鈍綴錦蛤（Tapes dorsatus）稚貝的溫度和鹽度耐受性研究

張柯馨，曹楚畑，劉志剛, ，吳加瑩，張元，展建強，陳麟廣

( 1. 廣東海洋大學 水產(chǎn)學院，廣東 湛江 524088；2. 廣東省海產(chǎn)無脊椎動物科技創(chuàng)新中心，廣東 湛江 524088)

1 引言

鈍綴錦蛤（Tapes dorsatus）俗稱沙包螺，屬軟體動物門（Mollusca），瓣鰓綱（Lamellibranchia），簾蛤目（Veneroida），簾蛤科（Veneridae），綴錦蛤?qū)伲═apes），是一種大型經(jīng)濟貝類，主要分布于西南太平洋熱帶、亞熱帶海區(qū)。在我國常見于東海、南海海域以及臺灣島沿岸，其中廣西、廣東和海南沿海地區(qū)擁有一定數(shù)量的鈍綴錦蛤野生群體[1]。鈍綴錦蛤主要于潮間帶中、低潮區(qū)至潮下帶及淺海底質(zhì)表層3～15 cm的沙泥中營埋棲生活[2-5]。其具有生長快、個體大、肉質(zhì)鮮美、適應(yīng)性強等優(yōu)點[3]，經(jīng)濟價值高，養(yǎng)殖前景廣闊。近年來，長期濫捕導致鈍綴錦蛤的自然資源遭受嚴重破壞，因此對鈍綴錦蛤的規(guī)?；B(yǎng)殖迫在眉睫。目前，有關(guān)鈍綴錦蛤的人工育苗技術(shù)已取得了一定的進展，鈍綴錦蛤養(yǎng)殖業(yè)主要集中在北部灣淺海區(qū)，國內(nèi)以底播養(yǎng)殖為主，越南以沉筐養(yǎng)殖為主[5]。

作為近年來新興的海水貝類養(yǎng)殖品種，目前，已有學者在鈍綴錦蛤的形態(tài)[3]、生態(tài)[2,4]、繁育[5]、分子[6-9]、二倍體和三倍體養(yǎng)殖前景[10]等方面開展了研究，而關(guān)于環(huán)境因子如溫度、鹽度對鈍綴錦蛤生存、生長的影響研究卻少見報道。溫度和鹽度是影響貝類存活和生長的重要環(huán)境因子，耐鹽性和最適生長鹽度是選擇雙殼貝生長地點的重要環(huán)境標準。Nell和Paterson[11]通過鈍綴錦蛤幼貝的鹽度實驗得出其不能在鹽度小于20的條件下長期生存，因此只能在河口高鹽度地區(qū)養(yǎng)殖；楊家林等[4]研究了溫度、鹽度對鈍綴錦蛤濾食率與同化率的影響，結(jié)果表明，溫度和鹽度對鈍綴錦蛤的濾食率與同化率均有顯著影響，濾食率隨溫度及鹽度升高呈先上升后下降的趨勢，同化率隨溫度、鹽度的升高而增大；文宇[12]研究了溫度和鹽度對鈍綴錦蛤稚貝成活率和日增長率的影響，但由于其溫度、鹽度設(shè)置范圍較小，且測量指標簡單，所以無法得出精確的溫度、鹽度耐受范圍，還需進行更深入地實驗探究。因此，國內(nèi)外罕見較為詳細深入的關(guān)于鈍綴錦蛤?qū)囟群望}度耐受性的報道。本研究對鈍綴錦蛤溫度、鹽度的耐受性研究將有利于深入的揭示其生態(tài)習性，可為鈍綴錦蛤的生物學研究提供基礎(chǔ)資料。本文以鈍綴錦蛤稚貝為實驗對象，研究室內(nèi)控制條件下溫度和鹽度對其成活和生長的影響，以期為鈍綴錦蛤的人工養(yǎng)殖提供參考。

2 材料與方法

2.1 實驗材料

2021年3月31日從湛江銀浪海洋生物技術(shù)有限公司育苗場隨機采集部分稚貝運回廣東海洋大學貝類遺傳與育種實驗室暫養(yǎng)7 d。暫養(yǎng)期間海水自然溫度為24～27℃，海水鹽度為31～33，pH為8.0～8.2，連續(xù)充氣，每天投喂?jié)饪s湛江等鞭金藻（Isochrysis zhangjiangensis）和角毛藻（Chaetoceros mulleri）混合藻液3次，每天100%換水1次。從暫養(yǎng)稚貝中隨機抽取60個健康、貝殼完整的稚貝，測得稚貝的平均殼長為（4.32±0.50）mm，平均殼高為（3.43±0.34）mm，平均鮮重為（16±3.2）mg。

2.2 實驗方法

2.2.1 溫度實驗

基于預實驗結(jié)果和研究對象對高、低溫敏感性的差異，溫度實驗以2℃為梯度設(shè)置4個低溫組（4～10℃），以1℃為梯度設(shè)置4個高溫組（33～36℃）及1個常溫對照組（26℃）。各溫度組設(shè)3個重復。將暫養(yǎng)7 d的鈍綴錦蛤健康稚貝隨機分組，每組30個，分別放入裝有800 mL常溫常鹽過濾海水的大燒杯（容積1 L）中，將燒杯置于恒溫槽中水浴控溫?？販鼐葹椤?.1℃，每組溫度均經(jīng)過同一只經(jīng)校準的溫度計嚴格校正。各實驗組水溫由暫養(yǎng)期間自然海水溫度（24～27℃）按±1℃/（4 h）的速率調(diào)溫達到各個預設(shè)溫度后開始實驗，以防止溫度劇變對稚貝造成生理傷害。

實驗期間持續(xù)微充氣使水中溶氧（DO）濃度大于5 mg/L，濃縮金藻和角毛藻按體積1∶1混合投喂，保證水中餌料充足且不產(chǎn)生明顯假糞，投餌前餌料須經(jīng)等溫處理。每組每天等溫換水1/2，實驗過程及時揀去死亡稚貝，吸除污物以防止水質(zhì)污染，并做好稚貝死亡時間和數(shù)量記錄，死亡標準為貝殼開口，且經(jīng)反復刺激不能閉殼。實驗在室內(nèi)自然光照下完成，實驗期間自然海水鹽度為32.0～33.0，pH為8.0～8.2。溫度實驗僅統(tǒng)計存活率，實驗共進行16 d。

2.2.2 鹽度實驗

鹽度實驗以2.6為梯度共設(shè)置16個鹽度組（13.0～52.0）和1個對照組（32.6），實驗鹽度范圍依照預實驗結(jié)果和前人相關(guān)研究[12]設(shè)計，各鹽度組設(shè)3次重復。將暫養(yǎng)7 d的鈍綴錦蛤健康稚貝隨機分組，每組30個，分別放入裝有800 mL常溫過濾海水的大燒杯（容積1 L）中進行實驗。鹽度使用光學鹽度計（型號LH-Y100）測定，鹽度計在使用前均經(jīng)過嚴格校正。通過向各實驗組添加海水晶溶液或過濾曝氣淡水，按±2.6/（4 h）的速率調(diào)節(jié)鹽度至預設(shè)鹽度后開始實驗。

實驗期間持續(xù)微充氣，投餌方案同2.2.1節(jié)，投餌前需先消除餌料的鹽度差。每組每天按50%比例換水，實驗期間及時撈出死亡稚貝，并做好稚貝死亡時間和數(shù)量記錄。實驗在室內(nèi)完成，自然光照，通過空調(diào)控溫使水溫保持在25～27℃，pH為8.0～8.2。實驗結(jié)束時測量剩余所有稚貝的殼長、殼高和鮮重，鹽度實驗共進行9 d。

2.3 測定指標與數(shù)據(jù)處理

2.3.1 存活率和增長率

存活率（RS，%）和相對存活率（P，%）計算公式為

式中，RW為鮮重增長率（單位：mg/d）；RL為殼長增長率（單位：mm/d）；RH為殼高增長率（單位：mm/d）；W1（單位：mg）、L1（單位：mm）、H1（單位：mm）分別為實驗結(jié)束時稚貝的鮮重、殼長、殼高；W0（單位：mg）、L0（單位：mm）、H0（單位：mm）分別為實驗開始時稚貝的鮮重、殼長、殼高；t（單位：d）為實驗時間。殼長、殼高的測量使用游標卡尺，鮮重的測量使用電子秤（精確度為0.01 g），測量時用濾紙吸干貝殼表面水分。

2.3.2 半致死溫（鹽）度

根據(jù)實驗結(jié)果，計算鈍綴錦蛤稚貝在48 h、96 h、144 h和192 h時間節(jié)點的半致死溫（鹽）度。半致死溫（鹽）度的界定：考察時間內(nèi)使50%稚貝致死的溫（鹽）度（LT50%（LS50%）），采用兩點法[13]計算，公式為

式中，T1、T2分別為稚貝存活率接近50%時的高低端溫度；S1、S2分別為存活率接近50%的高、低端鹽度；P1、P2為相應(yīng)的相對存活率。

2.3.3 適宜、較適宜及最適宜生存鹽度的界定

適宜生存鹽度：以實驗周期內(nèi)鈍綴錦蛤稚貝仍有50%存活的鹽度作為生存臨界鹽度，高、低兩端生存臨界鹽度之間的鹽度范圍作為該貝類的適宜生存鹽度。臨界鹽度的計算采用兩點法，公式同式（7）。

較適宜生存鹽度：以實驗周期內(nèi)稚貝仍有70%存活的鹽度作為臨界鹽度，將高、低兩端臨界鹽度之間的鹽度范圍作為該貝的較適宜生存范圍，其求法參考適宜生存鹽度。最適生存鹽度：采用Duncan法對各實驗組稚貝的存活率進行多重比較，將沒有顯著性差異（p＞0.05）的最優(yōu)幾個組對應(yīng)的鹽度范圍或與其他組有顯著性差異（p＜0.05）的1個最優(yōu)組的鹽度作為稚貝最適生存鹽度[14]。

2.3.4 適宜、較適宜及最適宜生長鹽度的界定

適宜生長鹽度：以實驗周期內(nèi)不同鹽度組的稚貝鮮重、殼長、殼高的增長率為最優(yōu)組增長率的30%所對應(yīng)的鹽度作為稚貝鮮重、殼長、殼高的臨界增長鹽度[15]，將高、低增長臨界鹽度之間的范圍作為稚貝鮮重、殼長、殼高的適宜生長鹽度范圍。將上述3個指標的適宜生長鹽度范圍的重疊部分作為稚貝的適宜生長鹽度。較適宜生長鹽度：以實驗周期不同鹽度組的稚貝鮮重、殼長、殼高增長率為最優(yōu)組增長率的70%所對應(yīng)的鹽度作為稚貝鮮重、殼長、殼高較適宜增長的臨界鹽度，把高、低較適宜增長臨界鹽度之間的范圍作為鮮重、殼長、殼高的較適宜生長鹽度范圍，將上述3個指標的較適宜生長鹽度范圍的重疊部分作為稚貝的較適宜生長鹽度。最適宜生長鹽度：將鮮重、殼長、殼高增長率沒有顯著性差異（p＞0.05）的最優(yōu)幾個組對應(yīng)的鹽度范圍或是與其他組有顯著性差異（p＜0.05）的1個最優(yōu)組的鹽度作為鮮重、殼長、殼高的最適增長鹽度，將上述3個指標對應(yīng)鹽度的重疊部分作為稚貝的最適生長鹽度[13-15]。

2.3.5 數(shù)據(jù)處理

實驗數(shù)據(jù)采用平均值（M）±標準差（SD）表示。使用SPSS統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行單因素方差分析（ANOVA），采用Duncan法多重比較來檢驗處理間的差異顯著性。

3 結(jié)果與分析

3.1 鈍綴錦蛤稚貝對溫度的耐受性

不同溫度下鈍綴錦蛤稚貝的相對存活率見圖1a。溫度為4℃時，稚貝在1 d內(nèi)全部死亡；溫度為6℃和8℃時，稚貝在第2天開始出現(xiàn)死亡；溫度為10℃時，稚貝在第7天開始出現(xiàn)明顯死亡，6℃、8℃和10℃稚貝全部死亡耗時分別為5 d、6 d和14 d。由圖1b可見，溫度為33℃時，稚貝在第5天開始出現(xiàn)明顯死亡，第15天開始不再出現(xiàn)死亡，保持存活率為16.67%。溫度為34℃時稚貝在第3天開始出現(xiàn)死亡，第13天全部死亡。溫度為35℃時，稚貝在第4天死亡過半，第7天全部死亡。溫度為36℃時，稚貝在2 d內(nèi)全部死亡。通過Duncan法多重比較發(fā)現(xiàn)各個溫度的稚貝存活率均有顯著差異（p＜0.05）。

圖1 高、低端溫度下鈍綴錦蛤稚貝相對存活率隨時間的變化Fig. 1 Relative survival rate changed with time at high temperature zone and low temperature zone for Tapes dorsatus juveniles

3.2 鈍綴錦蛤稚貝的半致死溫度

稚貝在不同溫度48 h、96 h、144 h和192 h下的相對存活率見表1。方差分析顯示，溫度對稚貝的存活影響極顯著（p＜0.01）。根據(jù)表1，以48 h、96 h、144 h和192 h作為考察時間，采用兩點法，求得48 h稚貝的半致死低、高溫分別為（5.02±0.04）℃和（35.44±0.02）℃；96 h稚貝的半致死低、高溫分別為（7.68±0.45）℃和（34.74±0.11）℃；144 h稚貝的半致死低、高溫分別為（9.01±0.02）℃和（34.43±0.06）℃；192 h稚貝的半致死低、高溫分別為（9.20±0.15）℃和（34.25±0.09）℃。

表1 鈍綴錦蛤稚貝在不同溫度48 h、96 h、144 h和192 h下的相對存活率Table 1 Relative survival rate of Tapes dorsatus juveniles at different temperatures for 48 h, 96 h, 144 h and 192 h

3.3 鈍綴錦蛤稚貝的半致死鹽度

稚貝在不同鹽度48 h、96 h、144 h和192 h下的相對存活率見表2。方差分析顯示在48 h、96 h、144 h和192 h時間節(jié)點，不同鹽度對鈍綴錦蛤稚貝的存活產(chǎn)生了顯著影響（p＜0.05）。根據(jù)兩點法計算，48 h時鈍綴錦蛤稚貝的半致死低鹽為（14.46±0.20），半致死高鹽大于52.0；96 h時稚貝的半致死低鹽為（16.02±0.32），半致死高鹽為（51.79±0.98）；144 h時稚貝的半致死低鹽為（16.76±0.08），半致死高鹽為（50.58±1.56）；192 h時稚貝的半致死低鹽為（16.91±0.07），半致死高鹽為（48.88±1.20）。

表2 鈍綴錦蛤稚貝在不同鹽度48 h、96 h、144 h和192 h下的相對存活率Table 2 Relative survival rate of juveniles Tapes dorsatus at different salinities for 48 h, 96 h, 144 h and 192 h

3.4 鈍綴錦蛤稚貝的適宜、較適宜和最適宜生存鹽度

實驗周期結(jié)束時不同鹽度下稚貝的存活率見圖2。根據(jù)適宜生存鹽度和較適宜生存鹽度的界定，通過二點法可知鈍綴錦蛤稚貝生存的適宜鹽度為16.91～48.2，較適鹽度為17.41～45.75。鹽度在18.20～41.60范圍內(nèi)的各鹽度組存活率均在90.00%及以上，Duncan法多重比較發(fā)現(xiàn)，鹽度在18.20～41.60范圍的各鹽度組的存活率差異不顯著（p＞0.05），但與13.0、15.6鹽度組以及44.2～52.0各鹽度組相比差異顯著（p＜0.05）。根據(jù)最適生存鹽度的界定，可知鹽度18.20～41.60是鈍綴錦蛤稚貝的鹽度最適生存鹽度范圍。

圖2 不同鹽度下鈍綴錦蛤稚貝的存活率Fig. 2 Survival rate of Tapes dorsatus juveniles at different salinities

3.5 鈍綴錦蛤稚貝的適宜、較適宜和最適宜生長鹽度

由圖3、圖4可見，當鹽度為33.80時，稚貝的鮮重、殼長、殼高日增長率均達到最大值，分別為1.055 mg/d、0.094 mm/d和0.081 mm/d。根據(jù)稚貝生長的適宜、較適宜和最適宜鹽度的界定，求得鮮重增長的適宜鹽度為21.31～48.86，較適宜鹽度為27.99～37.77，最適鹽度為33.80；殼長增長的適宜鹽度為23.58～46.24，較適宜鹽度28.57～38.13，最適宜鹽度為33.80～36.40；殼高增長的適宜鹽度為23.41～45.15，較適宜鹽度為29.40～38.00，最適宜鹽度為33.80～36.40。綜合上述指標可知，鈍綴錦蛤稚貝生長的適宜鹽度為23.58～45.15，較適宜鹽度為29.40～37.77，最適宜鹽度為33.80。

圖3 鈍綴錦蛤稚貝隨鹽度變化的鮮重日增長率Fig. 3 Daily growth rate changed with salinity for fresh weight of Tapes dorsatus juveniles

圖4 鈍綴錦蛤稚貝隨鹽度變化的殼長、殼高日增長率Fig. 4 Daily growth rate changed with salinity for shell legnth and shell height of Tapes dorsatus juveniles

4 討論

溫度和鹽度是海水貝類養(yǎng)殖中的重要環(huán)境因素[13-15]，對貝類生長的影響非常明顯[16-18]，貝類往往隨著外界環(huán)境變化做出生理補償性反應(yīng)，生長、濾食率與溫度、鹽度呈明顯相關(guān)性[19-21]。當溫度或鹽度中的其中一個因素控制在合適范圍，通過單因子實驗能反映出另一因素對貝類的影響[22-23]。貝類對溫度、鹽度的耐受性與種類的遺傳性、生理狀態(tài)有關(guān)，與個體大小關(guān)系不明顯[24]。

本研究結(jié)果表明，在實驗過程中，稚貝雖然在溫度低于10℃時或溫度高于33℃時能短暫存活，但最終全部死亡。推測其主要原因可能與其他貝類相似，溫度在很大程度上控制著貝類的代謝過程[25]，如過濾、清除和攝食率等，受低溫脅迫稚貝的鰓絲纖毛擺動頻率和強度下降，最終因攝食能力不足，營養(yǎng)不能滿足自身生理需求而死亡[25-28]；而高溫脅迫下，稚貝體內(nèi)的淀粉酶失去活性，稚貝食欲下降，消化功能逐漸衰退[29]。此外，在高溫刺激下，稚貝體內(nèi)會產(chǎn)生劇烈的氧化應(yīng)激反應(yīng)，產(chǎn)生大量活性氧自由基，損傷貝類機體細胞，造成稚貝抗病能力下降[30-32]，增加了稚貝死亡的可能性。實驗結(jié)束時，高溫組稚貝的相對存活率高于低溫組，且192 h時的半致死高、低溫分別為（34.25±0.09）℃和（9.20±0.15）℃，說明該貝類對高溫的耐受性較強，與硬殼蛤（Mercenaria mercenaria）[33]、皺肋文蛤（Meretrix lyrata）[24]等耐高溫種類相似，適合在南方溫度較高的海域養(yǎng)殖。本實驗結(jié)果顯示，鈍綴錦蛤稚貝對10℃低溫仍具有較高耐受力，8 d存活率仍達到84.37%。文宇[12]的研究表明，殼長為（5.24±0.12）mm的鈍綴錦蛤稚貝在12℃低溫下生長30 d的存活率為53.3%，兩者有一定的相似性；本實驗鈍綴錦蛤稚貝對34℃以上高溫的耐受情況與文宇[12]報道的結(jié)果基本一致。

實驗結(jié)果顯示，鈍綴錦蛤稚貝生存的適宜鹽度和較適宜鹽度分別為16.91～48.2和17.41～45.75，表明該貝類屬于廣鹽性種類。鈍綴錦蛤稚貝的最適生存鹽度為18.20～41.60，與硬殼蛤[33]的適宜鹽度18～42基本一致，比皺肋文蛤[24]（11～31）、織錦巴非蛤（Paphia textzle）[34]（26.0～27.3）、毛蚶（Scapharca subcrenata）[35]（23～33）最適生存鹽度范圍更為寬廣，有利于大規(guī)模推廣養(yǎng)殖。在18.2～26.0低鹽端和39.0～44.2高鹽端鈍綴錦蛤稚貝雖可保持90%以上存活，但其殼長、殼高和鮮重的生長明顯受到抑制，這可能與鹽度過高或過低會降低無脊椎動物的攝食率和同化率有關(guān)[36]。本研究證實鈍綴錦蛤稚貝對鹽度具有一定的耐受性，實驗結(jié)束時低鹽端的13.0、15.6鹽度組幾乎全部死亡，高鹽端鹽度組還保持一定比例的存活，表明該貝類對高鹽耐受性要強于對低鹽的耐受性，同黃洋等[2]、文宇[12]的研究相一致。當?shù)望}端鹽度從18.2下降至15.6，隨著時間的推移，鈍綴錦蛤稚貝的存活率發(fā)生斷崖式下降，而高鹽端各組的存活率則是逐漸下降，表明該貝類對低鹽的敏感度高于對高鹽的敏感度。鈍綴錦蛤稚貝最適生存鹽度為18.20～41.60，但生長的較適鹽度為29.40～37.77，最適鹽度為33.80，說明生長的最適鹽度偏狹窄，與生存鹽度相比偏高鹽端，其最適鹽度與外海海水基本相同，更適合外海養(yǎng)殖。

本實驗以殼長3～5 mm的鈍綴錦蛤稚貝作為研究材料，采用單因素研究設(shè)計，分別探究了鈍綴錦蛤稚貝對溫度和鹽度的耐受性，得出了其存活的最大溫度和鹽度范圍。參照前人的標椎和本實驗的特點界定了鈍綴錦蛤稚貝的適宜、較適宜、最適宜生存和生長鹽度范圍。實驗結(jié)果表明，鈍綴錦蛤稚貝對高溫的耐受性較強，適合在南方溫度較高的海域養(yǎng)殖。根據(jù)適宜生存鹽度范圍得出該貝屬于廣鹽性種類，適宜生存鹽度范圍較廣。但由于其最適生長鹽度與外海海水基本相同，所以更適合外海養(yǎng)殖。本研究深入揭示了鈍綴錦蛤稚貝的生態(tài)習性，豐富了鈍綴錦蛤生物學研究的基礎(chǔ)資料?？蔀殁g綴錦蛤中間培育的養(yǎng)殖地選擇提供參考，對于進一步優(yōu)化鈍綴錦蛤稚貝的養(yǎng)殖條件具有一定意義。