肅州區(qū)羊布魯氏桿菌病流行調查及分析

文│馬昊杰（甘肅省酒泉市肅州區(qū)下河清鎮(zhèn)農(nóng)業(yè)農(nóng)村綜合服務中心）

甘肅省酒泉市肅州區(qū)畜牧業(yè)發(fā)展迅速，其中牛羊養(yǎng)殖已成為當?shù)匦竽翗I(yè)支柱性產(chǎn)業(yè)，近年來肅州區(qū)部分羊場疑似布魯氏桿菌病感染引發(fā)母羊流產(chǎn)的案例逐漸增多，相關部門曾采集血清樣品進行檢測，發(fā)現(xiàn)為布魯氏桿菌抗體陽性，說明是布魯氏桿菌病導致該地區(qū)母羊流產(chǎn)的原因之一。

布魯氏桿菌病是由馬耳他布魯氏桿菌（B.melitensis）感染所引起的，馬耳他布魯氏桿菌為重要的人畜共患性病原，可感染多種動物，包括牛、羊和豬等，引發(fā)嚴重的臨床癥狀，其中包括流產(chǎn)不孕、子宮內膜炎和關節(jié)炎等，對人畜健康造成較大的威脅。當前，僅加拿大、日本和歐洲部分國家成功凈化該病。目前布魯氏桿菌病仍然在我國呈地方性流行，尤其是在一些牛羊等草食動物養(yǎng)殖業(yè)發(fā)達的省份或地區(qū)。有研究表明，雖然當前我國牛、羊個體布魯氏桿菌病陽性率分別為3.1%和3.3%，但群體陽性率高達29%和34%，由于羊布魯氏桿菌是人感染該病的主要來源，因此對布魯氏桿菌病的防控和凈化尤為重要。

當前，對于布魯氏桿菌病的診斷方法主要包括試管凝集試驗、虎紅平板凝集試驗和補體結合試驗等，該類檢測方法均存在操作簡便和診斷便捷等特點，十分適合臨床大規(guī)模樣品的檢測。本研究于2020——2021年從酒泉市肅州區(qū)部分羊場采集血清樣品1543份，用于布魯氏桿菌抗體檢測，旨在了解近年來羊布魯氏桿菌病在肅州區(qū)的流行情況，以期為該病的防控提供數(shù)據(jù)參考。

一、材料與方法

1.血清樣品采集。2020——2021年從肅州區(qū)部分鄉(xiāng)鎮(zhèn)的18個羊場共采集外表健康羊群血清樣品1543份，用于布魯氏桿菌病抗體檢測，其中2020年和2021年采集血清樣品數(shù)量分別為750份和793份。采血方式為頸靜脈采血（3～4毫升/頭），室溫靜置4～6小時取上清，其后經(jīng)低速（3000轉）離心5分鐘，取上清置于1.5毫升離心管，標記采樣時間、地點等信息，其后將樣品保存于4℃待檢。

2.檢測方法。首先采用虎紅平板凝集試驗對1543份血清樣品進行初步檢測，其后將陽性樣品再通過試管凝集試驗進行復核，以統(tǒng)計被檢測樣品布魯氏桿菌病的陽性率。

虎紅平板凝集試驗：將被檢測血清（30微升）和虎紅平板凝集抗原（30微升）充分混勻后滴加在滅菌的玻璃板上，同時設置陰性和陽性對照。混勻4分鐘內若出現(xiàn)肉眼可見的凝集現(xiàn)象則判定為布魯氏桿菌抗體陽性，若無凝集現(xiàn)象則為陰性。

試管凝集試驗：將虎紅平板凝集試驗初篩為陽性血清樣品，以1∶5、1∶25、1∶50和1∶100梯度稀釋后，加入等體積的抗原，并設置陰性和陽性對照。將試驗樣品、陰性和陽性對照及比濁管置于37℃恒溫箱內24小時，參照國家標準GB/T18646/2002動物布魯氏桿菌診斷技術，根據(jù)各試管液體清亮程度判斷結果。

二、結果

1.肅州區(qū)不同地區(qū)羊布魯氏桿菌病感染情況調查結果。為初步了解肅州區(qū)羊布魯氏桿菌病感染情況，試驗從肅州區(qū)部分地區(qū)18個羊場共采集1543份血清樣品用于布魯氏桿菌抗體檢測。結果發(fā)現(xiàn)，共37份血清樣品為布魯氏桿菌抗體陽性，平均檢出率為2.4%；不同鄉(xiāng)鎮(zhèn)來源樣品布魯氏桿菌病陽性率存在差異，其中鄉(xiāng)鎮(zhèn)4來源樣品的陽性率最高為3.44%，鄉(xiāng)鎮(zhèn)1-3陽性率分別為1.42%、2.84%和1.79%（表1）。

表1 肅州區(qū)不同地區(qū)羊布魯氏桿菌病感染情況調查結果

2.肅州區(qū)不同年份及品種羊布魯氏桿菌病感染情況調查結果。研究于2020年和2021年采集血清樣品數(shù)量分別為750份和793份，檢測結果發(fā)現(xiàn)2020年來源樣品布魯氏桿菌病檢出率高于2021年，分別為2.93%和1.89%（表2）；此外，研究采集的780份、320份和443份血清樣品分別來自小尾寒羊、湖羊和高山細毛羊，檢測結果發(fā)現(xiàn)小尾寒羊布魯氏桿菌檢出率最高為3.85%，湖羊和高山細毛羊檢出率分別為1.56%和0.45%。

表2 肅州區(qū)不同時期羊布魯氏桿菌病感染情況調查結果

3.不同飼養(yǎng)模式羊群布魯氏桿菌病感染情況調查結果。如表3所示，試驗采集樣品來源羊場分為自繁自養(yǎng)和半自繁自養(yǎng)（部分羊群外購），采集樣品數(shù)量分別為864份和679份，其中分別有10份和27份樣品檢測為布魯氏桿菌抗體陽性，其平均陽性率為1.16%和3.98%。此外，部分半自繁自養(yǎng)羊場外購羊群時不檢測布魯氏桿菌抗體，該類羊場來源樣品的布魯氏桿菌抗體陽性率高達5.29（19/359），而外購前檢測布魯氏桿菌抗體羊場來源樣品的陽性率稍低，為2.5%（8/320）。

表3 不同飼養(yǎng)模式羊群布魯氏桿菌病感染情況調查結果

三、討論

布魯氏桿菌屬于人畜共患性病原，其感染人類后可導致嚴重的臨床癥狀，其中包括關節(jié)炎和繁殖障礙（流產(chǎn)、死胎等）；同時該病原亦可感染多種動物，如牛、羊等。因此，布魯氏桿菌的流行對畜牧業(yè)發(fā)展、相關養(yǎng)殖人員和消費者健康均可造成較大的威脅。雖然近年來政府相關部門花費大量人力和物力用于布魯氏桿菌病的防控或凈化，但目前羊布魯氏桿菌在我國不同地區(qū)仍然廣泛流行。據(jù)相關文獻報道，2014年甘肅省羊布魯氏桿菌病平均檢出率為4.13%，其中武威市和張掖市部分地區(qū)檢出率分別高達11.34%和24.5%；而王耀東等調查結果發(fā)現(xiàn)甘肅省臨澤縣牛羊布魯氏桿菌病檢出率均低于1%。本次研究結果表明，2020——2021年酒泉市肅州區(qū)部分羊場布魯氏桿菌病平均檢出率為2.4%（37/1543），其結果高于董新燕于2016——2018年對肅州區(qū)羊布魯氏桿菌病流行情況的調查結果（0.22%，7/3203），這可能與檢測樣品數(shù)量、樣品來源等有關，但這也說明近年來肅州區(qū)羊布魯氏桿菌病流行趨勢較為嚴峻，相關養(yǎng)殖戶和部門應提高警惕。

經(jīng)統(tǒng)計發(fā)現(xiàn)，被調查的4個鄉(xiāng)鎮(zhèn)均存在布魯氏桿菌病陽性羊群，說明該病在肅州區(qū)廣泛流行，這無疑對肅州區(qū)牛羊養(yǎng)殖業(yè)和相關從業(yè)人員健康可能造成較大的威脅。值得注意的是，2020年樣品較2021年樣品檢出率高，這可能是由于2020年及時對養(yǎng)殖戶反饋檢測數(shù)據(jù)，提高了其對該病的防控意識，使得該病在2021年流行率有所降低，但仍然未達到凈化的水平。

隨著肅州區(qū)羊養(yǎng)殖業(yè)快速發(fā)展，部分養(yǎng)殖場會外購羊群以提高存欄量或進行育肥，但其中個別養(yǎng)殖場在外購羊群時忽略相關疾病的檢測，導致病原進入羊場使得疾病迅速流行，給羊場造成巨大的經(jīng)濟損失。本研究結果發(fā)現(xiàn)自繁自養(yǎng)養(yǎng)殖場布魯氏桿菌檢出率顯著低于外購羊群養(yǎng)殖場，而且外購羊群不進行疾病監(jiān)測的養(yǎng)殖場樣品布魯氏桿菌病檢出率高于進行疾病監(jiān)測的養(yǎng)殖場；此外，不同品種中以小尾寒羊布魯氏桿菌病陽性率最高，這可能是由于大部分養(yǎng)殖場外購羊品種為小尾寒羊，而湖羊和高山細毛羊陽性率相對較低，這也再次提示自繁自養(yǎng)可有效防控布魯氏桿菌病的流行，而且外購羊群前進行疾病監(jiān)測是十分重要的。