六班刺鲀性腺?gòu)?qiáng)化培育技術(shù)研究

岳彥峰，蘇志星，王孝杉，蔣科技，彭士明

(中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院東海水產(chǎn)研究所，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部東海與遠(yuǎn)洋漁業(yè)資源開(kāi)發(fā)利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，上海 200090)

六斑刺鲀是一種具有重要開(kāi)發(fā)潛力的品種，本研究針對(duì)野生六斑刺鲀親魚(yú)捕獲后馴養(yǎng)難度高、人工繁殖技術(shù)不成熟導(dǎo)致性腺發(fā)育緩慢及孵化率低的問(wèn)題，開(kāi)展了野生六斑刺鲀的誘導(dǎo)馴養(yǎng)、性腺發(fā)育營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化以及孵化技術(shù)的對(duì)比實(shí)驗(yàn)，以期提高六斑刺鲀受精卵的孵化率，為完善六斑刺鲀苗種繁育提供參考資料。

一、材料與方法

1.野生六斑刺鲀親魚(yú)的來(lái)源及前處理

六斑刺鲀來(lái)自海南潭門港，收購(gòu)時(shí)挑選體表無(wú)傷、鰭條完整、應(yīng)激狀態(tài)下能迅速潛逃、舉刺或鼓氣的個(gè)體，平均體長(zhǎng)(23.3±1.0)厘米、平均體重(858.0±98.1)克/尾。運(yùn)回實(shí)驗(yàn)基地后先用2毫克/升的甲醛(淡水)浸泡10分鐘，再放入兩口32米3水體的水泥池中進(jìn)行5天的適應(yīng)性暫養(yǎng)。暫養(yǎng)水溫(28±2)℃、鹽度33.0±0.5、pH 8.2～8.3，24小時(shí)不間斷充氣，采用黑暗沉淀加沙濾的同溫度和同鹽度潔凈海水、每天更換400%潔凈海水的方式保持水質(zhì)穩(wěn)定。兩口池中各放80尾。

2.親魚(yú)的馴養(yǎng)培育

(1)馴化攝食。將六斑刺鲀適應(yīng)性暫養(yǎng)結(jié)束后的兩口池分別設(shè)為實(shí)驗(yàn)組A-Ⅰ和對(duì)照組B-Ⅰ，剔除活動(dòng)狀態(tài)不好的個(gè)體，A-Ⅰ池中保留60尾待馴化的野生六斑刺鲀，另再放入10尾體重與野生刺鲀體重相近的全人工繁育得到的子二代刺鲀；B-Ⅰ組留待馴化的野生六斑刺鲀?yōu)?0尾。根據(jù)以往野生刺鲀馴化時(shí)間設(shè)定本實(shí)驗(yàn)為14天。兩組均按飽食投喂的方法每天投喂2次，全部投喂冰鮮魚(yú)和蝦，將雜魚(yú)和蝦根據(jù)六斑刺鲀的口裂大小切割成塊投喂。投喂后60分鐘將池底殘餌和糞便用虹吸法處理掉，水質(zhì)控制與馴化暫養(yǎng)期間相同。每天觀察記錄A、B兩組魚(yú)的初次開(kāi)口攝食時(shí)間、全部個(gè)體開(kāi)口攝食時(shí)間、實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)兩組魚(yú)各自的攝食量、魚(yú)活動(dòng)狀況。

(2)性腺發(fā)育的營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化。強(qiáng)化添加劑主要成分包括烏賊內(nèi)臟粉30%、列壸藻粉20%、海洋酵母20%、復(fù)合維生素5%、維生素E醋酸酯5%、大豆卵磷脂10%和南極磷蝦粉10%，其中復(fù)合維生素(毫克/克混合物)由維生素B12.5、維生素B210、維生素C 20、泛酸鈣25、煙酸37.5、維生素B62.5、葉酸0.75、肌醇100、維生素K 2、維生素A 1、維生素D 0.002 5、生物素0.25、維生素B120.05加纖維素填充到1克而成。添加劑按投喂量的5%添加，將強(qiáng)化添加劑按每粒膠囊3克的量添裝到藥用膠囊中，將膠囊放置在4℃冰箱中冷藏備用。

馴食實(shí)驗(yàn)結(jié)束后將兩組中已經(jīng)開(kāi)口攝食的野生六斑刺鲀混合后再隨機(jī)分成2組，分別為實(shí)驗(yàn)組A-Ⅱ和對(duì)照組B-Ⅱ，各60尾。實(shí)驗(yàn)的環(huán)境條件同馴食實(shí)驗(yàn)。投喂方法為：A-Ⅱ組在每次投喂前將添裝有強(qiáng)化添加劑的膠囊?jiàn)A塞到飼料魚(yú)塊或蝦段中，投喂時(shí)保證80%的六斑刺鲀均攝食到2塊；B-Ⅱ組的飼料魚(yú)蝦中不添加強(qiáng)化添加劑，投喂數(shù)量與A組相當(dāng)。實(shí)驗(yàn)進(jìn)行30天，管理方法與馴食實(shí)驗(yàn)相同，每天觀察兩組魚(yú)的活動(dòng)情況，實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)在A、B兩組中分別隨機(jī)選取6～7尾解剖觀察性腺發(fā)育情況。記錄雌雄個(gè)體數(shù)、性腺外觀顏色、性腺成熟系數(shù)、雌魚(yú)的絕對(duì)懷卵量，將雄魚(yú)的游離精子稀釋1 000倍后用平板計(jì)數(shù)法計(jì)量精子濃度。計(jì)算公式為：

性腺指數(shù)(%)＝性腺重/魚(yú)體重量×100；

絕對(duì)懷卵量＝卵巢中樣品的卵粒數(shù)/樣品的重量×卵巢重。

二、結(jié)果

1.馴養(yǎng)培育

A-Ⅰ組中子二代六斑刺鲀?cè)趯?shí)驗(yàn)第1天下午就開(kāi)始攝食，而A-Ⅰ組中的野生六斑刺鲀則在實(shí)驗(yàn)開(kāi)始的第2天下午投喂飼料后出現(xiàn)攝食個(gè)體，實(shí)驗(yàn)第5天全部個(gè)體開(kāi)始攝食，并在投喂飼料后所有個(gè)體能迅速游至投喂點(diǎn)，表現(xiàn)出爭(zhēng)食行為。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)平均每尾魚(yú)日攝食量達(dá)到55克，約占魚(yú)體重的6.5%。B-Ⅰ組中野生刺鲀?cè)趯?shí)驗(yàn)第4天出現(xiàn)攝食，實(shí)驗(yàn)開(kāi)始后第9天全部個(gè)體出現(xiàn)攝食，所有個(gè)體出現(xiàn)爭(zhēng)食行為則是在第11天。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)平均每尾魚(yú)日攝食量為35克，約占魚(yú)體重的4.0%?；祓B(yǎng)子二代刺鲀的實(shí)驗(yàn)組開(kāi)食時(shí)間較沒(méi)有混養(yǎng)的對(duì)照組提前2天，全部個(gè)體開(kāi)食的時(shí)間也比對(duì)照組提前4天。14天的實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，實(shí)驗(yàn)組中平均每尾六斑刺鲀的攝食量較對(duì)照組多57%。

2.性腺發(fā)育強(qiáng)化實(shí)驗(yàn)

A-Ⅱ組取雌、雄魚(yú)分別為3尾和4尾。雌魚(yú)解剖后可見(jiàn)卵巢膨大，卵巢膜血管豐富清晰(圖1-a)，卵巢重(161.8±31.3)克/個(gè)，性腺成熟系數(shù)達(dá)13.7%。剪開(kāi)卵巢膜可見(jiàn)卵粒大部分游離(圖1-b)，游離的卵直徑達(dá)到(1 537.2±36.1)微米，將游離的卵子堆聚在一起顏色呈淡黃色；雄魚(yú)解剖后可見(jiàn)精巢飽滿，外觀呈乳白色的橢圓形狀(圖1-c)，平均精巢重(5.8±0.9)克/個(gè)，雄魚(yú)的性腺成熟系數(shù)為0.6%。劃破精巢后精液呈黏稠狀流出，且遇水即散開(kāi)，精子濃度為(1.7±0.4)×109個(gè)/毫升。B-Ⅱ組取雌、雄魚(yú)各3尾。未經(jīng)強(qiáng)化添加劑飼喂的雌魚(yú)卵巢與實(shí)驗(yàn)前相比也明顯膨大，膜上血管豐富(圖1-d)，3尾雌魚(yú)的卵巢平均重為(128.3±33.7)克，性腺成熟系數(shù)為10.7%。解剖卵巢時(shí)未見(jiàn)有游離的卵粒(圖1-e)，經(jīng)測(cè)量，卵徑為(1 401.5±87.7)微米；雄魚(yú)精巢外觀形狀與A-Ⅱ組中的情況相近(圖2-f)，顏色較A-Ⅱ組中雄魚(yú)精巢略暗，精巢重僅(4.0±1.0)克/個(gè)，雄魚(yú)性腺成熟系數(shù)為0.4%。劃破精巢后大部分呈“面疙瘩”狀，少量呈黏稠狀流動(dòng)，遇水不能立即散開(kāi)，散開(kāi)的精子濃度為(1.7±0.3)×109個(gè)/毫升。

圖1 添加強(qiáng)化劑飼喂后六斑刺鲀卵巢、精巢形態(tài)特征

三、討論

六斑刺鲀?yōu)槿馐承贼~(yú)，在剛剛捕獲時(shí)野性較強(qiáng)，應(yīng)激反應(yīng)強(qiáng)烈，在人工養(yǎng)殖環(huán)境條件下通常不輕易攝食。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)在暫養(yǎng)池放入同種個(gè)體大小相近的子二代刺鲀，較對(duì)照組明顯提前了馴化開(kāi)食時(shí)間達(dá)4天。在子二代六斑刺鲀的養(yǎng)殖過(guò)程中，飼料種類以藍(lán)圓鲹、玉筋魚(yú)、龍頭魚(yú)以及牡蠣等為主，本實(shí)驗(yàn)馴化野生六斑刺鲀時(shí)直接投喂冰鮮雜魚(yú)蝦，省略了之前先投喂活餌再轉(zhuǎn)成冰鮮雜魚(yú)蝦的過(guò)程。類似的馴化開(kāi)食方法在野生牙鲆的親魚(yú)培育中，也有采用已馴化好的牙鲆與野生牙鲆混養(yǎng)的方法以誘導(dǎo)野生牙鲆開(kāi)口攝食。

親魚(yú)的性腺發(fā)育可以通過(guò)環(huán)境因子和飼料中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的調(diào)控來(lái)達(dá)到促性腺發(fā)育的目的，如通過(guò)突然改變光周期和營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化等方法誘導(dǎo)大菱鲆產(chǎn)卵。在研究環(huán)境因子對(duì)性腺發(fā)育促進(jìn)作用的同時(shí)，飼料的營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化也具有重要的作用，魚(yú)在通過(guò)攝食獲取能量以滿足生長(zhǎng)發(fā)育的同時(shí)，也對(duì)生殖過(guò)程中的性腺發(fā)育提供了重要的物質(zhì)來(lái)源。性腺發(fā)育需要特殊的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)來(lái)強(qiáng)化，親魚(yú)營(yíng)養(yǎng)對(duì)提高魚(yú)的生殖性能、卵子質(zhì)量和仔稚魚(yú)生長(zhǎng)與存活等具有重要的作用。本實(shí)驗(yàn)在性腺發(fā)育的強(qiáng)化添加劑中除了大豆卵磷脂，同時(shí)還添加了烏賊內(nèi)臟粉、列壸藻粉、海洋酵母和南極磷蝦粉等，這些原料中同樣包含了卵磷脂的成分。親魚(yú)發(fā)育需要飼料中有適量的卵磷脂。

飼料中不飽和脂肪酸和卵磷脂是親魚(yú)性腺發(fā)育的重要營(yíng)養(yǎng)素，對(duì)親魚(yú)產(chǎn)卵效果、精卵質(zhì)量和仔稚幼魚(yú)的生長(zhǎng)發(fā)育都有顯著影響。本實(shí)驗(yàn)采用的烏賊內(nèi)臟粉、列壸藻粉和南極磷蝦粉等原料中富含DHA和EPA等高不飽和脂肪酸，保證了強(qiáng)化添加劑能滿足親魚(yú)性腺的發(fā)育，這可能是導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)組中六斑刺鲀卵巢絕對(duì)懷卵量與對(duì)照組形成顯著性差異(P＜0.05)的原因之一。實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組中的雄魚(yú)精巢重量、成熟系數(shù)和精子濃度雖然均未有顯著性差異，但精巢的性腺發(fā)育已達(dá)到Ⅴ期，且顏色呈現(xiàn)出乳白色，遇海水后散開(kāi)更快，未見(jiàn)如對(duì)照組解剖后的“面疙瘩”狀。結(jié)果表明了強(qiáng)化添加劑還能有效地提高精巢的發(fā)育進(jìn)程，從標(biāo)準(zhǔn)差值看實(shí)驗(yàn)組較對(duì)照組更具有同步性。