芪歸紫草油干預(yù)大鼠Ⅳ期壓力性損傷的實(shí)驗(yàn)研究?

程 紅， 馬希佳， 任 娟， 邵 帥， 陳夢(mèng)利， 馬純政△

(1.河南省中醫(yī)院， 鄭州 450002；2.河南中醫(yī)藥大學(xué)， 鄭州 450000)

壓力性損傷是典型的慢性難愈性傷口，其診療、康復(fù)、預(yù)防、護(hù)理及基礎(chǔ)研究等是國(guó)際傷口修復(fù)領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)和難點(diǎn)[1]。尤其是Ⅳ期壓力性損傷愈合困難，嚴(yán)重影響患者生命安全及生活質(zhì)量。前期臨床研究發(fā)現(xiàn)，芪歸紫草油治療深度壓力性損傷能達(dá)到加速創(chuàng)面愈合、減輕疼痛的作用[2]。為深入探討其作用機(jī)制，更有效地解決臨床問題，筆者通過構(gòu)建大鼠Ⅳ期壓力性損傷模型觀察芪歸紫草油對(duì)模型大鼠創(chuàng)面愈合率及血清中C-反應(yīng)蛋白(c-reactive protein,CRP)、腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factor，TNF-α)含量的變化,現(xiàn)報(bào)道如下。本研究通過河南省中醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理委員會(huì)批準(zhǔn)(批號(hào)20180315WZ)。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物

選用SPF級(jí)Wistar健康雄性大鼠 60只，12～14周，體質(zhì)量200～300 g，由河南省中醫(yī)院中心實(shí)驗(yàn)室，購(gòu)自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物許可證號(hào)SCXK(京)2016-0006。大鼠分籠飼養(yǎng)，自由飲水和進(jìn)食。在室內(nèi)溫度22～30 ℃、相對(duì)濕度 50%～70%、明暗周期 12 h 的環(huán)境中適應(yīng)性喂養(yǎng)1周。

1.2 主要試劑

CRP及TNF-α ELISA試劑盒購(gòu)自R&D公司,貨號(hào)分別為EIA05976及0807168。

1.3 造模材料

圓片形鐵片，直徑12 mm、厚1 mm、重1 g，磁通量1750 Gs(磁鐵表面磁通量經(jīng)過檢測(cè))，購(gòu)置于東莞市眾城磁性材料有限公司。

1.4 藥物制備方法

芪歸紫草油制備方法為取黃芪60 g、當(dāng)歸30 g、新疆紫草60 g、大黃30 g(以上中藥均購(gòu)置于河南省中醫(yī)院中藥房)，均勻切碎加入1 kg的芝麻油浸泡1周后，置鍋中用武火加熱至油沸，油溫計(jì)測(cè)量油溫穩(wěn)定在170 ℃后改用文火加熱，油溫穩(wěn)定在100 ℃，不斷攪動(dòng)將藥物炸枯至表面色黑、內(nèi)部色深褐色時(shí)關(guān)火，待油溫降至60 ℃左右時(shí)過濾去渣，加入凡士林30 g、珍珠粉60 g、冰片60 g攪勻成膏狀，置于潔凈容器中高壓滅菌密封保存，綿白糖100 g碾粉裝瓶備用即可[3]。龍珠軟膏購(gòu)自馬應(yīng)龍藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字Z10950017，規(guī)格：每支10 g。

1.5 Ⅳ期壓力性損傷大鼠模型的構(gòu)建

將適應(yīng)性喂養(yǎng)1周的大鼠于實(shí)驗(yàn)前8 h禁食水，用10%水合氯醛(300 mg/kg)腹腔注射麻醉后，在其背部正中線做一深至筋膜的切口鈍性分離，將高壓滅菌的圓片形磁鐵植入大鼠背部皮下，體外采用圓環(huán)形磁片間歇性施加壓力造成皮膚缺血，每次缺血2 h后將磁片拿下，讓局部血流恢復(fù)30 min，如此進(jìn)行1個(gè)循環(huán)。每只大鼠每日進(jìn)行3個(gè)循環(huán)，連續(xù)進(jìn)行4 d即可得Ⅳ期壓力性損傷大鼠模型。

1.6 建模成功判斷標(biāo)準(zhǔn)

顏色：借助無色透明玻璃按壓3 s，皮膚顏色未改變[3]。外觀：鐵片邊緣紅腫糜爛有滲液或滲血?？砂橛袎乃?，針刺皮膚無痛感，鐵片暴露或滑脫，皮膚會(huì)變硬或變成黑色焦痂，伴有骨骼、肌腱或肌肉的暴露[4]。

1.7 分組與治療方法

連續(xù)造模4 d后共有55只大鼠造模成功，淘汰1只，其余54只大鼠隨機(jī)分為模型組、龍珠軟膏組和治療組(芪歸紫草油組)每組各18只。第5天開始清創(chuàng)治療。模型組先用 0.9% 氯化鈉溶液清洗創(chuàng)面，再用碘伏消毒液進(jìn)行3次消毒創(chuàng)面，用無菌剪祛除壞死組織或痂皮后進(jìn)行紗布填塞或覆蓋，保證紗布與創(chuàng)面充分接觸，用透氣低敏膠布固定。龍珠軟膏組外科清創(chuàng)及換藥同模型組，再將龍珠軟膏紗布填塞或覆蓋在皮膚損傷處，保證紗布與創(chuàng)面充分接觸，用透氣低敏膠布固定。治療組(芪歸紫草油組)外科清創(chuàng)及換藥同模型對(duì)照組，再將芪歸紫草油紗布層灑上粉碎后的白糖粉加壓包扎，用透氣低敏膠布固定。所有大鼠均隔天換藥1次，直到創(chuàng)面愈合或?qū)嶒?yàn)結(jié)束。

1.8 觀察指標(biāo)及檢測(cè)方法

1.8.1 創(chuàng)面愈合率測(cè)定 創(chuàng)傷后第3、7、15、21天，用創(chuàng)面照相結(jié)合透明方格紙描記法測(cè)量創(chuàng)面大小，計(jì)算創(chuàng)面愈合率[5]。創(chuàng)面愈合率=(原創(chuàng)面面積-現(xiàn)創(chuàng)面面積)/原創(chuàng)面面積×100%。

1.8.2 血清CRP和TNF-α檢測(cè) 于治療后2 h、3 d、15 d、21 d晨取大鼠尾靜脈血0.5 mL，分別用ELISA試劑盒檢測(cè)血清CRP和TNF-α值。

1.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠創(chuàng)面愈合率比較

表1示，在觀察終點(diǎn)第21天，治療組與龍珠軟膏組創(chuàng)面愈合率均明顯高于模型組(P<0.05，P<0.01)，其中治療組創(chuàng)面愈合率較龍珠軟膏組更高(P<0.05)。

表1 各組不同時(shí)間點(diǎn)大鼠創(chuàng)面愈合率比較(%)

2.2 各組大鼠血清CRP與TNF-α含量比較

表2、3示，第15天和第21天時(shí)治療組與龍珠軟膏組血清CRP與TNF-α含量均明顯低于模型組(P<0.05，P<0.01)，其中治療組CRP與TNF-α含量較龍珠軟膏組更低(P<0.05)。

表2 各組不同時(shí)間點(diǎn)大鼠血清C-反應(yīng)蛋白(C-reactive protein,CRP)含量

表3 各組不同時(shí)間點(diǎn)大鼠血清腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor，TNF -α)含量比較

3 討論

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為，壓力性損傷發(fā)生的最重要原因?yàn)榫植拷M織長(zhǎng)期受壓引起血液循環(huán)障礙伴神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)功能紊亂。局部組織持續(xù)缺氧缺血最終導(dǎo)致軟組織壞死和皮膚損傷，同時(shí)伴有血清炎癥指標(biāo)升高[6]。在療效方面，損傷部位的創(chuàng)面愈合率是最重要的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，血清CRP與TNF-α則是反映機(jī)體炎癥水平的重要指標(biāo)[4]。本實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示，治療組無論在降低創(chuàng)面愈合率還是在血清炎癥指標(biāo)方面都明顯優(yōu)于龍珠軟膏組，說明芪歸紫草油換藥具有更佳的抗菌消炎、斂瘡生肌作用。該方為經(jīng)驗(yàn)方，方中黃芪為君藥，具有托毒排膿、斂瘡生肌之功效[7]；當(dāng)歸為臣藥，具有補(bǔ)血活血、化瘀止痛之作用；黃芪、當(dāng)歸兩者相伍既能托毒外出又能補(bǔ)氣生血，促進(jìn)新肉生長(zhǎng)；佐使藥為大黃、紫草、珍珠粉，其中大黃對(duì)炎性滲出物引起的腫脹有明顯的抑制作用[8]；紫草應(yīng)用于創(chuàng)面后可明顯抑制毛細(xì)血管通透性，加速上皮修復(fù)進(jìn)程[9]，減少瘢痕組織的形成；珍珠粉解毒生肌，具有疏通微循環(huán)功能[10]；麻油具有極強(qiáng)的親脂性，可使創(chuàng)面內(nèi)的環(huán)境呈油潤(rùn)狀態(tài)，能有效避免干燥損傷的刺激，減輕換藥造成的疼痛；油化后的紫草、大黃等藥物其抗菌、去腐作用加速壞死組織的脫落，控制或減少由創(chuàng)面感染引起敗血癥的機(jī)會(huì)，全方共奏益氣養(yǎng)血、化瘀止痛、斂瘡?fù)卸局π?。此外，用麻油紗布貼敷創(chuàng)面可在創(chuàng)面組織表面結(jié)合成一層保護(hù)屏障，有利于創(chuàng)面上皮細(xì)胞的生長(zhǎng)[11]，具有一舉三得的功效；采用食用白糖作為芪歸紫草油的基質(zhì)，主要是考慮到食用白糖溶化后可在創(chuàng)面形成高滲狀態(tài)，導(dǎo)致炎癥細(xì)胞脫水變性壞死，使創(chuàng)面內(nèi)的pH 值下降形成酸性環(huán)境，促進(jìn)炎癥吸收和創(chuàng)面收斂[12]，協(xié)同芪歸紫草油共同達(dá)到促進(jìn)創(chuàng)面愈合的目的。

總之，實(shí)驗(yàn)證明芪歸紫草油對(duì)大鼠Ⅳ期壓力性損傷具有比龍珠軟膏更強(qiáng)的修復(fù)作用，結(jié)合前期臨床研究結(jié)果，建議將此方法在臨床中推廣應(yīng)用，讓更多的患者受益。