不同消毒劑配方處理豆天蛾卵對(duì)其生長(zhǎng)發(fā)育的影響

李曉峰 郭明明 廖懷建 鄧盼 李大維 李俊領(lǐng) 樊繼偉 陳鳳

摘要 為探究人工養(yǎng)殖豆天蛾過程中卵的最佳消毒時(shí)長(zhǎng)及篩選最優(yōu)消毒劑配方，首先以38%鹽酸+37%甲醛+水（0.5∶0.5∶10，V/V）為消毒劑，測(cè)定不同時(shí)長(zhǎng)消毒處理對(duì)豆天蛾卵生長(zhǎng)發(fā)育的影響，獲得最佳消毒時(shí)長(zhǎng);再以此為基礎(chǔ)，探究不同消毒劑配方（以下簡(jiǎn)稱配方）處理對(duì)豆天蛾卵孵化率、25日齡幼蟲存活率、體重和體長(zhǎng)等指標(biāo)的影響。結(jié)果表明，消毒30 min的豆天蛾卵孵化率（80.00%）、25日齡幼蟲的存活率（59.72%）、體長(zhǎng)（8.02 cm）及體重（8.96 g）最高，且顯著高于對(duì)照。配方20（37%甲醛∶31%雙氧水∶水=0.5∶0.5∶10，V/V）處理后的卵孵化率（86.67%）、25日齡幼蟲存活率（66.67%）、體長(zhǎng)（8.88 cm）和體重（10.70 g）優(yōu)于其他配方，且顯著高于對(duì)照，表明配方20對(duì)豆天蛾卵的消毒效果最好，為本試驗(yàn)篩選出的最優(yōu)配方。此結(jié)果為人工養(yǎng)殖豆天蛾提供了一定的理論基礎(chǔ)和技術(shù)支持。

關(guān)鍵詞 豆天蛾卵; 消毒劑配方; 生長(zhǎng)發(fā)育; 優(yōu)選

中圖分類號(hào)： S433.4

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼： A

DOI： 10.16688/j.zwbh.2020686

Abstract The purpose of this study was to investigate the appropriate disinfection duration of the eggs of Clanis bilineata tsingtauica and to screen the best formula from different disinfectants. The effects of egg-soaking for different time with 38% hydrochloric acid mixed with 37% formaldehyde and water （volume ratio： 0.5∶0.5∶10） on the growth and development of eggs were determined to obtain the best disinfectant time lengths. On this basis， the hatching rate， survival rate， body weight and body length of 25-day-old larvae were explored after treatment of eggs with different disinfectant formulas （hereinafter referred to as formula）. The results showed that the egg hatching rate （80.00%）， the survival rate （59.72%）， body length （8.02 cm） and body weight （8.96 g） of 25-day-old larvae were significantly higher than that of the control group when the eggs were sterilized for 30 minutes. The hatching rate， and the survival rate and body length of 25-day-old larvae were 86.67%， 66.67% and 8.88 cm， respectively， when using formula 20 （37% formaldehyde∶31% hydrogen peroxide∶water=0.5∶0.5∶10，V/V） to disinfect for 30 minutes， which were significantly higher than that of the control group. The results indicated that the formula 20 was the best formula among all the formulas tested and the optimum for disinfectant of C.bilineata tsingtauica eggs. This study provided certain theoretical basis and technical support for artificial breeding of C.bilineata tsingtauica.

Key words eggs of Clanis bilineata tsingtauica; disinfectant formula; growth and development; screening

豆天蛾Clanis bilineata tsingtauica Walker屬鱗翅目天蛾科豆天蛾屬，幼蟲俗稱為豆丹、豆蟲，主要分布于我國(guó)的黃淮流域、長(zhǎng)江流域和華南地區(qū)[1]。其寄主植物主要有大豆、葛藤、洋槐等。豆天蛾是大豆生產(chǎn)上的暴發(fā)性害蟲，其幼蟲在5齡進(jìn)入暴食期，輕者將葉片吃成缺刻，重者可將豆株吃成光稈，使其不能結(jié)莢，嚴(yán)重影響大豆產(chǎn)量[2]。

豆丹因其蛋白質(zhì)含量高，富含必需氨基酸及脂肪酸，加之口感獨(dú)特[35]，具有重要的食用價(jià)值和醫(yī)學(xué)價(jià)值[6]。因而豆天蛾已從害蟲轉(zhuǎn)變?yōu)橹匾慕?jīng)濟(jì)昆蟲，逐漸向著產(chǎn)業(yè)化發(fā)展[78]。在江蘇蘇北地區(qū)，豆丹的市場(chǎng)需求與日俱增，企業(yè)和當(dāng)?shù)仞B(yǎng)殖戶已開始嘗試人工養(yǎng)殖，擴(kuò)大豆丹供給規(guī)模以填補(bǔ)市場(chǎng)供應(yīng)缺口。

豆丹大規(guī)模人工飼養(yǎng)過程中通過人工干預(yù)其交配、產(chǎn)卵、孵化及滯育等各個(gè)生長(zhǎng)環(huán)節(jié)以及生長(zhǎng)環(huán)境，使豆天蛾年世代數(shù)增加，一年內(nèi)單位土地面積上豆丹產(chǎn)量提高。但目前技術(shù)尚不成熟，各環(huán)節(jié)僅憑經(jīng)驗(yàn)進(jìn)行，尚未形成標(biāo)準(zhǔn)的、可參考的技術(shù)規(guī)范。如，養(yǎng)殖戶憑經(jīng)驗(yàn)在豆天蛾卵孵化前使用消毒劑對(duì)其進(jìn)行浸泡消毒，以去除卵表面的有害微生物，提高卵的孵化率及孵化后幼蟲的存活率。但浸泡時(shí)長(zhǎng)、使用消毒劑種類各不相同，因而各養(yǎng)殖戶所生產(chǎn)豆丹的品質(zhì)高低不一，給豆天蛾市場(chǎng)的良好運(yùn)行帶來(lái)隱患。

目前針對(duì)豆天蛾的相關(guān)研究主要有營(yíng)養(yǎng)價(jià)值[910]和生物學(xué)特性[1113]等，而關(guān)于人工飼養(yǎng)技術(shù)方面報(bào)道較少。本研究從人工養(yǎng)殖豆天蛾卵的處理環(huán)節(jié)展開，通過記錄、測(cè)量與對(duì)比豆天蛾卵的孵化率、25日齡幼蟲存活數(shù)、存活率、體長(zhǎng)、體重等參數(shù)，探究了豆天蛾卵經(jīng)不同消毒劑處理對(duì)其及幼蟲生長(zhǎng)發(fā)育的影響，從而篩選出可用于實(shí)際養(yǎng)殖的消毒劑。為完善和規(guī)范豆天蛾人工飼養(yǎng)提供了產(chǎn)品支持和技術(shù)保障。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 供試蟲源

本試驗(yàn)所用的豆天蛾卵均采自江蘇省連云港市云臺(tái)農(nóng)場(chǎng)。選擇當(dāng)日產(chǎn)的、外形圓潤(rùn)飽滿、顏色鮮艷的豆天蛾卵，帶回實(shí)驗(yàn)室放入25 cm×15 cm×15 cm帶蓋的塑料盒中，而后置于（25±1）℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，待用。

1.1.2 供試試劑

試驗(yàn)所用試劑主要有：鹽酸（質(zhì)量分?jǐn)?shù)38%），雙氧水（質(zhì)量分?jǐn)?shù)31%），84消毒液，甲醛溶液（質(zhì)量分?jǐn)?shù)37%），所有試劑均購(gòu)自北京百靈威科技有限公司。將試劑于4℃冰箱保存，備用。

1.1.3 供試耗材與設(shè)備

試驗(yàn)所用耗材主要為長(zhǎng)25 cm、寬20 cm、孔徑為0.01 mm的塑料網(wǎng)袋（江蘇淼宇環(huán)保科技有限公司）;所用設(shè)備主要為電熱恒溫干燥箱（康恒儀器有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 最佳消毒時(shí)長(zhǎng)的篩選

采用連云港當(dāng)?shù)馗鞫沟ゐB(yǎng)殖基地常用的消毒方法。將鹽酸溶液與甲醛溶液等體積混合后與水按1∶10的體積比稀釋，制成消毒劑。取恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)的5日齡卵，按30粒一組放入一個(gè)塑料網(wǎng)袋中，將網(wǎng)口扎緊，防止蟲卵灑落。消毒時(shí)長(zhǎng)設(shè)10、20、30、40、50 min共5個(gè)梯度。在容積500 mL燒杯中倒入400 mL消毒液，將裝有豆天蛾卵的小網(wǎng)袋浸入，每處理3個(gè)重復(fù)， 每個(gè)網(wǎng)袋為1個(gè)重復(fù)。處理完畢后立即將網(wǎng)袋用清水沖凈，以只用清水沖洗的3個(gè)網(wǎng)袋為對(duì)照組，用濾紙輕輕擦拭后放在實(shí)驗(yàn)臺(tái)陰干。

在大豆田塊搭建防蟲大棚，防止其他昆蟲對(duì)試驗(yàn)的干擾，將大豆田分為若干小區(qū)，每小區(qū)長(zhǎng)（南北方向）3 m，寬（東西方向）1 m，將各小區(qū)整齊排列，南北方向每排6個(gè)小區(qū)，東西方向每排3個(gè)小區(qū)，共18個(gè)小區(qū)。小區(qū)之間間隔0.5 m，并用紗網(wǎng)隔開，防止豆天蛾幼蟲逃逸。5個(gè)處理組和對(duì)照組均設(shè)3次重復(fù)，每個(gè)小網(wǎng)袋為1次重復(fù)，共18個(gè)小網(wǎng)袋，編號(hào)完成后將每個(gè)小網(wǎng)袋隨機(jī)套在1個(gè)試驗(yàn)小區(qū)的大豆植株上。每日9：00和17：00觀察各網(wǎng)袋內(nèi)卵發(fā)育情況。卵孵化后繼續(xù)保持套袋狀態(tài)，防止螞蟻等昆蟲對(duì)初孵幼蟲的影響，待幼蟲5日齡時(shí)解開網(wǎng)袋，使幼蟲可在小區(qū)內(nèi)大豆植株間自由轉(zhuǎn)移、取食。記錄25日齡幼蟲的存活率。存活率=豆天蛾幼蟲存活數(shù)/豆天蛾卵孵化數(shù)×100%;此外，測(cè)量并記錄各處理及對(duì)照的25日齡豆天蛾幼蟲的體長(zhǎng)及體重，從而比較和篩選豆天蛾卵的最佳消毒時(shí)長(zhǎng)。

1.2.2 消毒劑配方的組分及稀釋比例

將4種消毒液?jiǎn)为?dú)或兩兩等體積混配，以蒸餾水為溶劑分別按1∶5、1∶10、1∶20的體積比稀釋，從而形成不同的消毒劑配方。各配方成分及稀釋比如表1所示。

1.2.3 各消毒劑配方消毒效果的比較

方法如1.2.1，每小區(qū)長(zhǎng)（南北方向）3 m，寬（東西方向）1 m，將各小區(qū)整齊排列，南北方向每排11個(gè)小區(qū)，東西方向每排6個(gè)小區(qū)，共66個(gè)小區(qū)。小區(qū)之間間隔0.5 m，并用紗網(wǎng)隔開，防止豆天蛾幼蟲逃逸。在1.2.1中得到的最佳消毒時(shí)長(zhǎng)的基礎(chǔ)上，采用21種配方對(duì)豆天蛾卵進(jìn)行消毒。處理組和對(duì)照組均設(shè)3次重復(fù)，每個(gè)小網(wǎng)袋（30粒卵）為1次重復(fù)，共66個(gè)小網(wǎng)袋，編號(hào)完成后將每個(gè)小網(wǎng)袋隨機(jī)套在1個(gè)試驗(yàn)小區(qū)的大豆植株上。比較經(jīng)不同配方處理后豆天蛾卵的孵化率，25日齡豆天蛾幼蟲存活率、體長(zhǎng)及體重，從而對(duì)21種配方進(jìn)行優(yōu)選。

1.2.4 數(shù)據(jù)處理

本試驗(yàn)參數(shù)主要有孵化率、存活率、體長(zhǎng)和體重。所有數(shù)據(jù)均由Excel 2013和SPSS 17.0處理。主要參數(shù)間的差異性采用One-way ANOVA方差分析;其中，孵化率和存活率間的比較首先要進(jìn)行反正弦平方根轉(zhuǎn)換，然后采用Duncan氏新復(fù)極差法進(jìn)行不同處理之間的差異顯著性檢驗(yàn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 豆天蛾卵的最佳消毒時(shí)長(zhǎng)

2.1.1 消毒時(shí)長(zhǎng)對(duì)豆天蛾卵發(fā)育的影響

用消毒劑處理不同時(shí)長(zhǎng)后豆天蛾卵的孵化數(shù)、孵化率及25日齡幼蟲存活數(shù)、存活率如表2所示。處理30 min的豆天蛾卵孵化率最高，達(dá)80.00%，其次分別為處理10 min和20 min，孵化率分別達(dá)到77.78%和75.56%。此3組處理的孵化率均顯著高于對(duì)照（53.33%）孵化率（P<0.05）。而其他處理和對(duì)照均無(wú)顯著差異（P>0.05）。卵處理30 min， 25日齡幼蟲存活率最高，達(dá)到59.72%，其次分別為處理40 min和對(duì)照，分別為59.32%和43.75%。但因處理40 min卵的孵化率低，因此25日齡幼蟲存活數(shù)比處理30 min少8頭。

2.1.2 處理時(shí)長(zhǎng)對(duì)幼蟲體長(zhǎng)及體重的影響

在消毒劑中浸泡不同時(shí)長(zhǎng)對(duì)豆天蛾25日齡幼蟲體長(zhǎng)及體重的影響如表3所示。經(jīng)不同時(shí)長(zhǎng)處理后豆天蛾25日齡幼蟲的體長(zhǎng)及體重表現(xiàn)較為一致。處理30 min的體長(zhǎng)最大，為8.02 cm，其次分別為處理40 min和10 min，體長(zhǎng)分別為7.74 cm和7.66 cm;此3組處理的25日齡幼蟲體長(zhǎng)均顯著大于對(duì)照和50 min處理（P<0.05）。處理30 min的25日齡幼蟲體重最大，為8.96 g，其次為處理40 min，體重為8.68 g。30 min處理的體重大于對(duì)照以及10、20 min和50 min處理（P<0.05）。處理20 min的25日齡幼蟲體長(zhǎng)和體重分別為7.38 cm和7.66 g，與對(duì)照的體長(zhǎng)和體重差異不顯著（P>0.05）。處理50 min的25日齡幼蟲體長(zhǎng)和體重分別為5.34 cm和3.84 g，均顯著小于對(duì)照（P<0.05）。

2.2 不同消毒劑配方處理卵對(duì)豆天蛾卵發(fā)育和25日齡幼蟲存活的影響

不同配方消毒處理對(duì)豆天蛾卵孵化及25日齡幼蟲存活的影響如表4所示。每種配方均處理90粒豆天蛾卵，25日齡幼蟲存活數(shù)最高的處理為配方20，達(dá)到52頭。其次為配方7、9、11、17，25日齡幼蟲存活數(shù)相同，均為44頭。上述5種配方中，25日齡幼蟲存活數(shù)由卵的孵化率和25日齡幼蟲存活率決定。配方7和20處理后的豆天蛾卵孵化率最高，均達(dá)到86.67%，其次分別為配方9、19和12，卵的孵化率分別為81.11%、74.44%和73.33%。此5種配方處理后的卵孵化率相互之間無(wú)顯著差異（P>0.05），但均顯著高于對(duì)照的53.33%（P<0.05）。但配方12和19處理后的豆天蛾卵所孵化的幼蟲到25日齡時(shí)存活率僅為53.03%和29.85%，故最終25日齡幼蟲存活數(shù)僅為35頭和20頭。經(jīng)配方5處理后的豆天蛾卵所孵化幼蟲的25日齡存活率最高，達(dá)75.68%;其次分別為配方14和11，25日齡幼蟲存活率分別為71.18%和70.97%。但因配方5和14處理的豆天蛾卵孵化率低，導(dǎo)致25日齡幼蟲存活數(shù)較少，僅分別為28頭和42頭。因此，結(jié)合生產(chǎn)實(shí)際，按照25日齡幼蟲存活數(shù)進(jìn)行比較，配方7、9、11、17、20為初篩消毒劑較佳配方。

2.3 不同消毒劑配方處理卵對(duì)幼蟲體長(zhǎng)和體重的影響

21種配方處理卵后，豆天蛾25日齡幼蟲體長(zhǎng)和體重如表5所示。由2.2篩選的配方7、9、11、17、20中，配方20處理后的卵發(fā)育為25日齡幼蟲體長(zhǎng)最長(zhǎng)，達(dá)8.88 cm，其次分別為配方17、9、11和7，體長(zhǎng)分別為8.56、8.42、8.14 cm和8.08 cm;另外，配方19和21處理后幼蟲的體長(zhǎng)也較長(zhǎng)，分別為8.52 cm和8.38 cm。這7種配方處理后的25日齡幼蟲體長(zhǎng)顯著大于對(duì)照的6.78 cm （P<0.05），不同配方處理后的卵發(fā)育為25日齡幼蟲體重的結(jié)果與體長(zhǎng)表現(xiàn)基本一致。體重最重的處理為配方20，達(dá)到10.70 g，其次為配方17、9、11和7，體重分別為10.24、9.38、9.02 g和8.66 g;另外，配方19和21處理后幼蟲的體重均為9.64 g。這7種配方均顯著大于對(duì)照的6.50 g（P<0.05）。綜上，經(jīng)配方20處理后的卵，其孵化率及25日齡幼蟲的存活數(shù)、體長(zhǎng)和體重均達(dá)到最大值，表明配方20對(duì)豆天蛾卵的消毒效果最好，故配方20為本試驗(yàn)篩選的最優(yōu)消毒劑配方;其次為配方17。

3 討論

本文以豆天蛾卵為研究對(duì)象，首先探究了豆天蛾卵經(jīng)消毒劑不同時(shí)長(zhǎng)浸泡消毒后，其孵化率、25日齡幼蟲存活數(shù)、存活率、體長(zhǎng)和體重等參數(shù)的變化，從而確定最佳消毒時(shí)長(zhǎng)。以此為基礎(chǔ)，探究了21種配方處理豆天蛾卵對(duì)卵的孵化率、25日齡幼蟲存活數(shù)、存活率、體長(zhǎng)和體重等參數(shù)的影響，從而對(duì)21種配方進(jìn)行優(yōu)選。

本試驗(yàn)表明，蟲卵消毒時(shí)長(zhǎng)過長(zhǎng)或過短均不能起到理想的消毒效果。消毒時(shí)長(zhǎng)為10 min和20 min時(shí)，卵孵化率高于對(duì)照，但因未消毒完全導(dǎo)致幼蟲生長(zhǎng)發(fā)育階段存活率低;消毒時(shí)間為40 min和50 min時(shí)，由于消毒時(shí)間過長(zhǎng)，可能使卵活性受到影響，直接表現(xiàn)為孵化率降低。尤其是消毒時(shí)長(zhǎng)為50 min時(shí)，卵孵化率只有34.44%，25日齡幼蟲存活率僅為35.48%，均低于其他處理和對(duì)照。此現(xiàn)象在25日齡幼蟲的體長(zhǎng)和體重兩個(gè)參數(shù)上表現(xiàn)得更為明顯。消毒30 min時(shí)，幼蟲體長(zhǎng)和體重達(dá)到最大。而消毒時(shí)間低于30 min幼蟲體長(zhǎng)和體重雖然大于對(duì)照，但小于30 min的參數(shù)值。而消毒時(shí)間過長(zhǎng)（50 min）則由于卵的活性受影響，幼蟲的生長(zhǎng)發(fā)育也隨之變?nèi)?，?dǎo)致體長(zhǎng)和體重均顯著低于對(duì)照。

在消毒30 min的基礎(chǔ)上，本試驗(yàn)篩選出消毒效果最好的為配方20（37%甲醛∶31%雙氧水∶水=0.5∶0.5∶10，V/V），其次為配方17（37%甲醛∶38%鹽酸∶水=0.5∶0.5∶10，V/V）。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，單一成分的甲醛或雙氧水，在稀釋比為1∶10時(shí)，消毒效果并不明顯，這說明甲醛和雙氧水混配對(duì)豆天蛾卵消毒效果有一定的促進(jìn)作用，但是加成作用還是增效作用需要繼續(xù)探究。配方19成分與20相同，但稀釋比為1∶5，在各參數(shù)上的表現(xiàn)均低于配方20，這說明合理的消毒劑配比濃度對(duì)試驗(yàn)結(jié)果影響較大，下一步可在此基礎(chǔ)上對(duì)稀釋比進(jìn)行細(xì)分，從而對(duì)消毒劑進(jìn)行進(jìn)一步的優(yōu)化。

馮雨艷等[1]的研究表明，當(dāng)豆天蛾幼蟲處于恒溫、恒濕、食物充足的條件下，卵和幼蟲死亡率顯著小于自然條件下的死亡率。因而在豆丹大規(guī)模人工飼養(yǎng)過程中，應(yīng)盡量在恒溫、恒濕的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)豆天蛾卵，對(duì)初齡幼蟲應(yīng)飼喂新鮮豆葉，根據(jù)天氣條件及時(shí)調(diào)整大棚內(nèi)溫濕度，防止氣候條件突變對(duì)豆丹產(chǎn)量造成影響。同時(shí)，要通過黑光燈誘捕、信息素誘捕等措施及時(shí)控制大棚內(nèi)斜紋夜蛾等害蟲的發(fā)生，保證初齡幼蟲的正常生長(zhǎng)。

本研究通過豆天蛾卵孵化率、25日齡幼蟲存活率等參數(shù)進(jìn)行比較，對(duì)消毒劑配方進(jìn)行優(yōu)選，為豆丹的大規(guī)模人工飼養(yǎng)提供了一定的理論基礎(chǔ)和技術(shù)支持。本試驗(yàn)是在自然條件下進(jìn)行的，導(dǎo)致豆天蛾自然條件下孵化率低、幼蟲死亡率較高的因素尚不明確，故下一步可著手探究豆天蛾卵表面的致病微生物的菌落構(gòu)成，了解其致病機(jī)理，尋找防治致病病原菌的有效方法;另外，還應(yīng)進(jìn)行自然條件下溫度、濕度和光照等非生物因素的單一或復(fù)合影響的研究，從而可更有針對(duì)性地篩選消毒劑配方。

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（責(zé)任編輯：楊明麗）