慢性乙型肝炎患者血清HBV pgRNA與HBV DNA和HBeAg水平變化關(guān)系研究

盧艷玲 李小紅 陳海濤

慢性乙型肝炎(CHB)是一種流行于世界各國的傳染病，該病由乙型肝炎病毒(HBV)引起，目前醫(yī)療行業(yè)普遍認(rèn)為慢性肝病的主要病因?yàn)镃HB[1]。亞太地區(qū)是HBV攜帶的高發(fā)地區(qū)，在我國，CHB患者在病毒性肝病患者中占比可達(dá)80%左右[2]。過去聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的檢測限于103以上的樣本，對低濃度樣本的檢測力度不足，影響了HBV復(fù)制情況的判斷[3]。隨著醫(yī)療行業(yè)與新興科技的發(fā)展與結(jié)合，基因定量檢測的敏感度得到顯著提高[4]。目前國內(nèi)相關(guān)研究多為定性檢測，本研究以72例CHB患者為研究對象，研究HBV pgRNA、HBV DNA水平與HBeAg水平的相關(guān)性，結(jié)果如下。

資料與方法

一、一般資料

選擇72例CHB患者，樣本入選時(shí)間為2018年6月至2021年6月，根據(jù)HBeAg水平分組，將1<樣本值/臨界值(S/CO)≤5的患者納入低濃度組(16例)，510的患者納入高濃度組(21例)。三組性別、年齡無明顯差異，P>0.05；三組白蛋白(Alb)水平比較，低濃度組>中濃度組>高濃度組，三組天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)水平比較，低濃度組<中濃度組<高濃度組，P<0.05。見表1。本研究已獲得醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

表1 三組一般資料比較[n，(±s)]

二、研究對象

納入標(biāo)準(zhǔn)：①臨床確診[5]；②年齡>18周歲；③對研究知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并器質(zhì)性病變；②其他肝炎；③遺傳性、免疫性、藥物性、酒精性肝臟疾病。

三、研究方法

(1)HBV pgRNA定量檢測：使用北京大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院研制的核酸試劑盒進(jìn)行檢測。取血清250 μL，病毒核酸RNA使用磁珠法提取，DNA以Dnase I酶消化，熒光定量PCR儀同時(shí)反轉(zhuǎn)錄、擴(kuò)增病毒核酸和內(nèi)標(biāo)。

(2)核酸釋放劑和5 μL血清充分混合，將血樣中的HBV DNA快速裂解、釋放，之后使用Infinity-48s型全自動(dòng)PCR分析儀(美國賽沛公司Cepheid)定量檢測HBV DNA。

(3)酶聯(lián)免疫吸附法檢測HBeAg，計(jì)算HBeAg臨界值的方法為CO=陰性對照組均值(OD)×2.1，以S/CO的比值作為HBeAg定量檢測的結(jié)果，S/CO>1判定為陽性。

四、觀察指標(biāo)

①比較不同HBeAg水平分組中HBV pgRNA、HBV DNA水平；②分析HBV pgRNA、HBV DNA水平與HBeAg水平的相關(guān)性。

五、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

結(jié) 果

一、三組血清HBV pgRNA、HBV DNA水平比較

三組HBV pgRNA、HBV DNA水平比較，均有低濃度組<中濃度組<高濃度組，P<0.05，見表2。

表2 三組血清HBV pgRNA、HBV DNA水平比較 [拷貝/mL，(±s)]

二、HBeAg、HBV pgRNA與HBV DNA相關(guān)性

血清HBV pgRNA與HBeAg呈正相關(guān)(r=0.566，P=0.002)，血清HBV DNA與HBeAg呈正相關(guān)(r=0.496，P=0.005)。

討 論

HBV pgRNA自1996年被發(fā)現(xiàn)開始逐漸成為國內(nèi)研究的熱點(diǎn)問題，該指標(biāo)的一個(gè)重要臨床價(jià)值在于反映HBV cccDNA的水平[6-7]。本研究顯示，三組HBV pgRNA水平比較，低濃度組<中濃度組<高濃度組。潘美辰等[8]納入CHB、乙肝肝硬化和肝癌患者為研究對象，研究CHB進(jìn)展的不同階段中多項(xiàng)血清標(biāo)志物的相關(guān)性，該研究顯示，隨著HBeAg水平的降低，HBeAg陽性檢檢出率明顯降低，這與本文結(jié)果互為印證。HBV pgRNA的形成主要與HBV cccDNA為模板的轉(zhuǎn)錄合成有關(guān)，而HBV pgRNA則是HBeAg的翻譯模板，因此HBeAg和HBV pgRNA表現(xiàn)出一定的相關(guān)性[9]。HBV pgRNA作為HBV cccDNA轉(zhuǎn)錄過程的產(chǎn)物，可較好地反映出HBV的活躍程度和肝細(xì)胞中HBV cccDNA的水平，在停藥后CHB復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)的預(yù)測等方面具有一定意義[10-11]。HBV pgRNA是HBV DNA的反轉(zhuǎn)錄模板，因此HBV DNA水平會(huì)受到HBV pgRNA的影響，核苷酸類藥物抗HBV治療對于HBV的反轉(zhuǎn)錄過程有一定作用，對HBV pgRNA的反轉(zhuǎn)錄進(jìn)行阻斷，從而達(dá)到抑制HBV DNA水平的效果[12]。

本研究顯示，三組HBV DNA水平比較，低濃度組<中濃度組<高濃度組，C基因和前C基因共同產(chǎn)生一條p25前體多肽鏈，在自身消化作用和轉(zhuǎn)膜的作用下，HBeAg最終形成。若CHB患者外周血檢出HBeAg則提示HBeAg陽性[13-15]。

綜上，HBV DNA、HBV pgRNA水平與HBeAg水平呈正相關(guān)。