微生態(tài)制劑對(duì)熱應(yīng)激肉雞免疫功能和腸道形態(tài)的影響

蔣 磊，徐秀景，陳 杰

（1.宿州職業(yè)技術(shù)學(xué)院，安徽 宿州 234000；2.安徽海大飼料有限公司，安徽 池州 247100）

熱應(yīng)激(heat-stressed，HS)是指家禽處于超出自身等熱區(qū)上限的高溫環(huán)境下，機(jī)體應(yīng)對(duì)刺激出現(xiàn)的非特異性應(yīng)答反應(yīng).高溫環(huán)境易引起肉雞熱應(yīng)激，造成機(jī)體器官損傷，腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，并影響免疫系統(tǒng)和免疫反應(yīng)，甚至導(dǎo)致死亡.在當(dāng)前肉雞高密度集約化的飼養(yǎng)模式下，熱應(yīng)激問(wèn)題已給各國(guó)養(yǎng)殖業(yè)造成較大損失，美國(guó)每年肉雞生產(chǎn)損失高達(dá)0.52 億美元，我國(guó)南方地區(qū)夏季高溫炎熱，熱應(yīng)激現(xiàn)象也普遍存在[1].大量研究表明，在常溫條件下，微生態(tài)制劑可改善肉雞腸道環(huán)境，維持腸道結(jié)構(gòu)完整性，促進(jìn)免疫器官發(fā)育，調(diào)節(jié)免疫生理等[2-5]，理論上可利用微生態(tài)制劑防治肉雞熱應(yīng)激，然而目前關(guān)于這方面的報(bào)道十分有限.因此，本研究以35 日齡817 肉雞為研究對(duì)象，探討飼糧中添加微生態(tài)制劑對(duì)熱應(yīng)激肉雞免疫狀態(tài)和空腸形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響，以期為評(píng)估微生態(tài)制劑防治熱應(yīng)激的應(yīng)用價(jià)值提供參考.

1 材料方法

1.1 試驗(yàn)材料

微生態(tài)制劑購(gòu)自鄭州益富源生物有限公司，含有效活菌數(shù)：乳酸桿菌≥1.0×107CFU·g-1，枯草芽孢桿菌≥1.0×107CFU·g-1，酵母菌≥1.0×106CFU·g-1.試驗(yàn)動(dòng)物為817肉雞，由海大飼料有限公司提供.

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

采用2×2析因設(shè)計(jì)，選取35日齡體重相近的肉雞288只，隨機(jī)分成4組，分別為常溫組（NT）、熱應(yīng)激組(HS)、常溫+微生態(tài)制劑組（NT+PRO）、熱應(yīng)激+微生態(tài)制劑組（HS+PRO），每組3 個(gè)重復(fù).其中，NT 和HS組飼喂基礎(chǔ)日糧（表1），NT+PRO 和HS+PRO 組在基礎(chǔ)日糧中添加200 mg·kg-1微生態(tài)制劑.試驗(yàn)期從35 日齡至49 日齡，共14 d.采用多層籠養(yǎng)，常規(guī)程序免疫，自由采食、飲水.試驗(yàn)期常溫溫度設(shè)定為（23±1）℃，高溫溫度設(shè)定為每天8：00至18：00（32±1）℃，18：00至次日8：00（23±1）℃.

表1 基礎(chǔ)日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平

1.3 指標(biāo)測(cè)定

1.3.1 血清免疫指標(biāo) 試驗(yàn)期末，從每個(gè)重復(fù)組隨機(jī)抽取6只接近平均體重的肉雞進(jìn)行翅下采血2 mL，血樣置于4 ℃冰箱中靜置14 h，分離血清.采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（enzyme-linked immunosorbent assays,ELISA）試劑盒測(cè)定免疫球蛋白A(immunoglobulin A，IgA)、免疫球蛋白G（immunoglobulin G，IgG）、免疫球蛋白M（immunoglobulin M，IgM）含量，試劑盒由南京建成生物工程研究所提供.

1.3.2 免疫器官指數(shù) 屠宰后摘取胸腺、脾臟和法氏囊，剔除附著組織后稱重，并計(jì)算免疫器官指數(shù).

1.3.3 空腸組織形態(tài) 取2 cm 中段空腸，用PBS 液沖洗后置于福爾馬林溶液中固定，待脫水、包埋、切片、蘇木素-伊紅染色后，測(cè)量絨毛高度、隱窩深度，并計(jì)算絨隱比.

1.4 數(shù)據(jù)處理

采用Excel 2013分析數(shù)據(jù)，用SPSS 17.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析和多重比較，結(jié)果表示為均值±標(biāo)準(zhǔn)誤（standard error of mean，SEM），P＜0.05代表差異顯著.

2 結(jié)果分析

2.1 微生態(tài)制劑對(duì)熱應(yīng)激肉雞血清免疫指標(biāo)的影響

由表2 可知，與常溫相比，熱應(yīng)激顯著降低肉雞血清中IgA、IgG、IgM 的含量（P＜0.05).常溫狀態(tài)下，NT+PRO 組血清中IgA、IgG 含量顯著高于NT 組（P＜0.05)，而IgM 含量無(wú)顯著性差異（P＞0.05)；熱應(yīng)激狀態(tài)下，與HS 組相比，HS+PRO 組血清中IgA、IgG、IgM 含量分別提高了17.28%、12.64%和5.00%，其中兩組的IgA、IgG含量差異顯著（P＜0.05).

表2 不同處理組肉雞血清免疫球蛋白含量 (mg·mL-1)

2.2 微生態(tài)制劑對(duì)熱應(yīng)激肉雞免疫器官指數(shù)的影響

由表3 可知，與常溫相比，熱應(yīng)激顯著降低肉雞胸腺、脾臟和法氏囊的免疫器官指數(shù)（P＜0.05).常溫狀態(tài)下，與NT 組相比，NT+PRO 組肉雞脾臟免疫器官指數(shù)顯著提高（P＜0.05)，而胸腺和法氏囊的免疫器官指數(shù)無(wú)顯著差異（P＞0.05)；熱應(yīng)激狀態(tài)下，與HS 組相比，HS+PRO 組肉雞胸腺和脾臟免疫器官指數(shù)分別提高了28.14%和36.51%，差異顯著（P＜0.05)，而法氏囊免疫器官指數(shù)差異不顯著（P＞0.05).

表3 不同處理組肉雞免疫器官指數(shù)（mg·g-1）

2.3 微生態(tài)制劑對(duì)熱應(yīng)激肉雞腸道形態(tài)的影響

由表4可知，與NT組相比，HS組肉雞空腸絨毛高度顯著降低，隱窩深度顯著增加（P＜0.05).常溫狀態(tài)下，NT+PRO組空腸絨毛高度、隱窩深度及兩者比值與NT組無(wú)顯著差異（P＞0.05)；熱應(yīng)激狀態(tài)下，與HS組相比，HS+PRO組空腸絨毛高度及絨毛高度與隱窩深度的比值分別提高了17.65%和27.37%，差異顯著（P＜0.05)，而隱窩深度無(wú)顯著性差異（P＞0.05).

表4 不同處理組肉雞空腸組織形態(tài)

3 討論

3.1 微生態(tài)制劑對(duì)熱應(yīng)激肉雞血清免疫指標(biāo)的影響

免疫球蛋白參與體液免疫，其含量的高低反映了機(jī)體免疫功能的強(qiáng)弱.其中，IgA 主要參與黏膜局部防御，阻止病原體在細(xì)胞表面粘附；IgG 和IgM 可介導(dǎo)體液免疫，具有抗菌、抗毒素等活性功能[6].郝二英等[7]研究表明，35 ℃高溫環(huán)境下蛋雞血液中IgA、IgG、IgM 含量顯著降低.刁華杰等[8]研究也顯示，在29～35 ℃高循環(huán)溫度下，蛋雞血清中IgA 和IgM 含量顯著降低.這些均與本研究結(jié)果一致，說(shuō)明熱應(yīng)激可降低血清中免疫球蛋白的含量，機(jī)理可能為高溫環(huán)境下，下丘腦、垂體與腎上腺軸激活，提高了糖皮質(zhì)激素合成，T、B 淋巴細(xì)胞活性降低，從而抑制體液免疫[9].微生態(tài)制劑能激活機(jī)體免疫應(yīng)答，促進(jìn)免疫器官發(fā)育，提高淋巴細(xì)胞活性，增強(qiáng)機(jī)體免疫力和抗病性.呂遠(yuǎn)蓉等[10]在飼糧中添加不同比例復(fù)合微生態(tài)制劑，結(jié)果顯示4 周后試驗(yàn)組肉雞血清中IgA、IgG 含量顯著提高，IgM 含量無(wú)顯著變化.謝全喜等[11]研究表明，適量添加微生態(tài)制劑能夠提高肉雞血清中IgG 的含量.本研究結(jié)果顯示，在常溫和熱應(yīng)激狀態(tài)下，微生態(tài)制劑對(duì)肉雞血清中3 種免疫球蛋白含量的影響與以上研究結(jié)果相一致.姜豇等[12]研究表明，微生態(tài)制劑對(duì)斷奶仔豬血清中IgA、IgG 和IgM 含量均顯著提高，這與本研究結(jié)果存在差異，可能與微生態(tài)制劑的菌群組成及添加比例存在差異，或動(dòng)物種類、生理階段或者熱應(yīng)激強(qiáng)度、持續(xù)時(shí)間等不同有關(guān).

3.2 微生態(tài)制劑對(duì)熱應(yīng)激肉雞免疫器官指數(shù)的影響

胸腺、脾臟和法氏囊分別為中樞、外周和體液免疫的器官，發(fā)育狀況影響到免疫強(qiáng)度，其器官指數(shù)的升高表明機(jī)體免疫系統(tǒng)功能增強(qiáng)和成熟.有研究表明，家禽在熱應(yīng)激狀態(tài)下，糖皮質(zhì)激素合成增多，胸腺、脾臟和淋巴組織萎縮，免疫器官指數(shù)下降，免疫機(jī)能受到抑制[13].賀紹君等[14]通過(guò)在生長(zhǎng)后期給AA肉雞肌肉內(nèi)注射地塞米松，結(jié)果顯示脾臟、胸腺、法氏囊發(fā)生萎縮且組織結(jié)構(gòu)破壞，器官指數(shù)顯著降低.肖芳等[15]報(bào)道，隨熱應(yīng)激時(shí)間的延長(zhǎng)，免疫器官的發(fā)育被抑制，器官指數(shù)降低.鐘光等[16]研究結(jié)果不一致，顯示持續(xù)熱應(yīng)激14 d 后，黃羽肉雞脾臟免疫器官指數(shù)與對(duì)照組無(wú)顯著差異，這可能與肉雞品種不同有關(guān)，黃羽肉雞抗性較高，對(duì)熱應(yīng)激有一定耐受性.張菊等[17]研究發(fā)現(xiàn)，微生態(tài)制劑中的益生菌可刺激家禽免疫器官的生長(zhǎng)成熟.付麗等[18]研究顯示，飼糧中添加乳酸菌培養(yǎng)物，肉雞脾臟免疫器官指數(shù)顯著提高，而胸腺和法氏囊免疫器官指數(shù)無(wú)明顯變化，與本研究結(jié)果一致，表明微生態(tài)制劑可促進(jìn)肉雞免疫器官的發(fā)育，尤其脾臟更為明顯.此結(jié)果和尹艷軍等[4]報(bào)道不一致，這可能由于微生態(tài)制劑添加量不同對(duì)免疫器官發(fā)育的刺激效果有區(qū)別，且也由郭欣怡等[5】的研究得到了證實(shí).本研究結(jié)果表明，飼糧中添加微生態(tài)制劑對(duì)不同溫度環(huán)境下肉雞胸腺免疫器官指數(shù)的影響存在差異，這可能與溫度和日糧對(duì)肉雞胸腺免疫器官指數(shù)存在交互效應(yīng)有關(guān)，說(shuō)明微生態(tài)制劑能顯著緩解熱應(yīng)激對(duì)胸腺組織結(jié)構(gòu)的破壞.

3.3 微生態(tài)制劑對(duì)熱應(yīng)激肉雞腸道形態(tài)的影響

腸道黏膜形態(tài)與營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收能力相關(guān)，絨毛越高、隱窩越淺，表明養(yǎng)分吸收能力越強(qiáng).絨隱比反映空腸的功能狀態(tài)，比值變大，表明黏膜發(fā)育加快，吸收能力增強(qiáng)；比值變小，表明黏膜損傷，吸收能力受限[19].研究證實(shí)，熱應(yīng)激條件下糖皮質(zhì)激素阻礙腸道黏膜細(xì)胞增殖，造成上皮細(xì)胞完整性的損傷，從而改變腸道形態(tài)和結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致黏膜絨毛無(wú)法正常生長(zhǎng)[20].楊淑霞等[21]研究表明，熱應(yīng)激顯著降低肉雞空腸絨毛高度，提高隱窩深度，且日糧和溫度對(duì)絨毛高度的影響具有交互作用的趨勢(shì)，這與本研究結(jié)果一致.洪奇華等[22]在熱應(yīng)激肉雞日糧中添加益生菌，結(jié)果顯示空腸絨毛高度增加19.74%，絨隱比增加22.30%，隱窩深度無(wú)顯著變化，與本研究結(jié)果基本一致，說(shuō)明微生態(tài)制劑能夠改善肉雞空腸黏膜形態(tài).但常溫狀態(tài)下，本研究結(jié)果顯示日糧中添加微生態(tài)制劑對(duì)肉雞空腸絨毛高度、隱窩深度及兩者比值均無(wú)顯著影響，這種差異可能由于微生態(tài)制劑主要起到彌補(bǔ)肉雞空腸黏膜結(jié)構(gòu)損傷的作用，而當(dāng)黏膜結(jié)構(gòu)完整時(shí)作用不明顯，或可能與微生態(tài)制劑添加量較低有關(guān)，導(dǎo)致試驗(yàn)效果不顯著，還需進(jìn)一步試驗(yàn)證實(shí).

4 結(jié)論

在本試驗(yàn)條件下，熱應(yīng)激顯著降低35～49 日齡817 肉雞血清中免疫球蛋白含量，抑制免疫器官的生長(zhǎng)發(fā)育，損傷空腸形態(tài)和細(xì)胞完整性.飼喂微生態(tài)制劑可一定程度上緩解熱應(yīng)激的不利影響，尤其以胸腺器官和空腸絨毛的發(fā)育較為顯著.