補(bǔ)腎益氣化瘀沖劑對去卵巢骨質(zhì)疏松模型大鼠血管形成的影響及機(jī)制研究

王 君吳濱濱王曉東趙 璇張 鑫王若霖修曉光*

(1.青島市中醫(yī)醫(yī)院(青島市海慈醫(yī)院)血管外科,山東 青島 266033;2.青島市中醫(yī)醫(yī)院(青島市海慈醫(yī)院)關(guān)節(jié)外科,山東青島 266033;3.黃島區(qū)人民醫(yī)院創(chuàng)傷、手足外科,山東 青島 266400;4.黃島區(qū)人民醫(yī)院呼吸內(nèi)科,山東 青島 266400;5.青島頤生鍵中西醫(yī)結(jié)合骨傷醫(yī)院骨科,山東 青島 266100;6.煙臺(tái)大學(xué)藥學(xué)院,山東 煙臺(tái) 264005)

隨著人口老齡化的加劇,中老年群體高發(fā)疾病受到更多關(guān)注,其中骨質(zhì)疏松癥(osteoporosis,OP)中多發(fā)于絕經(jīng)婦女和老年群體,據(jù)流行病學(xué)調(diào)查,我國64.6%老年人患者有骨質(zhì)疏松癥[1]。 骨質(zhì)疏松癥主要表現(xiàn)為以骨密度(bone mineral density,BMD)降低、骨量減少、骨微結(jié)構(gòu)破壞導(dǎo)致骨脆性增加,骨骼質(zhì)量下降,骨折發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)提高的骨代謝性疾病[2]。 女性停經(jīng)后骨密度急速下降,絕經(jīng)后骨質(zhì)丟失情況加劇,絕經(jīng)5 年內(nèi)丟失骨量達(dá)到總骨量的10%,出現(xiàn)絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥(postmenopausal osteoporosis,PMOP)[3]。 PMOP 的致病機(jī)制是研究的熱點(diǎn),主要集中于雌激素的下降和骨-血管的耦聯(lián)[4]。 血管的形成能為骨骼發(fā)育以及再生修復(fù)提供所需營養(yǎng),在減緩骨質(zhì)疏松癥中起到了重要作用[5]。

Toll 樣受體(Toll-like receptor,TLRs)是一類I 型跨膜蛋白,通過特異性識別病原體,參與機(jī)體的非特異性免疫反應(yīng),并進(jìn)行跨膜轉(zhuǎn)運(yùn),產(chǎn)生級聯(lián)信號反應(yīng),活化下游轉(zhuǎn)錄因子,介導(dǎo)免疫應(yīng)答[6]。 核因子κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)是細(xì)胞內(nèi)影響成骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞分化形成的轉(zhuǎn)錄因子,其所在信號通路對成骨細(xì)胞的增殖和分化有重要調(diào)控作用[7]。 TLRs/NF-κB 通路參與調(diào)解機(jī)體的炎癥反應(yīng)和免疫反應(yīng),并通過影響成骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞介導(dǎo)骨質(zhì)疏松癥的發(fā)展。 已有研究發(fā)現(xiàn)補(bǔ)腎類中藥方劑對OP 有較好療效[8]。 本研究利用卵巢去勢大鼠構(gòu)建骨質(zhì)疏松模型,從血管形成的角度看來探究補(bǔ)腎益氣沖劑基于TLRs/NF-κB 通路對骨質(zhì)疏松癥的作用。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

60 只9 周齡SPF 級健康雌性SD 大鼠,購自上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限責(zé)任公司[SYXK(滬)2017-0008],平均體重(220±15)g,飼養(yǎng)于青島漢德森生物科技有限公司[SYXK(魯)2019-0010],飼養(yǎng)室保持良好通風(fēng),溫度(24±2)℃,濕度(50±10)%,12 h明/12 h 暗,標(biāo)準(zhǔn)飼料,自由飲水,飼養(yǎng)1 周以適應(yīng)環(huán)境,第2 周開始進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)已通過本院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理與管理委員會(huì)審批(2019050802),嚴(yán)格按照3R 原則給予人道關(guān)懷。

1.2 主要試劑與儀器

補(bǔ)腎益氣化瘀沖劑制于青島市中醫(yī)醫(yī)院藥劑科(生產(chǎn)批號:201932);阿侖磷酸鈉片購于中國揚(yáng)子江藥業(yè)集團(tuán);Microfil 硅膠灌注顯影劑購于美國Flow Tech 公司;EDTA 脫鈣液購自上海如吉生物科技發(fā)展有限公司;BCA 蛋白定量試劑盒購于上海恒遠(yuǎn)生物公司;兔抗CD31 單克隆抗體、HE 染色試劑盒和DAPI 染色液購自上海碧云天公司;血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和低氧誘導(dǎo)因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)ELISA 檢測試劑盒購于上海晶抗生物工程有限公司。

臺(tái)式低溫高速離心機(jī)(濟(jì)南來寶醫(yī)療器械有限公司);恒冷切片機(jī)(德國徠卡公司);SktScan1176 Micro-CT 掃描儀(德國Bruker 公司);雙能X 線骨密度測試儀(美國GE 公司);光學(xué)顯微鏡(日本奧林巴斯公司);倒置熒光顯微鏡(德國徠卡公司);Western blot 垂直電泳儀(北京六一生物科技有限公司)。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 分組和骨質(zhì)疏松癥模型構(gòu)建

60 只大鼠根據(jù)體重分層隨機(jī)化原則分為4 組:假手術(shù)組、模型組、沖劑組、陽性對照組,每組15 只。大鼠禁食24 h 后,造模大鼠行雙側(cè)卵巢摘除術(shù)。 對所有大鼠進(jìn)行稱重,根據(jù)體重腹腔注射40 mg/kg 的戊巴比妥鈉進(jìn)行麻醉,碘伏消毒后,經(jīng)背部中線縱行1.5 cm 切口,依次分離進(jìn)入腹腔,假手術(shù)組大鼠僅進(jìn)行手術(shù),不切除雙側(cè)卵巢,其余3 組大鼠沿輸卵管,找到桑葚狀卵巢組織,輕提出卵巢并分離周圍脂肪組織,嚴(yán)密結(jié)扎輸卵管,切除雙側(cè)卵巢,逐層縫合,術(shù)后連續(xù)肌肉注射10 萬U 青霉素3 d,預(yù)防感染。

1.3.2 給藥處理

造模2 周后,各組大鼠分別進(jìn)行給藥處理:沖劑組給予5 g/kg 補(bǔ)腎益氣化瘀沖劑灌胃處理;陽性對照組給予0.5 mg/kg 阿侖磷酸鈉片灌胃處理;假手術(shù)組和模型組大鼠給予等量生理鹽水灌胃處理。各組大鼠每天灌胃給藥1 次,連續(xù)給藥12 周。 各組大鼠統(tǒng)一飼養(yǎng)環(huán)境條件,自由飲水和進(jìn)食標(biāo)準(zhǔn)飼料,分籠飼養(yǎng),定期消毒和通風(fēng)。

1.3.3 樣本處理

最后1 次灌胃給藥后禁食24 h,腹腔注射10%戊巴比妥鈉麻醉,每組15 只大鼠中選取10 只處死,打開腹腔,腹腔主動(dòng)脈采血5 mL,轉(zhuǎn)速3000 r/min,離心15 min,取上層血清1.5 mL,-20℃保存?zhèn)溆?。剝離大鼠雙側(cè)股骨并剔除周圍軟組織,0.9% NaCl沖洗1 min,右側(cè)股骨用PBS 浸濕的紗布包裹放入-20℃的冰柜中保存,用于骨密度檢測、Micro-CT 分析、骨組織冷凍切片;左側(cè)股骨用于提取組織蛋白。每組另外5 只大鼠采取麻醉后腹主動(dòng)脈放血法處死[9],用于硅酮橡膠(MicroFil)灌注。

1.3.4 HE 染色觀察

取右側(cè)股骨,放入液氮中速凍10 s,OCT 包埋膠固定,使用冷凍切片機(jī)進(jìn)行切片,取股骨組織冷凍切片,固定,經(jīng)蘇木素-伊紅染色,乙醇脫水,二甲苯透明,干燥,中性樹膠封片,光學(xué)顯微鏡下觀察大鼠股骨組織細(xì)胞形態(tài)并拍攝照片。

1.3.5 骨密度檢測、Micro-CT 和血管灌注成像

取大鼠右側(cè)股骨,在雙能X 線骨密度測試儀行BMD 測量,分辨率設(shè)為1.0 mm×1.0 mm,掃描速度設(shè)為60 mm/s,以股骨頭中心區(qū)域2. 0 mm×1.5 mm為掃描興趣區(qū)域,分析BMD(g/cm2),連續(xù)測量5次,并記錄。

使用Micro-CT 分析四組大鼠遠(yuǎn)端股骨,分辨率為10 μm,管電壓為50 kV,管電流為400 μA,曝光時(shí)間300 ms,360°掃描股骨近端部位,使用Micro View 和Med Project 4.1 軟件對大鼠股骨標(biāo)本進(jìn)行三維重建,并測量骨小梁厚度(trabecular thickness,Tb.Th)和骨小梁間距(trabecular spacing,Tb.Sp),每組圖片3 D 重建條件一致。

每組用于血管灌注的5 只大鼠麻醉后,打開腹腔,在腹主動(dòng)脈近心端結(jié)扎,結(jié)扎線遠(yuǎn)端置入留置針,并連接至生理鹽水瓶中,排出血液,灌10%甲醛溶液,使血管硬化,小鼠雙腿和尾巴出現(xiàn)抖動(dòng)后灌注MicroFil 溶液,大鼠后肢足趾出現(xiàn)黃色造影劑,說明灌注成功,大鼠標(biāo)本在4℃冰箱過夜,次日收集股骨,10%甲醛溶液室溫固定,10% EDTA 脫鈣液進(jìn)行脫鈣5 周,使用Micro-CT 檢測股骨組織微血管形態(tài)。

1.3.6 免疫熒光染色分析

取大鼠右側(cè)股骨冷凍切片,PBS 漂洗,室溫封閉1 h,加入CD31 單抗4℃孵育過夜;加入二抗37℃避光孵育1 h;PBS 漂洗;DAPI 避光復(fù)染5 min;PBS 漂洗,封片后熒光顯微鏡觀察并拍攝照片。

1.3.7 ELISA 檢測血清VEGF 和HIF-1α 濃度

取大鼠血清,按照VEGF、HIF-1α ELISA 試劑盒及BCA 蛋白定量試劑盒說明書進(jìn)行操作。 用酶標(biāo)儀在波長450 nm 處測定吸光度(OD 值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算4 組大鼠血清樣本中VEGF、HIF-1α 的濃度。

1.3.8 Western blot 分析p-p50/p50 和p-p65/p65蛋白的表達(dá)

分別稱取4 組大鼠的左側(cè)股骨組織90 mg,加入液氮研磨成粉狀,加入蛋白裂解液制得組織勻漿液,用TRIzol 法提取組織總蛋白,采用BCA 法對蛋白進(jìn)行定量,上樣進(jìn)行凝膠電泳30 min,轉(zhuǎn)膜,室溫下5% BSA 封閉3 h,加入一抗4℃孵育過夜,洗膜,室溫孵育二抗,顯色成像,用Image-Lab 分析灰度值,GAPDH 作為內(nèi)參對照。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用Graphpad 5.0 軟件分析實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù),定量數(shù)據(jù)用平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(ˉx±s)表示,實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行正態(tài)性和方差性檢驗(yàn),骨密度比較采用重復(fù)測量資料的方差分析,VEGF、HIF-1α 濃度及p50/p-p50、p65/pp65 的表達(dá)采用單因素方差分析進(jìn)行組間比較,兩兩比較采用SNK 法,P＜0.05 表示差異顯著,結(jié)果具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 4 組大鼠骨密度檢測結(jié)果比較

各組大鼠股骨遠(yuǎn)端骨密度檢測結(jié)果比較見圖1,與假手術(shù)組比較,模型組股骨BMD 明顯降低,沖劑組和陽性對照組較模型組股骨BMD 明顯增加,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。 通過模型組BMD 再次說明本次骨質(zhì)疏松大鼠模型制備成功(P＜0.05)。

注:與假手術(shù)組相比,*P＜0.05;與模型組相比,#P＜0.05。

2.2 4 組大鼠股骨組織形態(tài)觀察結(jié)果比較

4 組大鼠股骨組織HE 染色觀察結(jié)果見圖2,假手術(shù)組大鼠股骨有大量新生血管形成,骨小梁排列致密;模型組新生血管少,骨小梁生長稀疏;沖劑組新生血管較模型組多,有部分骨小梁生長,排列有序;陽性對照組新生血管情況與沖劑組相近,骨小梁生長良好。

圖2 4 組大鼠股骨組織HE 染色形態(tài)觀察比較Figure 2 HE staining morphology comparison of femur tissues among four groups rats

2.3 4 組大鼠MicroFil 血管灌注結(jié)果比較

4 組大鼠MicroFil 血管灌注結(jié)果見圖3,與假手術(shù)組比較,模型組血管數(shù)量少,沖劑組和陽性對照組血管數(shù)量明顯比模型組多。

圖3 大鼠股骨的MicroFil 血管造影Figure 3 MicroFil angiography of rat femur

2.4 4 組大鼠Micro-CT 分析結(jié)果比較

Micro-CT 的三維重建圖像和定量分析結(jié)果見圖4,可看出模型組大鼠骨量和骨小梁厚度明顯低于假手術(shù)組,骨小梁間距明顯高于假手術(shù)組;沖劑組和陽性對照組大鼠的股骨骨量及骨小梁厚度與假手術(shù)組相近,較模型組明顯增多,骨小梁間距明顯低于模型組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

注:A:股骨掃描圖像比較;B:Micro-CT 定量分析Tb.Th 比較;C:Micro-CT 定量分析Tb.Sp 比較析。 與假手術(shù)組相比,*P＜0.05;與模型組相比,#P＜0.05。

2.5 4 組大鼠CD31 免疫熒光分析結(jié)果

大鼠股骨組織冷凍切片CD31 的免疫熒光結(jié)果見圖5,與假手術(shù)組比較,模型組CD31 熒光數(shù)目明顯減少,沖劑組和陽性對照組熒光數(shù)目減少,但明顯多于模型組。

圖5 4 組大鼠股骨組織中CD31 和DAPI 的免疫熒光結(jié)果Figure 5 Immunofluorescence results of CD31 and DAPI in the femur tissues among four groups rats

2.6 4 組大鼠血清VEGF 和HIF-1α 含量比較

4 組大鼠血清VEGF 和HIF-1α 濃度比較見圖6,模型組大鼠血清VEGF 與HIF-1α 濃度較假手術(shù)組明顯降低,沖劑組和陽性對照組與假手術(shù)組差異不顯著,較模型組濃度明顯升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

注:與假手術(shù)組相比,*P＜0.05;與模型組相比,#P＜0.05。

2.7 p-p50/p50 和p-p65/p65 蛋白表達(dá)情況比較

與假手術(shù)組比,模型組p-p50/p50 和p-p65/p65蛋白表達(dá)比值上升,沖劑組和陽性對照組蛋白表達(dá)比值上升不明顯;與模型組比,沖劑組和陽性對照組蛋白表達(dá)比值明顯下降表達(dá)水平明顯上升,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05),4 組大鼠股骨組織Western blot 電泳圖和蛋白表達(dá)量比較結(jié)果見圖7。

注:A:四組大鼠p-p50/p50 和p-p65/p65 凝膠電泳圖;B:4 組大鼠p-p50/p50 和p-p65/p65 蛋白表達(dá)水平定量比較。 與假手術(shù)組相比,*P＜0.05;與模型組相比,#P＜0.05。

3 討論

PMOP 發(fā)病率在絕經(jīng)女性中高達(dá)40%,BMD 下降速度為絕經(jīng)前的3 倍,骨折風(fēng)險(xiǎn)隨之增加,嚴(yán)重影響女性身心健康和生活[10]。 OP 是多階段的復(fù)雜氧化應(yīng)激過程,對體內(nèi)細(xì)胞有毒性作用,會(huì)引起內(nèi)皮細(xì)胞受損或者細(xì)胞壞死,OP 的發(fā)生受到多個(gè)因素的影響[11]。 PMOP 的發(fā)生可能與絕經(jīng)女性體內(nèi)雌激素水平顯著下降有關(guān)[12],部分研究者認(rèn)為OP 的發(fā)生與骨組織微血管減少有關(guān)[13],目前關(guān)于骨質(zhì)疏松的發(fā)病機(jī)制并沒有明確的結(jié)論。 機(jī)體內(nèi)骨形成和骨吸收處于一個(gè)動(dòng)態(tài)代謝過程,隨著年齡增長,血管功能受損,成骨所需營養(yǎng)不足,骨形成速度低于骨吸收速度,骨質(zhì)下降,骨量減少,出現(xiàn)骨質(zhì)疏松的癥狀。 研究表明血管數(shù)目的減少加速了骨質(zhì)疏松癥狀的發(fā)生和發(fā)展,促進(jìn)局部血管生長對骨質(zhì)疏松的癥狀有緩解作用[14]。 據(jù)已有實(shí)驗(yàn)研究報(bào)道,去勢小鼠雌激素減少,骨代謝平衡遭到破壞,骨轉(zhuǎn)換率增加,單位體積內(nèi)骨組織量減少,骨質(zhì)疏松小鼠骨組織內(nèi)部血管明顯少于對照組小鼠,再一次驗(yàn)證骨組織血管形成與骨質(zhì)疏松有關(guān)[15]。 PMOP 在中醫(yī)理論里屬于“骨萎”,腎精漸衰,骨髓空虛,遂致骨質(zhì)疏松[16]。 本研究通過切除雙側(cè)卵巢,構(gòu)建骨質(zhì)疏松大鼠模型,通過對4 組大鼠進(jìn)行股骨BMD 測定和骨組織形態(tài)觀察,可以說明卵巢去勢大鼠構(gòu)建OP模型成功,同時(shí)通過補(bǔ)腎化瘀沖劑和阿侖磷酸鈉片治療的大鼠,骨密度增加,骨小梁生長狀況較好,說明補(bǔ)腎化瘀沖劑對骨質(zhì)疏松癥有治療效果。 骨組織HE 染色結(jié)果和Micro-CT 掃描結(jié)果表明沖劑組用藥治療后,OP 大鼠血管形成狀況好轉(zhuǎn),說明補(bǔ)腎益氣化瘀方劑可能對骨質(zhì)疏松群體的血管形成有促進(jìn)作用。

骨組織血管狀態(tài)可以為骨發(fā)育提供氧氣、無機(jī)鹽、激素等生長所需物質(zhì),并運(yùn)送新陳代謝產(chǎn)物,對骨重建起到了重要作用[17]。 CD31 是血小板內(nèi)皮細(xì)胞黏附分子,其抗原廣泛分布于血管內(nèi)皮細(xì)胞、血小板、巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞,主要參與血管形成、白細(xì)胞遷移等生理活動(dòng),可作為評估血管形成的標(biāo)記分子[18]。 王亮等[19]通過對CD31 和EMCN 進(jìn)行免疫熒光染色,對骨標(biāo)本的H 型血管進(jìn)行顯像,來表現(xiàn)OP 小鼠H 型血管的變化。 HIF-1α 是氧依賴性調(diào)節(jié)蛋白,在低氧條件下,能轉(zhuǎn)入核內(nèi),與HIF-1β 作用,激活體內(nèi)的缺氧適應(yīng)性反應(yīng)[20]。 OP 導(dǎo)致血管受損,骨組織微血管減少,骨重建所需營養(yǎng)物質(zhì)運(yùn)送不足,形成骨組織的低氧環(huán)境。 缺氧條件下,骨組織中HIF-1α 能激活VEGF 表達(dá),形成骨組織血管網(wǎng)絡(luò)[21]。 VEGF 是重要的促進(jìn)血管形成的細(xì)胞因子,能增加血管內(nèi)皮細(xì)胞的通透性,并刺激血管內(nèi)皮細(xì)胞的有絲分裂[22]。 一研究通過染料木黃酮干預(yù)治療OP 大鼠,來比較干預(yù)組大鼠和模型組大鼠間VEGF 的表達(dá)差異,結(jié)果表明干預(yù)組大鼠血清和骨組織中VEGF 的表達(dá)均高于模型組,且BMD 值也高于模型組說明VEGF 的表達(dá)有助于OP 發(fā)生后骨重建過程[23]。 本研究對4 組大鼠的股骨組織進(jìn)行CD31 免疫熒光染色和血清中VEGF、HIF-1α 的濃度測定,發(fā)現(xiàn)經(jīng)過藥物治療,CD31 染色情況顯示大鼠骨組織中血管形成情況優(yōu)于未經(jīng)治療的OP 模型組大鼠,并且血清中HIF-1α 和VEGF 的含量較模型組大鼠也有明顯升高,說明補(bǔ)腎化瘀沖劑可能通過調(diào)節(jié)機(jī)體的HIF-1α 和VEGF 的表達(dá)來影響血管形成。

NF-κB 在TLRs 的下游,受到TLRs 的調(diào)控,TLRs/NF-κB 信號通路參與機(jī)體細(xì)胞的增殖和分化及免疫反應(yīng)等生理過程[24]。 楊明鏡等[25]研究表明通過番茄紅素預(yù)處理,細(xì)胞中NF-κB 表達(dá)下調(diào),揭示了番茄紅素對TLRs/NF-κB 信號通路的抑制,可能抑制機(jī)體的氧化應(yīng)激反應(yīng),從而減輕細(xì)胞的缺氧損傷,說明TLRs/NF-κB 信號通路與機(jī)體的氧化應(yīng)激反應(yīng)有關(guān)。 阿侖磷酸鈉通過誘導(dǎo)破骨細(xì)胞凋亡,能抑制骨吸收過程,已廣泛應(yīng)用于OP 的治療中。已有研究報(bào)道,通過對OP 大鼠給予阿侖磷酸鈉灌胃,發(fā)現(xiàn)給藥大鼠BMD 值,血液中鈣、磷、雌激素含量和骨小梁明顯增加,而骨組織中p-p50/p50 和p-p65/p65的表達(dá)顯著降低[26]。 說明阿侖磷酸鈉片可抑制OP 大鼠骨組織中p-p50/p50 和p-p65/p65的表達(dá),從而抑制NF-κB 信號通路,影響破骨細(xì)胞的形成。 研究表明NF-κB 對HIF-1α 的表達(dá)具有調(diào)控作用,但作用機(jī)制較為復(fù)雜,在不同條件下,NFκB 對HIF-1 的表達(dá)具有正向或負(fù)向調(diào)控的作用。缺氧條件下,抑制NF-κB,會(huì)激活HIF-1α 的表達(dá)[27]。 本研究采用阿侖磷酸鈉片灌胃給藥的大鼠作為陽性對照,對4 組大鼠骨組織中p-p50/p50 和p-p65/p65 的表達(dá)水平進(jìn)行分析,發(fā)現(xiàn)沖劑組和陽性對照組大鼠p-p50/p50 和p-p65/p65 的表達(dá)量低于模型組大鼠,說明在治療過程中,沖劑組大鼠骨組織中NF-κB 通路可能受到抑制。 而沖劑組大鼠血清中HIF-1α 和VEGF 的含量高于模型組大鼠,說明抑制NF-κB 通路,可能對HIF-1α 具有正向調(diào)控的作用。 補(bǔ)腎化瘀沖劑影響TLRs/NF-κB 通路,進(jìn)而調(diào)控HIF-1α 和VEGF 表達(dá)的具體機(jī)制仍需進(jìn)一步的分子實(shí)驗(yàn)研究。

綜上所述,補(bǔ)腎益氣化瘀沖劑可能通過調(diào)控TLRs/NF-κB 通路,對卵巢去勢大鼠血管形成起到了促進(jìn)作用,有助于骨質(zhì)疏松癥的緩解。