乙肝5項(xiàng)標(biāo)志物定量診斷試劑的優(yōu)化及性能評(píng)價(jià)

黃貞杰，張劍清

（1.泉州醫(yī)學(xué)高等專(zhuān)科學(xué)校 基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)部，福建 泉州 362011；2.福建省洪誠(chéng)生物藥業(yè)有限公司，福建 莆田 351254）

化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)由于靈敏度高、線性范圍寬、有效期長(zhǎng)、無(wú)有害物污染、可實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化，兼具放射性免疫學(xué)方法和酶免疫方法二者的優(yōu)點(diǎn),被廣泛應(yīng)用[1-3].它可滿足現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對(duì)疾病相關(guān)因子的精確定量和動(dòng)態(tài)檢測(cè)的要求,與其他方法相比，在技術(shù)上具有明顯的優(yōu)勢(shì)[4-6].我國(guó)是乙型肝炎的高發(fā)區(qū)，乙肝系列化學(xué)發(fā)光診斷產(chǎn)品對(duì)乙型肝炎的監(jiān)測(cè)、傳染源控制及療效判斷等具有重要意義[7].乙型肝炎5 項(xiàng)血清標(biāo)志物，即乙肝兩對(duì)半，是檢測(cè)血液中乙肝病毒的血清學(xué)標(biāo)志，高效定量檢測(cè)乙肝5 項(xiàng)標(biāo)志物對(duì)乙肝的診斷具有重要臨床意義[8].目前，國(guó)外產(chǎn)品如Abbott、Roche 的試劑性能相對(duì)穩(wěn)定，檢測(cè)結(jié)果符合率較高，市場(chǎng)占比具有優(yōu)勢(shì)；國(guó)內(nèi)也出現(xiàn)了越來(lái)越多的乙型肝炎系列體外診斷試劑廠家，但是試劑的性能參差不齊[9-10]，而且大多是定性檢測(cè)為主[11].國(guó)產(chǎn)化學(xué)發(fā)光法診斷試劑的檢測(cè)靈敏度相對(duì)較低,存在漏檢情況[12-13].本文對(duì)國(guó)產(chǎn)化學(xué)發(fā)光法乙型肝炎5 項(xiàng)標(biāo)志物診斷試劑進(jìn)行優(yōu)化，研制較高質(zhì)量和穩(wěn)定性的國(guó)產(chǎn)新型化學(xué)發(fā)光法乙型肝炎血清標(biāo)志物定量診斷試劑，以緩解國(guó)外化學(xué)發(fā)光診斷試劑獨(dú)霸國(guó)內(nèi)市場(chǎng)的不利局面，提高我國(guó)體外診斷試劑與國(guó)外知名企業(yè)的競(jìng)爭(zhēng)力.

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 主要試劑 微孔板購(gòu)自深圳市金燦華實(shí)業(yè)有限公司；各檢測(cè)試劑盒包被及酶原料分別購(gòu)自軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院、北京京達(dá)致遠(yuǎn)生物有限公司、洛陽(yáng)市佰泰科生物技術(shù)有限公司、北京萬(wàn)象宏達(dá)生物技術(shù)研究所、北京科躍中楷生物技術(shù)有限公司；小牛血清、白蛋白購(gòu)自上海洛神生物技術(shù)有限公司；對(duì)比用的化學(xué)發(fā)光定量檢測(cè)試劑購(gòu)自Abbott公司；HBeAg國(guó)際靈敏度參考品1#、2#和3#5個(gè)梯度的濃度（質(zhì)量濃度，后同）分別為1∶16、1∶32、1∶64、1∶128和1∶256；HBeAb國(guó)際靈敏度參考品1#、2#和3#5個(gè)梯度的濃度分別為1∶8、1∶16、1∶32、1∶64和1∶128；HBcAb國(guó)際靈敏度參考品1#、2#和3#5個(gè)梯度的濃度分別為1∶1、1∶2、1∶4、1∶8和1∶16.

1.1.2 儀器設(shè)備 自動(dòng)包被機(jī)(A208)，北京拓普分析儀器有限公司；自動(dòng)酶標(biāo)洗板機(jī)(DEM-III)，北京拓普分析儀器有限公司；化學(xué)發(fā)光分析儀(HC-CLIA-Ⅲ)，福建省洪誠(chéng)生物藥業(yè)有限公司；隔水式培養(yǎng)箱(GHP-9080)，上海一恒科技有限公司；旋渦混合器(GL-86B)，海門(mén)麒麟；ARCHITECT i2000SR 檢測(cè)系統(tǒng)，Abbott公司；除濕機(jī)(DH-830C)，川島.

1.2 研究方法

1.2.1 包被原料活性篩選 按照廠家提供的參考比例進(jìn)行包被，比較包被原料的活性高低.

1.2.2 最適包被濃度及酶標(biāo)工作濃度的確定 將包被原料用包被液分別稀釋成不同濃度后，包被微孔板.將HRP 標(biāo)記的酶原料稀釋不同濃度后，以校準(zhǔn)品或陰陽(yáng)性對(duì)照作為樣本，采用方陣滴定法，確定最適的包被比例及酶標(biāo)濃度.

1.2.3 靈敏度試驗(yàn) 定量檢測(cè)以原試劑盒校準(zhǔn)品S0和S1的發(fā)光值比值衡量試劑盒靈敏度；定性檢測(cè)以測(cè)定國(guó)標(biāo)靈敏度參比品，觀察是否可以全部檢出.

1.2.4 包被板及酶穩(wěn)定性考核 將包被板及HRP 標(biāo)記酶置于37 ℃恒溫培養(yǎng)箱中3 d，對(duì)其進(jìn)行穩(wěn)定性考核.

1.2.5 HBsAg強(qiáng)陽(yáng)性血漿原料篩選及處理 選擇1份HBsAg強(qiáng)陽(yáng)性血漿，體積足夠多，采用Abboott化學(xué)發(fā)光定量檢測(cè)試劑盒和本研究試劑盒檢測(cè)，嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)要求操作，兩種試劑盒分別檢測(cè)2 次.經(jīng)兩種試劑盒篩選好的HBsAg陽(yáng)性血漿，經(jīng)101～103 ℃90 s及65 ℃10 h巴氏消毒處理，作為配制質(zhì)控品的原料.

1.2.6 HBsAg強(qiáng)陽(yáng)性血漿的標(biāo)定 以PBS為稀釋液，將HBsAg陽(yáng)性血漿用稀釋液稀釋一系列梯度，以國(guó)家表面抗原定量線性參考品為標(biāo)準(zhǔn)，預(yù)實(shí)驗(yàn)對(duì)HBsAg 陽(yáng)性血漿的濃度進(jìn)行初步估算.估算好濃度的HBsAg 陽(yáng)性血漿先用稀釋液按1∶32 稀釋后，再按1.5 倍系列稀釋8 個(gè)點(diǎn)，由國(guó)家線性參考品及洪誠(chéng)試劑經(jīng)雙平行線方法進(jìn)行標(biāo)定，并進(jìn)行t檢驗(yàn).同時(shí)，將1∶32 的稀釋液按照2 倍系列稀釋8 個(gè)點(diǎn)，并按照上述方法進(jìn)行標(biāo)定.對(duì)兩次標(biāo)定結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià).兩次標(biāo)定結(jié)果偏差若符合檢測(cè)試劑的變異范圍，則確定HBsAg陽(yáng)性血漿的初始濃度.將確定濃度值的HBsAg陽(yáng)性血漿稀釋至校準(zhǔn)品濃度，配制成校準(zhǔn)品.

1.2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS19.0軟件分析處理，計(jì)量數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)數(shù)據(jù)以率(%)表示.檢驗(yàn)水準(zhǔn)設(shè)為α=0.05.

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析

2.1 乙肝兩對(duì)半原料篩選與穩(wěn)定性試驗(yàn)

2.1.1 包被原料篩選 對(duì)于定量檢測(cè)，以校準(zhǔn)品進(jìn)行對(duì)比；定性檢測(cè)，則以陰陽(yáng)性對(duì)照作為考核對(duì)象.實(shí)驗(yàn)結(jié)果：1）HBsAg 包被原料中軍科院和萬(wàn)象的原料活性較高，可以作為下一步試驗(yàn)材料；2）HBsAb 包被原料中萬(wàn)象、科躍及佰泰科的原料較好；3）HBeAg、HBeAb 包被原料除了軍科院的外，其他活性均不高；4)HBcAb包被原料中萬(wàn)象原料的活性比京達(dá)的稍低，京達(dá)的活性最高，可以考慮作為下一步試驗(yàn)材料.

2.1.2 包被濃度及酶標(biāo)濃度的確定 經(jīng)過(guò)方陣滴定試驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下：1）HBsAg檢測(cè)試劑：軍科院包被濃度1∶3 000，酶濃度1∶2 000；萬(wàn)象包被濃度1∶2 500，酶濃度1∶2 000.2）HBsAb檢測(cè)試劑：萬(wàn)象包被濃度1∶4 000，酶濃度1∶2 500；科躍包被濃度1∶5 000，酶濃度1∶2 000；佰泰科包被濃度1∶7 000，酶濃度1∶3 000.3）HBeAg檢測(cè)試劑：軍科院包被1∶2 000，酶濃度1∶5 000.4）HBeAb檢測(cè)試劑：軍科院包被1∶2 500，酶濃度1∶8 000.5）HBcAb檢測(cè)試劑：京達(dá)包被1∶5 000，酶濃度1∶5 000；萬(wàn)象包被1∶6 000，酶濃度1∶4 000.根據(jù)各檢測(cè)試劑原料的最適包被比例及酶濃度，分別包被一些微孔板，并配置酶溶液，與現(xiàn)有試劑盒進(jìn)行靈敏度比較試驗(yàn).

2.1.3 靈敏度試驗(yàn) 試驗(yàn)結(jié)果如下.

1)試劑盒定量檢測(cè).以試劑盒S0、S1 發(fā)光值的比值作為定量檢測(cè)的衡量指標(biāo)，HBsAg 檢測(cè)試劑的靈敏度情況具體如表1所示.

表1 HBsAg 3種試劑靈敏度比較

由表1 可以看出，萬(wàn)象HBsAg 原料的S0 與S1 比值最小，說(shuō)明S1 與S0 發(fā)光值拉得比較開(kāi)，因此靈敏度最好，軍科院的原料活性雖然也比較好，但是靈敏度不夠.

2)HBsAb檢測(cè)試劑的靈敏度比較.HBsAb 4種試劑的靈敏度情況如表2所示.

表2 HBsAb 4種試劑靈敏度比較

由表2可見(jiàn)，只有佰泰科原料的靈敏度比原試劑盒好.

3)乙型肝炎病毒e 抗原國(guó)家靈敏度參考品測(cè)試.軍科院HBeAg 原料制備的試劑盒檢測(cè)靈敏度參考品的結(jié)果如表3所示.

表3 HBeAg試劑靈敏度試驗(yàn)結(jié)果

由表3 可知，軍科院HBeAg 原料制備的試劑盒均能檢測(cè)出國(guó)家靈敏度的15 個(gè)樣品，說(shuō)明符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的最低靈敏度檢出標(biāo)準(zhǔn).

4)乙型肝炎病毒e 抗體國(guó)家靈敏度參考品測(cè)試.軍科院HBeAb 原料制備的試劑盒檢測(cè)靈敏度參考品的結(jié)果如表4所示.

表4 HBeAb試劑靈敏度參考品試驗(yàn)結(jié)果

由表4 可知，軍科院HBeAb 原料制備的試劑盒均能檢測(cè)出國(guó)家靈敏度15 個(gè)樣品，說(shuō)明符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的最低靈敏度檢出標(biāo)準(zhǔn).

5)乙型肝炎核心抗體.京達(dá)和萬(wàn)象HBcAb檢測(cè)試劑國(guó)家靈敏度參考品測(cè)試結(jié)果如表5所示.

表5 京達(dá)和萬(wàn)象HBcAb試劑靈敏度試驗(yàn)結(jié)果

由表5 數(shù)據(jù)分析可知，京達(dá)HBcAb 原料制備的試劑盒均能檢測(cè)出國(guó)家靈敏度15 個(gè)樣品，說(shuō)明該原料的靈敏度最高；萬(wàn)象HBcAb 原料制備的試劑盒只能測(cè)出1#和2#靈敏度，無(wú)法測(cè)出3#，因此，萬(wàn)象原料檢測(cè)HbcAb的靈敏度不夠高，所以，選擇京達(dá)原料制備HBcAb試劑盒.

2.1.4 穩(wěn)定性試驗(yàn) 試驗(yàn)結(jié)果如下.

1)HBsAg試劑穩(wěn)定性試驗(yàn).HBsAg以萬(wàn)象作為原料，進(jìn)行穩(wěn)定性試驗(yàn)，結(jié)果如表6所示.

表6 HBsAg試劑穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

本研究以成品檢定技術(shù)指標(biāo)等隨貯存時(shí)間的變化來(lái)評(píng)價(jià)試劑盒的穩(wěn)定性.根據(jù)國(guó)家對(duì)體外診斷試劑的質(zhì)量要求規(guī)范，在37 ℃保溫3 d,進(jìn)行穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn).表6數(shù)據(jù)表明該試劑盒穩(wěn)定性符合要求.

2)HBsAb 試劑穩(wěn)定性試驗(yàn).經(jīng)篩選，HBsAb 原料靈敏度最好的原料為佰泰科，故選取由此原料組成的試劑進(jìn)行穩(wěn)定性試驗(yàn)，結(jié)果如表7所示.

表7 HBsAb試劑穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

表7數(shù)據(jù)表明，在37 ℃保溫3 d，試劑盒各項(xiàng)檢定技術(shù)指標(biāo)均符合國(guó)家對(duì)體外診斷試劑的質(zhì)量要求，該試劑盒穩(wěn)定性符合國(guó)家要求.

3)HBeAg 試劑穩(wěn)定性試驗(yàn).經(jīng)篩選，確定采用軍科院的作為HBeAg 原料，并對(duì)此原料組成的試劑進(jìn)行穩(wěn)定性試驗(yàn)，結(jié)果如表8所示.表中，S/CO表示樣品發(fā)光值和臨界值的比值，下同.

表8 HBeAg試劑穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

本研究以成品檢定技術(shù)指標(biāo)等隨貯存時(shí)間的變化來(lái)評(píng)價(jià)試劑盒的穩(wěn)定性.根據(jù)國(guó)家對(duì)體外診斷試劑的質(zhì)量要求規(guī)范，在37 ℃保溫3 d,進(jìn)行穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn).表8數(shù)據(jù)表明該試劑盒穩(wěn)定性符合要求.

4)HBeAb試劑穩(wěn)定性試驗(yàn).經(jīng)篩選，確定HBeAb原料采用軍科院的，并對(duì)此原料組成的試劑進(jìn)行穩(wěn)定性試驗(yàn)，結(jié)果如表9所示.

表9 HBeAb試劑穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

從表9可見(jiàn)，在37 ℃保溫3 d下，試劑盒各項(xiàng)檢定技術(shù)指標(biāo)均符合國(guó)家對(duì)體外診斷試劑的質(zhì)量要求，表明該試劑盒穩(wěn)定性符合要求.

5）HBcAb試劑穩(wěn)定性試驗(yàn).經(jīng)篩選，HBcAb原料靈敏度最好的原料為京達(dá)，對(duì)此原料組成的試劑進(jìn)行穩(wěn)定性試驗(yàn)，結(jié)果如表10所示.

表10 HBcAb試劑穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

本研究以成品檢定技術(shù)指標(biāo)等隨貯存時(shí)間的變化來(lái)評(píng)價(jià)試劑盒的穩(wěn)定性.根據(jù)國(guó)家對(duì)體外診斷試劑的質(zhì)量要求規(guī)范，在37 ℃保溫3 d,進(jìn)行穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn).從表10可見(jiàn)，該試劑盒穩(wěn)定性符合相關(guān)要求.

2.2 乙肝表面抗原企業(yè)二級(jí)IU標(biāo)準(zhǔn)品制備

2.2.1 HBsAg 陽(yáng)性血漿濃度估算 HBsAg 陽(yáng)性血漿先用稀釋液按1∶10 稀釋后，按2 倍稀釋成1∶20、1∶40、1∶80、1∶160、1∶320、1∶640 和1∶1 280 共8 個(gè)梯度.將國(guó)家線性參考品(表11)及稀釋血漿分別制作曲線，結(jié)果如圖1 所示.圖1 中：x代表血漿濃度；Sn代表不同濃度下的發(fā)光值；S0代表濃度為0 時(shí)的發(fā)光值(下同).由圖1 可見(jiàn)，國(guó)家線性參考品的相關(guān)系數(shù)為0.996 5，而稀釋血漿線性的相關(guān)系數(shù)為0.974 4，但是兩條線性接近平行，因此，實(shí)驗(yàn)結(jié)果可靠.由每個(gè)稀釋血漿的標(biāo)定結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)，可估算出HBsAg陽(yáng)性血漿的濃度范圍為3 000～3 500 IU·mL-1.

圖1 國(guó)家線性參考品與稀釋血漿線性比較

表11 表面抗原國(guó)家線性參考品

2.2.2 HBsAg強(qiáng)陽(yáng)性血漿標(biāo)定結(jié)果 HBsAg陽(yáng)性血漿先用稀釋液按1∶32稀釋后，再按1.5倍和2倍分別系列稀釋8個(gè)點(diǎn)，由國(guó)家線性參考品及優(yōu)化試劑經(jīng)雙平行線方法進(jìn)行標(biāo)定，并進(jìn)行t檢驗(yàn).結(jié)果如圖2所示.

圖2 HBsAg陽(yáng)性血漿標(biāo)定

由1.5倍梯度稀釋制得的曲線為y1，2倍梯度稀釋制得的曲線為y2.由曲線y1推算HBsAg陽(yáng)性血漿的濃度值為3 200 IU·mL-1，而由曲線y2推算HBsAg 陽(yáng)性血漿的濃度值為3 400 IU·mL-1，兩者的偏差為4.29%，小于15%，因此符合檢測(cè)試劑的變異范圍.同時(shí)，對(duì)y1各稀釋度的理論濃度及由國(guó)家線性參考品計(jì)算得出的濃度值進(jìn)行t檢驗(yàn)，檢驗(yàn)得出P單尾值為0.024，小于0.05，因此，系統(tǒng)誤差的可能性可以排除，說(shuō)明實(shí)驗(yàn)結(jié)果可靠.由于曲線y1與國(guó)家線性參考品曲線y的重合性較好，且相關(guān)系數(shù)也較高，因此確定HBsAg陽(yáng)性血漿的原始濃度值為3 200 IU·mL-1.

2.2.3 校準(zhǔn)品配制 將已經(jīng)確定好濃度值為3 200 IU·mL-1的HBsAg陽(yáng)性血漿,用稀釋液稀釋成校準(zhǔn)品所需要的濃度，對(duì)兩條曲線采用雙平行線法進(jìn)行比較，結(jié)果如圖3所示.

由圖3 可以看出，校準(zhǔn)品曲線y1與國(guó)家線性參考曲線基本上平行，并且重合性很好，同時(shí)校準(zhǔn)品濃度值與發(fā)光值具有較好的相關(guān)性.

圖3 校準(zhǔn)品配制

2.3 乙肝兩對(duì)半化學(xué)發(fā)光診斷試劑與進(jìn)口同類(lèi)產(chǎn)品的對(duì)比

以福建省內(nèi)3 家三甲醫(yī)院進(jìn)口乙肝兩對(duì)半化學(xué)發(fā)光診斷試劑的臨床檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行比對(duì),共比對(duì)了280例血清標(biāo)本，比對(duì)檢測(cè)結(jié)果如下.

2.3.1 乙肝表面抗原試劑盒比對(duì) 1)表面抗原試劑盒檢測(cè)結(jié)果為：總符合率為98.2%(275/280)，特異性（陰性符合率）為100%(175/175)，靈敏度（陽(yáng)性符合率）為95.2%(100/105).2)表面抗原試劑盒定量檢測(cè)值與進(jìn)口雅培試劑盒的相關(guān)系數(shù)為0.97，表明HBsAg 定量診斷試劑盒（化學(xué)發(fā)光法）與進(jìn)口雅培試劑盒的檢測(cè)結(jié)果相關(guān)性佳.

2.3.2 乙肝表面抗體試劑盒比對(duì)1)表面抗體檢測(cè)結(jié)果為：總符合率為98.2%(275/280)，特異性（陰性符合率）為100%(149/149)，靈敏度（陽(yáng)性符合率）為96.2% (126/131).2)表面抗體與雅培試劑盒的相關(guān)系數(shù)為0.978，表明HBsAb定量診斷試劑盒（化學(xué)發(fā)光法）與雅培試劑盒檢測(cè)結(jié)果的相關(guān)性好.

2.3.3 乙肝e 抗原試劑盒比對(duì)1)e 抗原的檢測(cè)結(jié)果為：總符合率96.4%(270/280)，特異性（陰性符合率）為100%(219/219),靈敏度（陽(yáng)性符合率）為83.6%(51/61).2)對(duì)不符合的e 抗原檢測(cè)結(jié)果分析，發(fā)現(xiàn)不符合的樣本全都處于臨界值范圍.

2.3.4 乙肝E抗體試劑盒比對(duì)1)總符合率為96.0%(269/280)，特異性（陰性符合率）為95.4%(212/222)，靈敏度（陽(yáng)性符合率）為98.2%(57/58).2)對(duì)不符合的樣本進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)不符合的樣本全部處于臨界值范圍.

2.3.5 乙肝核心抗體試劑盒比對(duì) 總符合率為97.1%(272/280)，特異性（陰性符合率）為93.1%(27/29),靈敏度（陽(yáng)性符合率）為97.6%(245/251).總符合率佳.

2.3.6 原試劑盒與雅培試劑盒的比對(duì)HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb 比對(duì)的總符合率分別為97.1%(272/280)、97.5%(273/280)、96.0%(269/280)、95.3%(267/280)、96.4%(270/280).

3 結(jié)論

本研究先篩選了生物活性原材料，從全國(guó)各地乙肝診斷試劑所用抗原抗體生物活性原材料生產(chǎn)廠家取得原材料小樣，進(jìn)行小試和比對(duì)實(shí)驗(yàn)，確定最優(yōu)化的原材料組合.然后，重新標(biāo)定乙肝兩對(duì)半定量校準(zhǔn)品，溯源至國(guó)家參考品（IU）.用乙肝表面抗原的國(guó)家IU 標(biāo)準(zhǔn)品為溯源，制備乙肝表面抗原的企業(yè)二級(jí)IU標(biāo)準(zhǔn)品，并完成企業(yè)原納克單位與IU單位的轉(zhuǎn)換，結(jié)果準(zhǔn)確.最后，在三甲醫(yī)院進(jìn)行臨床比對(duì)，乙肝兩對(duì)半診斷產(chǎn)品的符合率達(dá)96%以上，其中表面抗原、表面抗體試劑盒總符合率為98.2%；而比對(duì)的醫(yī)院采用的是進(jìn)口的雅培乙肝兩對(duì)半化學(xué)發(fā)光診斷產(chǎn)品試劑.結(jié)果表明，本研究乙肝兩對(duì)半產(chǎn)品的性能和質(zhì)量指標(biāo)達(dá)到進(jìn)口產(chǎn)品水平.靈敏度試驗(yàn)表明，優(yōu)化后的試劑靈敏度要比原試劑好，如HbsAg 和HBsAb 原試劑的S0與S1比值分別是0.32、0.41，而優(yōu)化后的試劑S0與S1比值分別是0.25、0.27，靈敏度更好.穩(wěn)定性試驗(yàn)比較結(jié)果表明，優(yōu)化后的試劑批內(nèi)精密度CV值均比優(yōu)化前相對(duì)應(yīng)的試劑更小，其他指標(biāo)更優(yōu)，說(shuō)明穩(wěn)定性更好.與Abbott 試劑檢測(cè)結(jié)果的對(duì)比表明，優(yōu)化后的試劑盒比原試劑盒總符合率更高，檢測(cè)效果更好.可見(jiàn)，通過(guò)優(yōu)選試劑生產(chǎn)所需的生物活性原材料，使乙肝兩對(duì)半診斷試劑的產(chǎn)品性能，包括穩(wěn)定性、重復(fù)性、批間和批內(nèi)差、準(zhǔn)確性等指標(biāo)保持優(yōu)異，可一定程度上提高我國(guó)乙肝體外診斷試劑與國(guó)外知名企業(yè)的競(jìng)爭(zhēng)力.

化學(xué)發(fā)光免疫分析方法把酶標(biāo)記手段與免疫反應(yīng)相結(jié)合，兼具了放射性免疫學(xué)方法和酶免疫方法二者的優(yōu)點(diǎn)，通過(guò)測(cè)定酶促反應(yīng)釋放的光子進(jìn)行定量分析，具有很高的靈敏度，用于乙肝的血清學(xué)診斷，相比于酶聯(lián)免疫吸附法和金標(biāo)法等具有明顯的優(yōu)勢(shì).國(guó)產(chǎn)新型化學(xué)發(fā)光法乙肝系列診斷產(chǎn)品擁有巨大的市場(chǎng)潛力，但也面臨著更加激烈的競(jìng)爭(zhēng)，提高檢測(cè)的精確度、穩(wěn)定性必將是化學(xué)發(fā)光法乙肝血清學(xué)診斷產(chǎn)品保持競(jìng)爭(zhēng)力的核心.乙肝血清學(xué)標(biāo)志物診斷技術(shù)從定性到定量的發(fā)展，需要解決溯源準(zhǔn)確性的問(wèn)題.相對(duì)于乙肝5項(xiàng)標(biāo)志物的定性檢測(cè)產(chǎn)品，定量檢測(cè)可以更好地監(jiān)測(cè)病情、指導(dǎo)治療、可預(yù)測(cè)血清學(xué)轉(zhuǎn)換、預(yù)測(cè)乙肝病毒感染變化過(guò)程以及評(píng)價(jià)免疫效果[11,14]，等等.因此，需要更科學(xué)準(zhǔn)確的檢測(cè)結(jié)果，檢測(cè)結(jié)果的溯源性也必然是試劑生產(chǎn)的重要質(zhì)量指標(biāo).