輸血前Rh血型抗原與不規(guī)則抗體的檢測

趙學(xué)禮 杜 喆

ABO血型系統(tǒng)是輸血領(lǐng)域最廣泛也是最重要的血型系統(tǒng)，Rh血型系統(tǒng)次之，但Rh血型系統(tǒng)卻是最復(fù)雜的血型系統(tǒng)，具有抗原多態(tài)性和免疫原性[1-2]。Rh血型系統(tǒng)有50個(gè)抗原，目前研究發(fā)現(xiàn)與輸血密切相關(guān)的主要有5種，分別是D、C、c、E、e等抗原，這5種抗原組合成18種不同的Rh血型分型。國家標(biāo)準(zhǔn)嚴(yán)格規(guī)定Rh系統(tǒng)的D抗原作為輸血前常規(guī)檢查，基本避免了Rh（D）陰性的患者輸Rh（D）陽性的血，因?yàn)镈抗原同型輸血原則，所以近年來關(guān)于抗體D的報(bào)道逐漸減少[3]。由于Rh血型系統(tǒng)的C、c、E、e等抗原目前大多數(shù)采取隨機(jī)輸血原則，導(dǎo)致抗C、抗c、抗E、抗e等抗體產(chǎn)生的報(bào)道時(shí)有發(fā)生，因此臨床輸血Rh血型抗原的檢測和同型輸注應(yīng)該引起重視以保證輸血安全。為了解Rh血型抗原檢測在輸血中的重要性，選擇3200例輸血和備血的住院患者進(jìn)行Rh抗原檢測，另外對45例不規(guī)則抗體篩查試驗(yàn)陽性的輸血患者進(jìn)行不規(guī)則抗體鑒定。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集本醫(yī)院2018年1月-2019年10月期間輸血和備血的住院患者3200例，進(jìn)行Rh抗原D、C、c、E、e的檢測，年齡3～82歲，平均年齡（43.56±11.5）歲。另外收集本醫(yī)院2018年1月-2020年7月不規(guī)則抗體篩查陽性的輸血患者45例，進(jìn)行不規(guī)則抗體鑒定，年齡4～78歲，平均年齡（46.7±12.3）歲。

1.2 納入和排除標(biāo)準(zhǔn) ①納入標(biāo)準(zhǔn)：患者經(jīng)檢查確診，均需要備血或具有臨床輸血治療的指征；患者臨床資料完整；患者精神狀態(tài)正常，能夠配合本研究；患者知情同意并簽署知情同意書。②排除標(biāo)準(zhǔn)：門診患者或患者臨床資料不完整；患者2周內(nèi)服用免疫抑制劑、激素類藥物影響檢查結(jié)果的判斷；凝血功能障礙及伴發(fā)其他血液系統(tǒng)疾病的患者；嚴(yán)重心、肝、腎功能不全患者及惡性腫瘤患者。

1.3 試劑與儀器 本研究使用試劑和儀器包括不規(guī)則抗體鑒定細(xì)胞（上海血液生物醫(yī)藥責(zé)任有限公司），Rh血型分型微柱凝膠卡（江陰力博生物技術(shù)有限公司），抗人球蛋白檢測卡（長春博訊生物技術(shù)有限公司），TD—3A型血型血清學(xué)用離心機(jī)（長春博研科學(xué)儀器有限責(zé)任公司），F(xiàn)YQ型免疫微柱孵育器（長春博研科學(xué)儀器有限責(zé)任公司）等。

1.4 方法

1.4.1 Rh抗原檢測 ①紅細(xì)胞懸液的制備：將待檢者的血液樣本按3000 rpm、2 min離心制備成紅細(xì)胞樣本，用加樣槍在壓積紅細(xì)胞中層量取10 μL壓積紅細(xì)胞加入至1 mL生理鹽水中，配置成0.8%～1%濃度的紅細(xì)胞懸液，②取Rh血型分型檢測卡（柱凝集法）一卡，進(jìn)行標(biāo)記，1～6孔中加入待檢者0.8%～1%紅細(xì)胞懸液50 μL，將微柱凝膠卡垂直豎立，輕敲混勻加樣槽中的紅細(xì)胞懸液。③即刻使用專用血清學(xué)離心機(jī)離心5 min。④離心結(jié)束后，取出觀察判定結(jié)果，登記結(jié)果。

1.4.2 不規(guī)則抗體鑒定 將譜細(xì)胞（10套鑒定細(xì)胞）分別配置成濃度為0.8%～1%的紅細(xì)胞懸液；抗人球蛋白檢測卡的十個(gè)凝膠微管標(biāo)號，每個(gè)微管用加樣槍加50 μL配置的紅細(xì)胞懸液，再將分離好的待檢者血漿加入1到10孔微管，每孔50 μL；微柱凝膠卡放入免疫微柱孵育器孵育15 min，即刻使用專用血清學(xué)離心機(jī)離心5 min，讀結(jié)果，對照紅細(xì)胞血型抗體鑒定細(xì)胞反應(yīng)格局表判定抗體。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)，所得計(jì)數(shù)資料[率（%）]做統(tǒng)計(jì)描述。

2 結(jié) 果

2.1 Rh血型系統(tǒng)D、C、c、E、e抗原表型分布情況分析 用血清學(xué)方法對3200例樣本進(jìn)行Rh血型系統(tǒng)D、C、c、E、e抗原檢測。Rh血型CcEe抗原陽性率：C抗原陽性率90.00%，c抗原陽性率55.19%，E抗原陽性率46.19%，e抗原陽性率93%。見表1。

表1 3200例樣本Rh血型系統(tǒng)抗原分布 例(%)

2.2 不規(guī)則抗體鑒定結(jié)果分析 對45例不規(guī)則抗體陽性的患者進(jìn)行不規(guī)則抗體鑒定，Rh血型系統(tǒng)抗體檢出率分別為：抗E（35.56%），抗D（8.89%），抗c（4.44%），抗Ec（8.89%），抗e（2.22%），其中抗E檢出率最高。初步解釋為人群Rh（E）血型抗原陰性率較高，隨機(jī)輸入含Rh（E）血型抗原的血可能性大容易產(chǎn)生抗體。結(jié)果見表2。

表2 不規(guī)則抗體鑒定分布情況分析 例(%)

3 討 論

隨著社會的迅猛發(fā)展，醫(yī)療技術(shù)的不斷提升，輸血技術(shù)在臨床疾病治療方面獲得了廣泛的應(yīng)用和發(fā)展，尤其在急重癥患者的急救和治療方面發(fā)揮了極大的作用。血型抗體分天然抗體和免疫抗體，免疫抗體產(chǎn)生的特點(diǎn)是首次受到外界抗原刺激產(chǎn)生少量抗體，當(dāng)再次碰到以往接觸過的同種抗原時(shí)，機(jī)體針對該抗原產(chǎn)生比初次更為強(qiáng)烈和迅速的免疫反應(yīng)，并產(chǎn)生大量的抗體[4-5]。Rh血型系統(tǒng)抗體屬于免疫抗體，其主要通過輸血或者妊娠刺激產(chǎn)生[6]，臨床上此系統(tǒng)抗體較容易引起輸血反應(yīng)或新生兒溶血病。目前越來越多的患者不規(guī)則抗體陽性引起交叉配血不合，說明輸血前只常規(guī)進(jìn)行ABO和RhD檢測是不夠的，還應(yīng)對患者進(jìn)行Rh血型抗原CcEe檢測，施行Rh血型抗原相合輸血原則。

本研究中，3200例住院患者Rh血型抗原陽性率分布如下：D抗原陽性率（99.56%），C抗原陽性率90.00%，c抗原陽性率55.19%，E抗原陽性率46.19%，e抗原陽性率93%。E、e、C、c四種抗原中E抗原陽性率最低為46.19%，c抗原陽性率略高于E抗原陽性率，為55.19%，這與陽志勇等[3]報(bào)道的基本一致。目前，D抗原已經(jīng)是輸血前常規(guī)檢查，Rh（D）陰性患者基本都實(shí)行同型輸注或自體輸血，特別是反復(fù)輸血的RhD陰性患者和需要輸血的RhD陰性女性更重視RhD同型輸注。E、e、C、c等抗原的陽性率明顯低于D抗原陽性率，隨機(jī)輸血時(shí)更容易產(chǎn)生抗體，如果輸血前只進(jìn)行D抗原檢測，那么終將會給輸血帶來困擾。目前，國內(nèi)大多數(shù)醫(yī)院對E抗原和c抗原都是采用隨機(jī)輸血原則，不對E和c等抗原進(jìn)行特別甄別。本院統(tǒng)計(jì)的E抗原、c抗原陽性率大概都在50%左右，E抗原和c抗原陰性的患者隨機(jī)輸血時(shí)輸入含有對應(yīng)抗原的概率較大，邱芳等[7]報(bào)道E抗原和/或C抗原陰性患者隨機(jī)輸血輸入對應(yīng)抗原陽性血液概率是45.82%；文獻(xiàn)報(bào)道[8]，Rh血型系統(tǒng)中，抗原的強(qiáng)弱順序依次為D、E、c等，可知E、c抗原陰性患者采用隨機(jī)輸血的方式時(shí)產(chǎn)生抗E和抗c的可能性很高[9]，這與Gupta K P等[9]和陽志勇等[3]的報(bào)道一致。e抗原陽性率（93%）和C抗原陽性率（90%）都比E和c的陽性率高很多，關(guān)于其抗體的報(bào)道就比后者少。由此可得患者輸血前應(yīng)進(jìn)行E、e、C、c等抗原檢測，尤其是Rh（E），Rh（c）的同型輸血更值得被關(guān)注。

本研究中45例患者不規(guī)則抗體鑒定結(jié)果中Rh系統(tǒng)的抗體有27例，占60%。這些患者主要分布在頻繁輸血的科室，由此可以初步判定多次隨機(jī)輸血的患者更容易產(chǎn)生Rh血型系統(tǒng)抗體。45例抗體中抗E占比最高，為35.56%，這證明患者隨機(jī)輸血時(shí)容易產(chǎn)生抗E抗體。如遇到Rh系統(tǒng)抗體陽性輸血患者，配血的困難在于：①庫存量需要足夠大才有可能篩選出合適的血液，耗時(shí)、耗材、耗人力。②有些患者不規(guī)則抗體較弱交叉配血被遺漏，輸血有風(fēng)險(xiǎn)。③對于緊急輸血患者在沒有提前告知的情況下將耽誤輸血時(shí)機(jī)。因?yàn)楸臼醒窘鼛啄暄汗?yīng)持續(xù)緊張，輸血科庫存量少，盲目配血更不可取，所以輸血前對患者和獻(xiàn)血者進(jìn)行Rh血型抗原檢測，輸血時(shí)Rh血型抗原相匹配輸注，從源頭上減少輸血患者Rh血型系統(tǒng)抗體的產(chǎn)生顯得更為重要。

綜上分析，輸血前進(jìn)行Rh血型抗原檢測具有重要意義。調(diào)查顯示，目前已經(jīng)有少數(shù)醫(yī)院和血站把Rh血型抗原E、e、C、c等作為常規(guī)檢測，由于經(jīng)濟(jì)和醫(yī)療水平限制，全面開展E、e、C、c抗原檢測還需要些時(shí)間?？笶和抗c是引起輸血溶血反應(yīng)的重要原因，如果把E抗原和c抗原作為患者血型的常規(guī)檢查，讓Rh（E）、Rh（c）同型輸血，將會減少抗E或抗c的產(chǎn)生，這在輸血中也具有重大意義。隨著醫(yī)療和經(jīng)濟(jì)水平發(fā)展，精準(zhǔn)輸血越來越被重視，Rh血型抗原檢測會在更多的醫(yī)院和血站開展，最終實(shí)現(xiàn)更科學(xué)、更安全的輸血。