外周血T淋巴細胞亞群變化對乳腺癌新輔助化療療效的預(yù)測價值

劉剛，薛孝斌，任冬莉

西安市長安區(qū)醫(yī)院腫瘤科1、普通外科2、麻醉科3，陜西 西安 710100

乳腺癌是世界上女性常發(fā)癌癥之一，其發(fā)病率和病死率都較高，尤其在40～50 歲女性患者中占多數(shù)。全球中每年約140 萬人被確診為乳腺癌，其中50 萬人會死于乳腺癌[1-2]。有數(shù)據(jù)顯示，大約有20%的患者在首次就診時就已被確診為局部晚期乳腺癌[3]，故此類患者只能先通過新輔助化療控制腫瘤，然后再進行保乳根除手術(shù)。但是，由于局部晚期乳腺癌的體積較大，需要隨時根據(jù)患者情況調(diào)整治療方案，故若能早期并及時地評估新輔助化療對乳腺癌患者的療效，這對患者后續(xù)治療和預(yù)后有至關(guān)重要的意義[4-5]。T淋巴細胞亞群在機體抗腫瘤的免疫監(jiān)視功能中發(fā)揮重要作用，相關(guān)研究報道T 淋巴細胞亞群與腫瘤患者的年齡、腫瘤分期等病理學(xué)資料有一定的關(guān)系，以及治療前后T淋巴細胞亞群也會有一定的變化[6-7]。目前，對于外周血T淋巴細胞亞群和乳腺癌新輔助化療療效之間關(guān)系的研究還尚少。因此，本研究通過檢測乳腺癌患者外周血的不同T 淋巴細胞亞群水平，旨在探究外周血T淋巴細胞亞群變化與乳腺癌新輔助化療療效的關(guān)系，同時分析外周血T 淋巴細胞亞群對新輔助化療療效的預(yù)測價值，現(xiàn)報道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料 前瞻性選取2018 年1 月至2019年1月在西安市長安區(qū)醫(yī)院進行新輔助化療治療且符合以下納入和排除標準85 例乳腺癌患者為研究對象。納入標準：(1)經(jīng)空芯針穿刺活檢確診為乳腺癌；(2)年齡≥18 歲；(3)均為單側(cè)、單發(fā)性腫瘤；(4)病理分型為Luminal-A 陽性、Luminal-B 型、HER2-陽性型、TNBC 型等；(5)無化療禁忌者；(6)女性患者。排除標準：(1)妊娠期或哺乳期；(2)有嚴重的肺部感染或全身感染者；(3)入院前進行包塊切除活檢；(4)對化療藥物過敏者。85例患者年齡34～73歲，平均(51.26±8.14)歲；TNM 分期Ⅱ期46 例，Ⅲ期39 例；右側(cè)40 例，左側(cè)45 例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者36 例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者49 例；Luminal-A 陽性31 例，Luminal-B 型29 例，HER2-陽性型19 例，TNBC 型6 例。另選同期在我院體檢的健康人群44 例作為對照組，年齡30～72 歲，平均(52.22±8.62)歲。兩組受檢者的年齡比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，具有可比性。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準，所有患者知情并經(jīng)本人和家屬簽署知情同意書。

1.2 治療方法 觀察組患者均接受新輔助化療。在使用多西他賽1 d前口服地塞米松片(廣東華南藥業(yè)集團有限公司，批準文號：國藥準字H44024469)16 mg/d，連續(xù)服用3 d；靜脈推入10 mg 地塞米松磷酸注射液(浙江泰康藥業(yè)集團有限公司，批準文號：國藥準字H33021922)；肌肉注射25 mg 的鹽酸異丙嗪注射液(天津金耀藥業(yè)有限公司，批準文號：國藥準字H12020969)，防止過敏。HER2-陽性型患者化療方案：靜脈滴注表柔比星(輝瑞制藥(無錫)有限公司，批準文號：國藥準字H20000496)80 mg/m2，d1；靜脈滴注氟尿嘧啶(精華制藥集團南通有限公司，批準文號：國藥準字H32025153)500 mg/m2，d1；靜脈滴注環(huán)磷酰胺(江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司，批準文號：國藥準字H32020857)600 mg/m2，d1。其他病理分型患者按以下化療方案進行。靜脈滴注多西他賽(江蘇奧賽康藥業(yè)有限公司，批準文號：國藥準字H20080444)75 mg/m2，d1；靜脈滴注表柔比星75 mg/m2，d2；靜脈滴注環(huán)磷酰胺500 mg/m2，d2。一個周期21 d，治療兩個周期評估一次臨床療效，療效好或有效的則繼續(xù)進行化療，若出現(xiàn)無效或是腫瘤進展則需更換化療方案或直接進行手術(shù)。新輔助化療共進行6 個周期，化療完成后三周進行乳腺癌改良根除術(shù)。

1.3 觀察指標與檢測方法

1.3.1 T淋巴細胞 治療前及治療后抽取患者外周血5 mL，同時抽取對照組受檢者外周血5 mL，所有樣本均在當天檢測完成。首先用微量移液槍將混合均勻的抗凝血加入樣管底部，要避免沾到樣管壁上，然后加入20 μL 的單克隆抗體，低速震蕩3 s 混勻，室溫避光標記30 min；加入2 mL 的裂解液，低溫震蕩搖勻，室溫避光靜置10～12 min，溶血時間也避免過長，以免破壞白細胞，靜置后離心，吸去上清液，加入2 mL的磷酸鹽緩沖液(PBS)低溫震蕩混勻，重復(fù)上述洗滌和離心過程2～3次，加入1%多聚甲醛固定，搖勻，避光保持于2℃～8℃環(huán)境下待測。采用流式細胞儀檢測CD3+、CD4+、CD8+T淋巴細胞水平，并計算CD4+/CD8+比值。CD3+正常范圍：50%～84%；CD4+正常范圍：27%～51%；CD8+正常范圍：15%～44%；CD4+/CD8+比值正常范圍：0.71～2.87。

1.3.2 臨床療效 采用RECIST 標準[8]評估乳腺癌患者新輔助化療后的療效，以超聲或核磁共振等影像學(xué)手段為指導(dǎo)，測量實體腫瘤最大徑線。完全緩解(complete remission，CR)：所有目標病灶消失；部分緩解(partial remission，PR)：基線病灶長徑總和縮小≥30%；疾病進展(progressive disease，PD)：基線病灶長徑總和增加≥20%或出現(xiàn)新病灶；疾病穩(wěn)定(stable disease，SD)：基線病灶長徑總和縮小但未達到PR，或增加未達到PD。疾病控制率(disease control rate，DCR)(%)=(CR+PR+SD)/總例數(shù)×100%。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS22.0 統(tǒng)計學(xué)軟件進行數(shù)據(jù)分析。計量資料符合正態(tài)分布，以均數(shù)±標準差(±s)表示，兩組組間比較采用獨立樣本t檢驗，組內(nèi)比較采用配對樣本t 檢驗，多組間比較采用單因素方差分析；根據(jù)CD3+、CD4+、CD4+/CD8+比值變化情況采用MedCalc軟件繪制受試者特征操作曲線(receiver operator characteristic，ROC)，計算曲線下面積(area under curve，AUC)。均以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 化療前觀察組和對照組受檢者的T 淋巴細胞亞群變化比較 化療前觀察組患者的CD3+、CD4+、CD4+/CD8+比值明顯低于對照組，CD8+明顯高于對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，見表1。

表1 化療前觀察組和對照組T淋巴細胞亞群變化比較(±s)

表1 化療前觀察組和對照組T淋巴細胞亞群變化比較(±s)

組別觀察組對照組t值P值例數(shù)8544 CD3+(%)62.68±5.0668.72±5.186.3760.001 CD4+(%)28.55±4.3936.66±4.629.7710.001 CD8+(%)32.77±4.3226.76±4.727.2570.001 CD4+/CD8+0.87±0.281.37±0.339.0380.001

2.2 外周血T 淋巴細胞亞群與乳腺癌臨床病理特征的關(guān)系 不同年齡、部位、病理分型的乳腺癌患者的免疫功能比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)；TNM分期Ⅱ期患者CD4+T淋巴細胞和CD4+/CD8+比值明顯高于Ⅲ期患者，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者CD4+T淋巴細胞和CD4+/CD8+比值明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，見表2。

表2 外周血T淋巴細胞亞群與乳腺癌臨床病理特征的關(guān)系(±s)

表2 外周血T淋巴細胞亞群與乳腺癌臨床病理特征的關(guān)系(±s)

項目年齡(歲)＜50≥50 t值P值TNM分期ⅡⅢt值P值部位右側(cè)左側(cè)t值P值淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有無t值P值病理分型Luminal-A Luminal-B型HER2-陽性TNBC型F值P值例數(shù)33524639404536493129196 CD3+(%)62.36±5.2862.88±5.510.4310.66861.85±5.7363.65±6.071.4040.16462.53±6.1162.81±5.760.2170.82862.88±5.5662.53±5.410.2910.77262.79±5.6762.84±5.3562.15±5.1663.03±5.490.0810.970 CD4+(%)28.23±4.6528.75±4.490.5130.60929.87±4.8326.99±4.262.8900.00528.13±4.7528.92±4.960.7480.45730.23±4.7027.31±4.422.9300.00427.52±4.9328.47±4.1730.13±4.5729.26±5.021.3130.276 CD8+(%)31.72±4.8033.43±5.021.5560.12332.25±4.1533.37±4.271.2230.22532.67±4.3632.85±4.250.1930.84831.86±4.8233.43±5.131.4300.15733.13±4.9333.00±5.1432.47±5.3030.75±4.830.4100.746 CD4+/CD8+0.89±0.290.86±0.320.4370.6640.93±0.290.81±0.252.0240.0460.86±0.260.88±0.280.3400.7350.95±0.300.82±0.272.0920.0400.83±0.270.76±0.250.93±0.300.95±0.311.8530.144

2.3 乳腺癌患者新輔助化療前后的T 淋巴細胞亞群變化比較 乳腺癌患者化療后的CD3+、CD4+、CD4+/CD8+比值明顯高于治療前，CD8+明顯低于治療前，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，見表3。

表3 乳腺癌患者新輔助化療前后的T淋巴細胞亞群變化比較(±s)

表3 乳腺癌患者新輔助化療前后的T淋巴細胞亞群變化比較(±s)

時間化療前化療后t值P值CD3+(%)62.68±5.0666.54±5.506.7400.001 CD4+(%)28.55±4.3932.30±4.617.6830.001 CD8+(%)32.77±4.3228.74±4.058.8780.001 CD4+/CD8+0.87±0.281.15±0.318.7510.001

2.4 不同治療效果乳腺癌患者的T 淋巴細胞亞群變化比較 新輔助化療后，DC共57例(DC組)，其中CR 0例，PR 20例，SD 37例。PD 28例(PD組)。DC組患者的CD3+、CD4+、CD4+/CD8+比值明顯高于PD 組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，而CD8+略低于PD組患者，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，見表4。

表4 不同治療效果乳腺癌患者的T淋巴細胞亞群變化比較(±s)

表4 不同治療效果乳腺癌患者的T淋巴細胞亞群變化比較(±s)

組別DC組PD組t值P值例數(shù)5728 CD3+(%)67.23±4.4965.15±4.162.0550.043 CD4+(%)34.42±4.2627.97±4.106.6410.001 CD4+/CD8+1.23±0.290.99±0.223.8630.001 CD8+(%)28.72±4.1528.78±3.970.0640.950

2.5 T 淋巴細胞亞群對乳腺癌患者新輔助化療療效的預(yù)測價值 ROC曲線分析結(jié)果顯示，CD4+的預(yù)測價值最高，然后依次是CD4+/CD8+、CD3+、CD8+，見表5和圖1。

圖1 T淋巴細胞亞群對乳腺癌患者新輔助化療療效預(yù)測價值的ROC曲線分析

表5 T淋巴細胞亞群對乳腺癌患者新輔助化療療效的預(yù)測價值

3 討論

乳腺癌是危害女性健康的惡性腫瘤之一，發(fā)病率居所有女性癌癥中第一位[9]。早期乳腺癌通過根除術(shù)就可控制其臨床癥狀，而對于局部晚期乳腺癌患者來說，術(shù)前還需要進行化療，這樣不僅能夠控制原發(fā)病灶，還能抑制微小轉(zhuǎn)移灶的生長[10]。新輔助化療的療效對評估藥物敏感性、制定后續(xù)手術(shù)計劃及預(yù)后有非常重要的影響。隨著腫瘤免疫學(xué)相關(guān)研究的逐漸深入，越來越多的研究已經(jīng)證實機體的免疫功能在多種腫瘤的發(fā)展過程占據(jù)重要地位，尤其是T淋巴細胞，當T 淋巴細胞亞群水平失衡時，往往預(yù)示著患者的免疫系統(tǒng)處于紊亂狀態(tài)[11-12]。這主要是因為淋巴細胞會參與機體的細胞免疫和體液免疫。在免疫應(yīng)答中發(fā)揮重要作用，可抑制腫瘤細胞的增殖和轉(zhuǎn)移，因而較低水平的淋巴細胞會嚴重影響患者的免疫應(yīng)答，從而促進腫瘤發(fā)展[13]。在正常情況下，T 淋巴細胞各亞群的數(shù)量和比例均在一定范圍內(nèi)，CD3+、CD4+、CD8+是調(diào)控和輔助其它淋巴細胞發(fā)揮功能的淋巴細胞[14]。CD3+T 淋巴細胞是機體總T淋巴細胞水平，CD3+的下降表示機體免疫功能降低，水平越低，免疫功能越差；CD4+T 淋巴細胞水平的降低表示機體淋巴因子的減少，CD8+T 淋巴細胞水平的降低表示細胞免疫受到抑制[15-16]；此外，在正常生理狀態(tài)下，CD4+/CD8+比值是處于動態(tài)平衡中，其水平的下降表示機體T 淋巴細胞均處于失衡狀態(tài)[17-18]。因此，本研究旨在探究外周血T淋巴細胞水平與乳腺癌新輔助化療療效的關(guān)系，從而為乳腺癌患者的治療提供一定的參考。

本研究結(jié)果顯示，化療前觀察組患者的CD3+、CD4+、CD4+/CD8+比值均明顯低于對照組，CD8+明顯高于對照組，提示乳腺癌患者的免疫功能比健康人群低，此研究結(jié)果與劉超等[19]研究結(jié)果一致。此外，本研究根據(jù)年齡、TNM分期、部位、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移分析了外周血T淋巴細胞的表達水平，結(jié)果顯示：不同年齡、部位、病理分型的乳腺癌患者的免疫功能無明顯差異，TNM分期Ⅱ期患者CD4+T淋巴細胞和CD4+/CD8+比值明顯高于Ⅲ期患者，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者CD4+T淋巴細胞和CD4+/CD8+比值明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者，提示疾病的進展和有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移會對免疫功能有一定的影響，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移結(jié)果與曾繁余等[20]研究結(jié)果一致，TNM 分期結(jié)果與嚴明基等[21]研究結(jié)果一致。乳腺癌患者化療后的CD3+、CD4+、CD4+/CD8+比值均明顯高于治療前，CD8+明顯低于治療前，提示當腫瘤得到較好的控制時，會使免疫功能恢復(fù)至相對正常的水平。本研究還顯示，DCR患者CD3+、CD4+、CD4+/CD8+比值均明顯高于PD患者，提示患者化療的效果越佳，免疫功能越好，這可能是由于化療效果佳的患者其機體腫瘤的增殖、進展、轉(zhuǎn)移受到了抑制。鑒于以上研究，本研究進一步分析了CD3+、CD4+、CD4+/CD8+比值對乳腺癌新輔助化療療效的預(yù)測價值，ROC曲線顯示，CD4+的預(yù)測價值最高，然后依次是CD4+/CD8+、CD3+、CD8+。

綜上所述，在癌細胞的影響下，乳腺癌患者的免疫功能處于抑制狀態(tài)，這與TNM 分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有一定的關(guān)系。患者在進行新輔助化療后，細胞免疫功能有明顯改善，尤其是化療療效好的患者，其免疫功能改善效果更顯著，這為臨床上乳腺癌患者進行合理治療提供了理論依據(jù)，避免因盲目用藥而導(dǎo)致錯失治療時機；此外，CD4+和CD4+/CD8+比值在評估新輔助化療療效方面具有較高的價值。本研究的局限在于樣本量較少，因此為得到確切結(jié)論，仍需要開展大樣本量、多中心研究以進一步驗證。