高黃酮類化合物的生物利用度。槲皮素（Quercetin）屬于柑橘黃酮中的黃酮醇類。BHUTTO等[61]的試驗發(fā)現(xiàn)槲皮素以劑量依賴的方式增加肉用雞對P-糖蛋白的吸收和過度表達(dá)。GOLIOMYTIS等[62]在肉用雞飼料中分別摻入了0.5和1 g/kg的槲皮素，研究報告稱槲皮素能夠通過降低脂質(zhì)過氧化率延長了飼料的貨架期。目前，槲皮素已經(jīng)被廣泛用作雞飼料中的植物添加劑，以改善禽類的生長性能和肉質(zhì)。綜上所述，將柑橘果皮適量的添加到家禽飼料中，其中的有效成分可改善動物的生產(chǎn)性能及畜產(chǎn)品品質(zhì)，節(jié)約飼料資源，降低飼料成本，具有明顯的生態(tài)效益。

5 總結(jié)與展望

本文圍繞柑橘中黃酮類化合物的提取技術(shù)、生理功能活性以及最新應(yīng)用現(xiàn)狀這三個方面的研究進(jìn)展進(jìn)行論述，從以上調(diào)查總結(jié)中可以得出提取黃酮類化合物常見的方法有：溶劑浸提、超臨界C O2流體萃取、超聲波、復(fù)合酶輔助提取法等，且柑橘中黃酮類化合物具有抗氧化、抗炎抑菌、抗衰老以及抗血小板過度聚集等多種生理功能活性，依據(jù)其眾多優(yōu)良特性可將其應(yīng)用于膳食補充劑、果蔬保鮮以及家禽飼料加工等各個方面，開發(fā)前景良好，利用價值極高。然而未來亟需解決的問題仍然存在，由于柑橘黃酮不同分子結(jié)構(gòu)的異質(zhì)性和生物利用度數(shù)據(jù)的缺乏，且沒有足夠的方法來測量人體內(nèi)的氧化損傷，有關(guān)長期攝入黃酮類化合物會對人體造成什么影響等方面的問題，客觀終點的測量仍然是困難的。因此，需要改進(jìn)分析技術(shù)，進(jìn)行分子對接研究，以提高柑橘黃酮在飲食中的有效性，從而改善人類健康。我國柑橘資源的豐富為柑橘黃酮的綜合利用提供了物質(zhì)基礎(chǔ)，提高柑橘加工業(yè)的附加值，推動“零浪費”柑橘產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，具有重大的現(xiàn)實意義和經(jīng)濟(jì)意義。