大黃和肉桂乙醇提取液對(duì)人參病原菌抑菌活性研究

徐鴻雁，衛(wèi)佳麗，王洪偉，劉麗娟*

（1.通化市園藝研究所，通化 134001；通化師范學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院，通化 134002）

人參栽培生產(chǎn)中，頻發(fā)多種病害，常使用化學(xué)農(nóng)藥用于防治，可能導(dǎo)致農(nóng)藥在藥材和土壤中殘留。生物源農(nóng)藥可降低或避免化學(xué)農(nóng)藥帶來(lái)的“農(nóng)藥公害”。中藥材大黃[1]具多類藥效活性成分，以蒽醌類、二蒽酮類、鞣質(zhì)類和多糖研究最多[2]，有瀉熱通腸、涼血解毒、利濕退黃等功效[3]。肉桂樹(shù)皮入藥，肉桂的嫩枝(桂枝)、幼嫩果實(shí)(桂丁)、葉亦供藥用[4]，含揮發(fā)類成分有很好的抑菌作用，也廣泛用于飲料、食品的增香、醫(yī)藥配方、調(diào)和香精[5-7]。本實(shí)驗(yàn)則以大黃和肉桂為材料探究其粗提物對(duì)人參枯萎病、人參立枯病和人參根腐病的病原菌抑菌效果比較，為人參病害生物防治提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料及材料處理

人參枯萎病、人參立枯病和人參根腐病的病原菌源自吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)，接于PDA平板培養(yǎng)基，于28℃恒溫培養(yǎng)7天進(jìn)行活化，備用。

藥材大黃、肉桂均購(gòu)于藥店，75℃烘干后粉碎，選用95%、80%、60%的乙醇分別對(duì)大黃、肉桂粉末浸提48h，2000r/min離心10min取上清液，減壓回收乙醇，濃縮液揮干乙醇以水定容至5mL，使藥液濃度為1g/mL。以60%乙醇浸提大黃的，80%乙醇浸提肉桂的藥液抑菌效果最佳，用做本實(shí)驗(yàn)使用藥劑。

1.2 方法

PDA培養(yǎng)基滅菌后冷卻至50℃左右，加入大黃、肉桂的提取藥劑，制成質(zhì)量濃度為50、25、12.5、6.25μg/mL的帶藥培養(yǎng)基。在無(wú)菌條件下將活化的菌種接種于該培養(yǎng)基上，37℃培養(yǎng)5~7d，每個(gè)處理3次重復(fù)，無(wú)添加藥劑為對(duì)照。

1.3 菌落直徑的測(cè)量與計(jì)算

用十字交叉法測(cè)量菌落直徑，取3次測(cè)量數(shù)據(jù)平均值。

菌落直徑（mm）=測(cè)量菌落直徑平均值-5.0

抑菌率（%）=（對(duì)照組菌落直徑-菌落直徑）/對(duì)照組菌落直徑×100

2 結(jié)果與分析

2.1 肉桂的80%乙醇浸提物對(duì)人參病原菌的抑制效果

圖1 肉桂提取劑對(duì)人參病原菌抑制效果

從表1可知，肉桂提取劑對(duì)人參立枯病的抑制效果最好，濃度大于12.5μg/mL時(shí)抑制率均達(dá)100%（效果見(jiàn)圖1，B-2、B-3、B-4），濃度為6.25μg/mL時(shí)，也高達(dá)86.11%（效果見(jiàn)圖1，B-1）。肉桂醇提液濃度為50μg/mL（效果見(jiàn)圖1，A-4）時(shí)對(duì)枯萎病的抑制率達(dá)到100%，當(dāng)濃度12.5μg/mL時(shí)，抑菌率略高50%（效果見(jiàn)圖1，B-2）。50μg/mL肉桂乙醇提液對(duì)根腐病抑制率為80%（效果見(jiàn)圖1，C-4），低于其他2種病原菌，所有處理抑菌率均大于60%，相同濃度時(shí)強(qiáng)于對(duì)枯萎病的抑菌效果。

表1 肉桂乙醇提取液對(duì)人參病原菌抑菌率（抑菌率：%）

綜上，肉桂對(duì)立枯病抑制效果最好，可選用12.5μg/mL藥劑濃度抑制立枯病，對(duì)枯萎病菌的抑制選用50μg/mL的藥劑濃度,藥劑濃度12.5~50μg/mL之間（效果見(jiàn)圖1，C-1~C-3）對(duì)根腐病抑制效果相信仿，差別不明顯。

2.2 大黃對(duì)人參病原菌的抑制效果

根據(jù)表2可知大黃醇提液在濃度為50μg/mL時(shí)，對(duì)立枯病的抑制率為100%(效果見(jiàn)圖2，D-4)，25μg/mL時(shí)抑制率高達(dá)95%(效果見(jiàn)圖2，D-3)，12.5μg/mL時(shí)抑制率為87.77%，可見(jiàn)大黃醇提液對(duì)立枯病的抑制效果好。對(duì)枯萎病和根腐病的抑制效果相仿，藥劑濃度為50μg/mL時(shí)對(duì)枯萎病(效果見(jiàn)圖2，C-1)和根腐病的抑制率均達(dá)到80%(效果見(jiàn)圖2，E-1)。

圖2 大黃的提取劑對(duì)人參病原菌抑制效果

表2 大黃乙醇提取液對(duì)人參病原菌抑菌率（抑菌率：%）

綜上，可選用大黃對(duì)人參立枯病進(jìn)行防治，選用60%乙醇溶液作為提取溶劑，藥劑濃度選用50μg/mL，對(duì)抑制枯萎病和根腐病的抑菌濃度也選用50μg/mL。

3 小結(jié)與討論

3.1 大黃和肉桂的提取

選用大黃和肉桂進(jìn)行對(duì)人參土傳病害防治效果研究，經(jīng)不同乙醇濃度浸提對(duì)比表明，選用80%乙醇作為肉桂的提取溶劑，60%乙醇溶液作為大黃的提取溶劑較好。

3.2 大黃和肉桂提取劑對(duì)人參立枯病、枯萎病和根腐病的防治效果

大黃和肉桂的乙醇提取物對(duì)人參立枯病的生物防治效果最好，肉桂提取物濃度大于12.5μg/mL時(shí)抑制率均達(dá)100%，大黃提取物濃度大于12.5μg/mL時(shí)抑制率均達(dá)87%。肉桂和大黃均可用于人參立枯病的生物防治，乙醇提取液最適抑菌濃度肉桂選用12.5μg/mL，大黃50μg/mL.肉桂和大黃對(duì)人參枯萎病和根腐病也有抑制效果但略遜于立枯病，可使用乙醇提取液濃度50μg/mL防治。

3.3 討論

本研究只研究了大黃、肉桂的乙醇提取劑應(yīng)用到抑制人參立枯病、枯萎病和根腐病的病菌上，還需要對(duì)其抑菌譜進(jìn)行進(jìn)一步篩選，以了解其抑菌范圍；另外，二種藥材的抑菌活性的成分還需進(jìn)一步研究。人參作為長(zhǎng)白山道地中藥，用量大，用途廣，植物源農(nóng)藥應(yīng)用于人參病害防治，可提高人參品質(zhì)，減少化學(xué)農(nóng)藥殘留。