美伐他汀結(jié)晶純化工藝研究

吳勇良，王平

（1.浙江海正藥業(yè)股份有限公司，浙江臺州 318000；2.雅塞利（臺州）制藥有限公司，浙江臺州 318000）

美伐他?。╩ervastatin）是他汀類藥物的一種，又名康百?。╟ompactin），通常作為普伐他汀（pravastatin）藥物生產(chǎn)的前體物質(zhì)。普伐他汀為3-羥基-3-甲基戊二酰輔酶A還原酶（3-hydroxy-3-methyl-glutaryl-CoA reductase，HMG-CoA還原酶）的競爭性抑制劑，對降低體內(nèi)膽固醇有積極作用。美伐他汀的質(zhì)量直接影響轉(zhuǎn)化菌的轉(zhuǎn)化效率和普伐他汀的純度，同時也是普伐他汀生產(chǎn)成本的主要來源。因此，制備低成本、高質(zhì)量的美伐他汀對提高普伐他汀的收率和純度、降低生產(chǎn)成本具有重要的意義。

美伐他汀不溶于水，但在發(fā)酵液中以美伐他汀酸的形式存在，本文主要研究如何從發(fā)酵液中簡單易行地提取出高純度美伐他汀。

1 材料與方法

1.1 材料

美伐他汀粗品（批號130103），純度80%～90%，海正藥業(yè)原料藥生產(chǎn)車間。美伐他汀干菌絲（批號130105），海正藥業(yè)自制。

1.2 儀器與試劑

81-2型恒溫磁力攪拌器，上海司樂儀器有限公司；XPR205電子天平梅特勒-托利多稱量設(shè)備系統(tǒng)有限公司；PEF-6020型真空干燥箱，上海精宏實驗設(shè)備有限公司；W501B恒溫水浴鍋，上海申勝生物技術(shù)有限公司；SZB水環(huán)式真空泵，浙江真空泵有限公司；Buchi Rotavapov R-200旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，日本島津；C8色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）、LC-20AT型高效液相色譜儀，日本島津。

異丙醇，色譜純，蘇州駿赫化工有限公司；無水乙醇，色譜純，安徽安特食品股份有限公司；丙酮，色譜純，國藥集團化學(xué)試劑有限公司；乙酸乙酯，色譜純，杭州青辰化學(xué)試劑廠。

1.3 試驗方法

1.3.1 液相檢測方法

流動相∶乙腈∶水=80∶20（體積比）；流速：1.0 mL/min；檢測波長：238 nm；進樣量：10 μL；采集時間：主峰出峰時間的3倍。

1.3.2 溶劑對母液中脫水美伐他汀含量的影響

以美伐他汀粗品為原料，選用丙酮、乙酸乙酯、乙醇和異丙醇分別進行回流溶解，回流溫度50～55 ℃，自然降溫結(jié)晶。過濾后，結(jié)晶產(chǎn)物于55～62 ℃干燥，母液于35～45 ℃下濃縮干。分別稱重，取樣進行效價檢測和EP檢測。

1.3.3 溶劑對母液中雙氫美伐他汀含量的影響

按照1.3.2中的溶解、過濾和干燥條件進行母液濃縮干燥，比較母液中雙氫美伐他汀含量。

1.3.4 溫度對蛋白去除率的影響

取美伐他汀干菌絲（130105）200 g，加入1 L乙酸乙酯，分別在 0 ℃、5 ℃、10 ℃、15 ℃、20 ℃和 25 ℃浸泡30 min，絮狀物即雜蛋白，經(jīng)濾紙過濾后干燥稱重。

2 結(jié)果與分析

2.1 溶劑對母液中脫水美伐他汀含量的影響

溶劑對母液中脫水美伐他汀含量的影響如表1所示。以相同質(zhì)量美伐他汀粗品為原料，采用4種溶劑結(jié)晶。在去除脫水美伐雜質(zhì)方面，母液相中含量最多的為乙酸乙酯結(jié)晶母液，脫水美伐雜質(zhì)去除效果順序為乙酸乙酯＞丙酮＞乙醇＞異丙醇。

表1 溶劑對母液中脫水美伐他汀含量的影響

2.2 溶劑對母液中雙氫美伐他汀含量的影響

溶劑對母液中雙氫美伐他汀含量的影響如表2所示。用上述4種溶劑結(jié)晶，以相同質(zhì)量的美伐他汀粗品為原料進行結(jié)晶，在母液相中雙氫美伐他汀含量最高的是異丙醇，因此在去除雙氫美伐雜質(zhì)方面，溶劑優(yōu)先順序為異丙醇＞乙醇＞乙酸乙酯＞丙酮。

表2 溶劑對母液中雙氫美伐他汀含量的影響

2.3 溫度對蛋白去除率的影響

如表3所示，浸泡液在時間相同的情況下至0 ℃時，蛋白沉淀數(shù)量最多，同體積的浸泡液在0 ℃和5 ℃時雜蛋白濾除重量基本一致，且澄清度在5 ℃和0 ℃時已達到質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，考慮到動力成本，選擇5 ℃浸泡去除蛋白比較經(jīng)濟合算。

表3 過濾相關(guān)數(shù)據(jù)

3 結(jié)論

通過實驗，發(fā)現(xiàn)乙酸乙酯對脫水美伐他汀的去除效果較好，異丙醇對雙氫美伐他汀的去除效果較好，綜合考慮應(yīng)選擇異丙醇溶劑作為結(jié)晶溶劑；在5 ℃進行蛋白除雜效果較好，可滿足生產(chǎn)和節(jié)能需求。