藿香正氣丸的質(zhì)量標準分析

【摘要】目的：探究藿香正氣丸的含量測量方法。方法：對藿香正氣丸中的厚樸、白芷及陳皮、廣藿香等成分進行鑒別，并使用 HPLC 法對制劑中的厚樸酚及橙皮苷等進行測定，獲得相關(guān)的結(jié)果。結(jié)果： TLC 法及 HPLC 法檢測藿香正氣丸的質(zhì)量標準準確度較高，數(shù)據(jù)具有可靠性。結(jié)論：藿香正氣丸在質(zhì)量標準檢驗過程中，TLC 法及 HPLC 法檢測具有重要意義，檢測方法快捷，檢測結(jié)果準確，可作為藿香正氣丸質(zhì)量控制標準。

【關(guān)鍵詞】藿香正氣丸;質(zhì)量標準;HPLC 法;TLC 法

[中圖分類號]R282 [文獻標識碼]A[文章編號]2096-5249（2022）01-0188-03

藿香正氣丸包括水丸及濃縮丸，其中含有紫蘇、廣藿香、白術(shù)、陳皮、厚樸、大棗及生姜等，藥物聯(lián)合制劑具有理氣和中及解表化濕功效[1]。在頭痛昏重及外感風寒等癥狀具有顯著效果，治療蕁麻疹及酸中毒等疾病同樣具有效果。該方劑制劑簡單、效果顯著，在臨床廣泛應用，質(zhì)量標準往往局限在微觀研究及常規(guī)檢查上，為有效控制質(zhì)量標準，還需對藿香正氣丸進行綜合研究，與藿香正氣水及藿香正氣滴丸進行對比等，本研究中，對藿香正氣丸水丸及濃縮丸成分進行 TLC 鑒別，對藿香正氣丸含量進行分析，從而更為全面的控制藥物質(zhì)量。

1 材料與設(shè)備

1.1設(shè)備使用 Waters e2695型高效液相色譜儀及 AS1512560型超聲波清洗機、四號藥篩等。

1.2材料選擇橙皮苷對照品（質(zhì)量分數(shù)為96.1%，批號為110721-201617）及厚樸酚對照品（質(zhì)量分數(shù)為99.3%，批號為110730-201614），均在藥品檢定研究院采購，藿香正氣丸（水丸，批號為160501，山西香菊藥業(yè)、陜西漢王藥業(yè)）藿香正氣丸（濃縮丸，批號為160504，南京同仁堂藥業(yè)，批號20150807，馬鞍山天?？邓帢I(yè)，批號14C30，蘭州佛慈制藥），選擇超純水及色譜純等。

2 方法及結(jié)果

2.1 TLC 鑒別厚樸及廣藿香選擇濃縮丸2.5 g及水丸6 g，研磨后，加入20 mL 乙醚，經(jīng)超聲處理15 min，參數(shù)設(shè)置為150 W，45 Hz，經(jīng)過濾后將濾液揮發(fā)，殘留物質(zhì)添加1 mL 乙酸乙酯溶解，將其作為供試品溶液[2]。選擇厚樸酚及百秋李醇，加入乙酸乙酯轉(zhuǎn)變?yōu)閮煞N質(zhì)量濃度為1 mg/mL 對照品溶液。將上述溶液吸取10 μL后，將5 μL對照品放在硅膠 G 板上。展開劑選擇乙酸乙酯-石油醚，對溫度進行調(diào)整，加熱至60℃～90℃，取出及晾干后，噴涂50 mL/L 香草醛硫酸溶液，加熱到斑點顯色清晰，對結(jié)果進行觀察，供試品與對照品在色譜對應的位置上，顯現(xiàn)出相同的斑點。

2.2 TLC 鑒別陳皮選擇2.5 g 濃縮丸及6 g 水丸，其中加入20 mL 水，經(jīng)超聲處理5min 后使其溶解，加入20 mL 環(huán)乙烷混合均勻，分取水層，并利用乙酸乙酯混合及提取3次，每次加入20 mL，融合乙酸乙酯液備用，將干溶劑揮發(fā)，加甲醇2 mL，將其中的殘渣溶解，將其作為供試品溶液[3]。稱量0.5 g 陳皮作為對照材料，其中加入甲醇20 mL，經(jīng)超聲處理30 min，對樣品進行過濾及揮干，加入1 mL 甲醇使殘渣溶解，將其作為對照藥材溶液。將上述供試品溶液吸取5 μL，對照品溶液及藥材溶液各為2 μL，在同一硅膠 G 薄層板上點5 μL溶液。展開劑是甲醇-乙酸乙酯-水，比例為17：100：10，將樣品取出及晾干，噴灑50 mL/L 三氯化鋁溶液，放置在紫外光燈365nm 處檢驗，研究結(jié)果顯示，供試品色譜中陳皮對照品及橙皮苷對照普處于對應的色譜位置，顯現(xiàn)出一致的熒光斑點。

2.3 TLC 鑒別甘草以上述水層為標準，加入正丁醇混合搖勻3次，10 mL/次，其中融合丁醇液，清水洗滌兩次，10 mL/次，合并正丁醇液，直到干燥，并加入2 mL 甲醇使其中的殘渣溶解，將其作為供試品。選擇合適計量的甘草酸銨作為對照品，加入甲醇制作成質(zhì)量濃度為2 mg/mL 的溶液，將其作為對照品溶液。吸取兩種溶液，每種為3μL[4]。放在同意硅膠 GF254板上，使用的展開劑為正丁醇、甲醇、氨溶液，比例為10：3：4，將其展開及晾干，放置在紫外光燈254nm 處進行檢驗，供試品色譜中，與甘草酸銨對照品色譜位置上，均顯現(xiàn)出相同的斑點。

2.4 TLC 鑒別白術(shù)選擇2.5 g 濃縮丸及6 g 水丸，

經(jīng)過研磨后，加入正己烷20 mL，經(jīng)過超聲處理后，過濾揮發(fā)溶劑，殘渣融合正己烷1 mL 溶解，將其作為供試品溶液。選擇1 g 白術(shù)，通過上述方法轉(zhuǎn)變?yōu)槿芤?，吸取供試品溶液及對照藥材溶液，放在同一硅膠 G 板上，展示劑為乙酸乙酯、石油醚，比例為1： 5，溫度控制在60℃～90℃，經(jīng)取出后晾干，放置在紫外光等365nm 檢驗，相關(guān)結(jié)果顯示，供試品色譜中白術(shù)對照組色譜處于同一位置，顯現(xiàn)出熒光斑點。

2.5 TLC 鑒別白芷選擇環(huán)乙烷液20 mL，低溫回收到溶解，加入1 mL 乙酸乙酯溶解殘渣，將其作為供試品溶液。選擇白芷作為對照藥材0.5 g，加入乙醚10 mL，經(jīng)過混合搖勻1 h，經(jīng)過過濾后濾干，加入1 mL 乙酸乙酯，將其作為溶液[5]。選擇歐前胡素及異歐前胡素作為對照品，加入乙酸乙酯質(zhì)量濃度控制在1mg/mL，形成兩種對照溶液。吸取供試品溶液及白芷溶液5 μL，對照品溶液均為3 μL，放在同一硅膠 G 板上，展開劑為乙醚-石油醚，比例為2：3，溫度控制在60℃～90℃，經(jīng)過展開后晾干，放在紫外光燈365nm 處檢驗，研究結(jié)果顯示，供試品色譜中，白芷對照藥材及歐前胡素、異歐前胡素處于對應的位置上，顯現(xiàn)出相同的熒光斑點。

2.6 HPLC 測定在保持色譜條件確定的情況下，展開系統(tǒng)性實驗，填充劑為十八烷基硅烷鍵合硅膠，流動相 A 是乙腈，流動相 B 為水，梯度處理，經(jīng)過0～30 min 25%及 75%A，30～40 min 為75%～ 80%A，流動速度為1 mL/min，波長控制在283nm，柱溫保持在25℃，根據(jù)厚樸酚、橙皮苷等進行計算，指標不低于3000，供試品溶液在制作過程中，選擇供試品20 μL，注入液相色譜儀，橙皮苷及厚樸酚理論塔板數(shù)值均大于3000，分離度在1.5以上，滿足要求。對對照品溶液進行制備，精密稱取水丸及濃縮丸2.18 g 及0.85 g，分別放置在250 mL 錐形瓶，最終獲得的體積分數(shù)為70%的甲醇溶液25 mL，混合均勻后進行質(zhì)量稱量，通過超聲處理30 min，冷卻后將失去的質(zhì)量補足，持續(xù)獲得濾液，最終獲得供試品溶液[6]。

在上述制備條件下對獲得混合對照溶液，進樣分別為2、5、10、15、20μL，對峰值面積進行檢測，獲得進樣量及橫坐標、峰值面積及縱坐標，最終獲得線性回歸返程，橙皮苷=78455+29571，r=0.9990。厚樸酚=21084+16511，r=1.0000，研究結(jié)果顯示厚樸酚及橙皮苷分別處于0.94～9.44 μg、0.89～8.58 μg范圍，表現(xiàn)出良好的線性關(guān)系，詳見表1。

在穩(wěn)定性實驗中，稱取水丸及濃縮丸2.18 g 及0.85 g 相關(guān)實驗供試品，計量為20μL，分別在0、2、4、8、12、18及 24 h 進行測定，對峰值面積進行分析，獲得橙皮苷及厚樸酚兩種成分的 RSD 值為1.52%、1.71%，指標均在2%以下，數(shù)據(jù)滿足實驗要求。在家樣回收率實驗中，稱取0.83 g 濃縮丸及2.17 g 水丸，分別加入4.0081 mg 及1.8879 mg 橙皮苷進行對照，1.9264厚樸酚對照品及2.5124厚樸酚對照品根據(jù)上述研究方法制備供試品液，進樣為20 μL，對峰值面積進行測定，對 RSD 及回收率進行計算。最終獲得水丸加樣平均回收率為100.65%、102.45%、100.15%，RSD 值分別為0.86%及 1.25%、0.48%，濃縮丸平均加樣回收率為100.85%及 101.64%、100.51%，RSD 值分別為1.26%、1.14%、1.22%，實驗研究顯示，供試品制備溶液的整體準確性較高，數(shù)據(jù)具有可靠性。

3 討論

藿香正氣丸最早出現(xiàn)在宋朝，我國制定的方劑中，對其進行記錄及介紹，其中包括紫蘇葉及大腹皮、法半夏、白術(shù)及桔梗、廣藿香、陳皮等成分，該藥物的功能在于芳香化濕、解表和中。在藥理上進行分析，藿香正氣丸對圖立體十二指腸具有抑制效果，可以解決抗膽堿藥物導致的腸痙攣，對抗膽堿導致的狗及兔在體腸內(nèi)痙攣中具有良好的抑制功能?？鼓c痙攣作用類似于阿司匹林，對離體長平滑肌積極與抑制功能，對康氯化鋇導致的腸痙攣具有良好的抑制功能。藿香正氣丸對十二指腸及立體豚鼠自動收縮乙酰膽堿具有良好的解痙效果。藿香正氣膠囊具有解痙作用，濃度到達一定的標準后，對離體兔腸具有抑制反應，抑制率在73.28%，對乙酰膽堿及氯化鋇導致的腸痙攣具有抑制反應，抑制率在61%及 68.87%。針對濃度較低的藿香正氣丸具有雙向調(diào)節(jié)功能，濃度值較高的情況下，呈現(xiàn)出完全抑制功能。方劑中單味半夏及茯苓、陳皮經(jīng)過煎煮后，對患者機體功能產(chǎn)生影響，在臨床使用過程中，治療慢性胃炎及急性胃炎效果顯著。相關(guān)數(shù)據(jù)調(diào)查顯示，藿香正氣水對醋酸痙攣刺激導致的內(nèi)臟軀體反射疼痛具有鎮(zhèn)痛功能。在臨床應用過程中，主要針對感冒及蕁麻疹等疾病。藿香正氣丸在腹痛治療中效果顯著，在蕁麻疹患者治療中，部分患者口服 3劑可治療疾病，臨床酸中毒患者治療中，患者口服藿香正氣散劑治療，治療有效率高達87.8%，對失水性中毒患者治療效果更為顯著。失眠患者在治療中，每天口服9 g，口服2次，或者將藿香正氣丸水煎服，經(jīng)過2個月治療后，患者的疾病癥狀有明顯改善，在患者口服藿香正氣丸的同時，聯(lián)合天王補心丸治療效果進一步提升，睡眠質(zhì)量明顯改善。在氣滯胃痛疾病治療中，該疾病與患者情緒不調(diào)相關(guān)，患者常見的癥狀是胃脘痛，患者出現(xiàn)惡心嘔吐癥狀，臨床常規(guī)治療中常見逍遙丸，治療效果一般，使用藿香正氣丸治療，效果優(yōu)于傳統(tǒng)治療方法，在淺表性胃炎及萎縮性胃炎患者治療中，患者口服藿香正氣丸，疾病癥狀明顯改善，有效率高達92.5%。在寒哮疾病治療中，患者口服藿香正氣丸治療，可達到健脾及解表的龔恩，對外感風寒濕邪引發(fā)的寒哮患者治療效果顯著。在研究過程中，除關(guān)注藿香正氣丸治療效果的同時，臨床常見藿香正氣丸的治療標準作為研究重點，合理控制質(zhì)量標準，有利于提升患者疾病治療的有效率，降低患者用藥時不良反應發(fā)生率。臨床通過實驗的方式對藿香正氣丸治療標準進行計算，分析其中的成分，使用不同測量方法，掌握其中的有效成分變化，達到標準的劑量，使兒童及成人均能用藥，保證患者治療效果。

在本研究中對既往資料展開分析，并選擇乙醚及正己烷兩種試劑，以同樣的方法處理樣本，觀察到藿香正氣丸濃縮丸，兩種試劑均能見到比較理想的效果，TLC 法中利用乙醚提取水丸，可見到相同的斑點，但受到干擾的斑點數(shù)量較多。針對兩種丸劑，正己烷的效果良好，在研究過程中測定橙皮苷及厚樸酚含量，參照《中國藥典》2015年藿香正氣水及膠囊對橙皮苷等進行檢測，甲醇及水的比例保持在10%～90%，甲醇-水-乙腈比例為40：40：20。獲得梯度脫洗等方法，但在研究中發(fā)現(xiàn)，乙腈2 mL/ L 磷酸溶劑系統(tǒng)峰值分離度一般，峰形差，最終獲得其他兩種分離度及理論塔板數(shù)等，經(jīng)過全波段掃描，觀察到橙皮苷在283nm 波長下最大吸收，而厚樸酚在293nm 波長最大吸收，在283nm 處均能達到較強的吸收，整體檢測方法快捷、簡單。在對照品及供試品在甲醇溶劑中溶解性較好，液相色譜保留一段時間后能保持一致，整體分離度較高，在15、30、45 min 超聲后處理中，30 min 效果最好，質(zhì)量鑒定及回收率較高，基線噪聲小，能夠作為藿香正氣丸的質(zhì)量控制方法。

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作者簡介：黃淡霞，女，廣州中醫(yī)藥大學第一附屬醫(yī)院藥師。E-mail：634470173@qq.com

（收稿日期：2021-6-16 接受日期：2021-7-30）