代 飛 代惠娟李沛柏 張 權(quán) 白茂軍 陳恩發(fā)
(1貴州省煙草公司安順市公司,貴州安順 561000;2河北中煙工業(yè)有限責任公司,河北石家莊 050000;3貴州省農(nóng)業(yè)科學院植物保護研究所,貴州貴陽 550009)
煙草根結(jié)線蟲病作為世界性病害之一,在世界各煙區(qū)均有分布。煙草根結(jié)線蟲主要寄生于烤煙根系,造成根系吸收養(yǎng)分受阻,導致煙株葉片葉尖周圍產(chǎn)生焦尖焦邊,降低煙株對其他病害的抵抗力,形成復合感染,直至煙株死亡,降低煙草產(chǎn)量和質(zhì)量,對煙區(qū)種煙農(nóng)戶造成了重大經(jīng)濟損失,輕的損失30%左右,重的造成絕收。近年來,煙草根結(jié)線蟲病已逐漸上升為貴州煙區(qū)的主要病害之一。目前,在煙草根結(jié)線蟲病防控研究方面,大多以直接在田間采用化學藥劑防治的方式開展試驗,這些化學藥劑中有許多是高毒性、高殘留農(nóng)藥,施用后會對煙地及環(huán)境造成嚴重污染,長此以往,還會對人體產(chǎn)生負面影響[1-5]。在煙草根結(jié)線蟲病防治方面,目前雖然也有報道,但各種處理方式很不統(tǒng)一,毒力測定也主要是對田間防治的一種印證。本研究針對安順市實際,先在室內(nèi)對煙草根結(jié)線蟲病防控藥劑進行測定與篩選,主要目的是事前對高污染、高殘留、衰減期過長、對環(huán)境不友好的農(nóng)藥進行篩選,遴選適宜的藥劑用于病蟲害防治,避免此類污染再次發(fā)生,為大田用藥提供參考依據(jù)。
供試線蟲為煙草根結(jié)線蟲,從安順市西秀區(qū)試驗地云煙85煙株根結(jié)樣品中分離而得。
供試藥劑有90%阿維菌素原粉(華北制藥愛諾股份有限公司生產(chǎn))、25%甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽(華北制藥愛諾股份有限公司生產(chǎn))、81.7%噻唑膦原油(壽光市申達化學工業(yè)有限公司生產(chǎn))、90%丁硫克百威原油(冀州市凱明農(nóng)藥有限公司提供)、滅線磷(德國Dr公司生產(chǎn))、硫線磷(FMC公司提供)。
試驗藥劑母液的配制方法:用90份99.5%丙酮溶解2份原藥,然后加8份Tween-20乳化。將25%甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽、90%阿維菌素原粉、滅線磷、硫線磷分別配制成 25、50、100、200、400 mg/L 梯度,81.7%噻唑膦原油配制成 10、20、40、80、160 mg/L梯度,90%丁硫克百威原油配制成 100、200、400、800、1 600 mg/L梯度,備用。
1.2.1 根結(jié)線蟲二齡幼蟲懸浮液的制備。取有大量根結(jié)的烤煙根系,用自來水輕輕沖洗干凈,將病根剪成5 cm小段,在1%次氯酸鈉溶液中漂洗約4 min,用竹片輕取煙根上表面組織,利用200目與500目線蟲篩收集線蟲卵,放入直徑8 cm的小培養(yǎng)皿內(nèi),加入少量無菌水,在25℃恒溫箱中孵化3~4 d,收集二齡幼蟲,并加入無菌水將其配制成濃度500條/mL左右的懸浮液備用。
1.2.2 室內(nèi)毒力測定方法。取96孔細胞培養(yǎng)板,每孔加入0.15 mL線蟲懸浮液,每列為1個濃度處理,重復3次,使25%甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽、90%阿維菌素原粉、滅線磷、硫線磷在孔板中的濃度均分別為 25、50、100、200、400 mg/L,81.7%噻唑膦原油濃度分別為 10、20、40、80、160 mg/L,90%丁硫克百威濃度分別為 100、200、400、800、1 600 mg/L。
根結(jié)線蟲的死亡可從線蟲形態(tài)做出判斷,死亡的線蟲身體僵直或有呈角度的彎折,未死亡的根結(jié)線蟲蟲體有呈弧度的彎折。若從根結(jié)線蟲的形態(tài)無法明確判斷其死亡與否,48 h后可采用針刺法判斷。計算死亡率、校正死亡率、LC50及LC95,用DPS軟件計算出藥劑的毒力回歸方程、LC50和LC95置信限,用SPSS軟件計算差異顯著性[6-8]。計算公式如下:
死亡率(%)=死亡二齡線蟲數(shù)/處理二齡線蟲數(shù)×100;
校正死亡率(%)=(處理線蟲死亡率-對照線蟲死亡率)/(1-對照線蟲死亡率)×100。
由表1可知,無論是24 h后還是48 h后,煙草根結(jié)線蟲二齡幼蟲的校正死亡率均呈現(xiàn)出一定的規(guī)律,即隨著每種農(nóng)藥濃度的增加,校正死亡率均呈上升趨勢;不同濃度梯度處理間存在差距,最大濃度與最小濃度之間差異極顯著。24 h校正死亡率與48 h校正死亡率存在差異,總體表現(xiàn)為48 h校正死亡率略高于24 h校正死亡率,但基本無顯著性差異,其中25%甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽和90%阿維菌素原粉出現(xiàn)48 h后25 mg/L和50 mg/L濃度的校正死亡率較24 h低的現(xiàn)象,原因是根結(jié)線蟲假死,于48 h后復蘇。從6種藥劑對煙草根結(jié)線蟲二齡幼蟲的抑制作用分析,81.7%噻唑膦原油以較低的濃度就能較好地抑制煙草根結(jié)線蟲二齡幼蟲,而90%丁硫克百威原油需要很大的濃度才能抑制,總體抑制活力大小表現(xiàn)為81.7%噻唑膦原油>90%阿維菌素原粉>25%甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽>硫線磷>滅線磷>90%丁硫克百威原油。因此,用量少、成本低、效果佳、田間易操作成為首選方案之一。
表1 6種藥劑不同濃度對煙草根結(jié)線蟲二齡幼蟲的影響
由表2可知,6種藥劑對根結(jié)線蟲二齡幼蟲均有一定的毒力作用,藥后48 h對二齡幼蟲的毒力有所提高。對6種藥劑對煙草根結(jié)線蟲二齡幼蟲的毒力顯著性分析表明,各處理間均存在差異,81.7%噻唑膦原油24 h LC50為29.13 mg/L,對煙草根結(jié)線蟲二齡幼蟲毒力最強;90%阿維菌素原粉、25%甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽及硫線磷對煙草根結(jié)線蟲二齡幼蟲的毒力低于81.7%噻唑膦原油,優(yōu)于其他供試藥劑,三者LC50相差甚微,未達顯著水平;滅線磷及90%丁硫克百威原油毒力相對較低。24 h LC95毒力略有差異,但總體趨勢基本一致。81.7%噻唑膦原油的48 h LC50為21.34 mg/L,與24 h有少許差別,對煙草根結(jié)線蟲二齡幼蟲毒力最強;48 h LC95毒力雖然略有差異,但是總體趨勢也基本與24 h LC50一致。從各處理的毒力分析得出,6種農(nóng)藥處理的毒力大小排序為81.7%噻唑膦原油>90%阿維菌素原粉>25%甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽>硫線磷>滅線磷>90%丁硫克百威原油。
表2 6種藥劑對根結(jié)線蟲二齡幼蟲毒力測定運算結(jié)果分析
(1)通過對6種農(nóng)藥不同濃度處理對煙草根結(jié)線蟲二齡幼蟲的室內(nèi)毒力測定,各個藥劑對煙草根結(jié)線蟲二齡幼蟲均有抑制作用,與張勝博等[9]、王 軍等[10]、黃 闊等[11]的研究相類似,并隨著每種農(nóng)藥濃度增加、時間的延長,煙草根結(jié)線蟲二齡幼蟲校正死亡率均呈現(xiàn)上升趨勢,與張映杰等[12]、王 軍等[13]、孔凡玉等[14]的結(jié)果略有不同,但24 h、48 h的校正死亡率之間未達顯著水平。6種農(nóng)藥對煙草根結(jié)線蟲二齡幼蟲抑制活力大小表現(xiàn)為81.7%噻唑膦原油>90%阿維菌素原粉>25%甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽>硫線磷>滅線磷>90%丁硫克百威原油。
(2)6種藥劑對煙草根結(jié)線蟲二齡幼蟲的毒力測定結(jié)果表明,部分藥劑的毒力在濃度及時段上達顯著或極顯著差異,總體毒力無顯著差異,其大小排序為81.7%噻唑膦原油>90%阿維菌素原粉>25%甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽>硫線磷>滅線磷>90%丁硫克百威原油。
(3)根據(jù)6種農(nóng)藥對煙草根結(jié)線蟲二齡幼蟲的抑制效果及毒力測定結(jié)果,結(jié)合成本、效應、安全等因素[15-17],推薦表現(xiàn)較好的81.7%噻唑膦原油、90%阿維菌素原粉、25%甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽用于煙田繼續(xù)試驗。建議在篩選出的農(nóng)藥中,輪換使用或復合使用,使其達到經(jīng)濟、安全的目的。
(4)由于煙草根結(jié)線蟲選取樣品材料中未進行種類詳細鑒別,可能存在一定誤差,測定結(jié)果僅作為農(nóng)藥使用的參考[18-20]。