浸潤性乳腺癌中miR-608和MIF的表達(dá)及臨床意義

張 偉，劉 霞，何 雷，張偉璇，焦南林

2020年全球癌癥報(bào)告顯示，乳腺癌的發(fā)病率和病死率位居女性癌癥的首位[1]。乳腺癌術(shù)后復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致患者死亡的主要原因，因此，探索乳腺癌發(fā)生、發(fā)展機(jī)制和尋找新的分子靶點(diǎn)具有重要意義。非編碼小RNA(microRNAs, miRNAs)具有調(diào)節(jié)信使RNA翻譯和降解的功能，其在乳腺癌的發(fā)生、進(jìn)展和治療中發(fā)揮重要作用[2-3]。文獻(xiàn)報(bào)道m(xù)iR-608可以調(diào)控AKT/FOXO3a信號(hào)通路抑制膀胱癌的增殖[4]，還可以結(jié)合TFAP4蛋白抑制非小細(xì)胞肺癌的遷移[5]。關(guān)于乳腺癌中miR-608的報(bào)道較少[6]，miR-608在乳腺癌中的表達(dá)及其生物學(xué)功能尚不清楚。巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制因子(macrophagemigration inhibitory factor, MIF)是一種多功能細(xì)胞因子，在免疫調(diào)節(jié)、炎癥反應(yīng)及腫瘤發(fā)生中均具有重要作用[7]。文獻(xiàn)報(bào)道肺腺癌[8]和腦膠質(zhì)瘤[9]中miR-608靶向結(jié)合MIF調(diào)控腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移。本文通過檢測(cè)乳腺癌中miR-608與MIF的表達(dá)，分析兩者表達(dá)的相關(guān)性，初步探討miR-608調(diào)控MIF促進(jìn)乳腺癌進(jìn)展的可能機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 臨床資料收集2016年1月～2018年4月我院存檔的行乳腺癌改良根治術(shù)患者的新鮮組織25例和石蠟組織82例(乳腺癌和癌旁正常乳腺組織)。患者均為女性，新鮮組織來源患者年齡29～77歲(中位年齡53歲)，腫瘤直徑1.2～4.5 cm(中位直徑2.5 cm)，組織學(xué)分級(jí)：Ⅰ+Ⅱ級(jí)14例、Ⅲ級(jí)11例，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移13例，TNM分期：Ⅰ期6例、Ⅱ期12例、Ⅲ期7例；石蠟組織來源患者年齡36～80歲(中位年齡51歲)，腫瘤直徑0.6～8.0 cm(中位直徑2.7 cm)，組織學(xué)分級(jí)：Ⅰ+Ⅱ級(jí)62例、Ⅲ級(jí)20例，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移35例，TNM分期：Ⅰ期15例、Ⅱ期46例、Ⅲ期21例。入組標(biāo)準(zhǔn)：所有患者均未接受術(shù)前新輔助治療，樣本均為初治手術(shù)切除標(biāo)本，經(jīng)組織病理學(xué)確診為非特殊型浸潤性乳腺癌(invasive breast carcinoma of no special type, IBC-NST)。

1.2 數(shù)據(jù)庫分析使用TargetScan Human(http://www.targetscan.org/vert_72/)數(shù)據(jù)庫預(yù)測(cè)miR-608和MIF的結(jié)合位點(diǎn)。

1.3 方法

1.3.1qRT-PCR 采用SYBR Green qPCR Mix qRT-PCR試劑盒(德國DBI公司)和All-in-One miRNA qRT-PCR Detection System試劑盒(美國基因復(fù)能公司)分別檢測(cè)MIF和miR-608的表達(dá)；qRT-PCR引物序列：MIF上游引物：5′-CGGACAGGGTC TACATCAACTATTA-3′，下游引物：5′-ACCGTTTAT TTCTCCCCACCA-3′；GAPDH上游引物：5′-GGAGC GAGATCCCTCCAAAAT-3′，下游引物：5′-GGCTGTT GTCATACTTCTCATGG-3′； miR-608上游引物：5′-A GGGGTGGTGTTGGGACAGCTCCGT-3′，下游引物：5′-ACGGAGCTGTCCCAACACCACCCCT-3′；U6上游引物：5′-GATTCCTATGTGGGCGACGAG-3′，下游引物：5′-CCATCTCTTGCTCGAAGTCC-3′。以Folds=2-△△Ct表示組間相對(duì)倍比關(guān)系，GAPDH和U6作為內(nèi)參。

1.3.2免疫組化及FISH檢測(cè) 免疫組化染色采用EliVision兩步法，ER(克隆號(hào)SP1)、PR(克隆號(hào)SP2)、Ki-67(克隆號(hào)MIB1)及EliVision試劑盒均購自福州邁新生物公司；HER-2(克隆號(hào)4B5)檢測(cè)使用Ventana全自動(dòng)免疫組化檢測(cè)平臺(tái)；MIF(克隆號(hào)E7T1W，稀釋比1 ∶200)購自Cell Signaling公司，以人甲狀腺組織濾泡上皮細(xì)胞染色作為陽性對(duì)照，PBS代替一抗作為空白對(duì)照。HER-2 FISH探針由廣州安必平醫(yī)藥科技公司提供。

1.3.3結(jié)果判讀 免疫組化及FISH判讀由兩位高年資乳腺?？撇±磲t(yī)師獨(dú)立閱片。MIF陽性定位于胞質(zhì)。(1)按癌細(xì)胞陽性比例進(jìn)行評(píng)分：陽性細(xì)胞數(shù)<5%為0分，5%～25%為1分，26%～50%為2分，>50%為3分；(2)按著色強(qiáng)度進(jìn)行評(píng)分：無陽性著色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分；將兩項(xiàng)得分結(jié)果相乘，>4分為陽性[10]。

HER-2免疫組化0～1+為陰性，3+為陽性，2+行FISH檢測(cè)，HER-2基因擴(kuò)增為陽性，無擴(kuò)增為陰性。Ki-67計(jì)數(shù)熱點(diǎn)區(qū)胞核陽性數(shù)。乳腺癌分子分型依據(jù)2019年st Gallen乳腺癌會(huì)議共識(shí)：管腔A型(ER≥1%，PR>20%，Ki-67增殖指數(shù)<30%且HER-2陰性)、管腔B型(一種為ER≥1%，Ki-67增殖指數(shù)≥30%或PR<20%，HER-2陰性；另一種為ER≥1%、PR>20%及HER-2陽性，任何水平Ki-67)、HER-2過表達(dá)型(ER及PR陰性，HER-2陽性)和三陰型(ER、PR及HER-2均陰性)[11]。

1.3.4Western blot法 將miR-608 mimics及miR-608 inhibitor(蘇州吉瑪基因公司)轉(zhuǎn)染人乳腺癌細(xì)胞株SK-BR-3(HER-2過表達(dá)型)，提取蛋白及測(cè)定蛋白濃度后進(jìn)行Western blot檢測(cè)，一抗包括MIF(稀釋比1 ∶1 000，美國Cell Signaling公司，#87501)和GAPDH(稀釋比1 ∶1 000，武漢三鷹生物公司，#10494-1-AP)。

1.4 隨訪對(duì)82例IBC-NST患者術(shù)后通過電話隨訪19～64個(gè)月，中位隨訪時(shí)間46個(gè)月，其中2例失訪。無進(jìn)展生存期(progression free survival, PFS)定義為從患者手術(shù)后至出現(xiàn)乳腺癌進(jìn)展(包括復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移)或任何原因的死亡之間的時(shí)間；總生存期(overall survival, OS)定義為從患者手術(shù)后至因任何原因死亡或隨訪終止之間的時(shí)間。

2 結(jié)果

2.1 IBC-NST組織中miR-608和MIF mRNA的表達(dá)及兩者表達(dá)的相關(guān)性采用qRT-PCR檢測(cè)25例IBC-NST和癌旁正常乳腺組織中miR-608和MIF mRNA的表達(dá)，結(jié)果顯示：miR-608在IBC-NST組織中的表達(dá)水平顯著低于癌旁正常乳腺組織(t=2.934，P<0.01，圖1A、B)；MIF mRNA在IBC-NST組織中的表達(dá)顯著高于癌旁正常乳腺組織(t=4.850，P<0.000 1，圖1C、D)。以上結(jié)果提示miR-608低表達(dá)和MIF mRNA高表達(dá)可能與IBC-NST的發(fā)生相關(guān)。利用IBC-NST和癌旁正常乳腺組織中miR-608和MIF mRNA相對(duì)表達(dá)量制作ROC曲線評(píng)價(jià)兩者的診斷價(jià)值，結(jié)果顯示：miR-608的AUC為0.725，敏感性為58.2%，特異性為86.8%(圖2A)；MIF mRNA的AUC為0.824，敏感性為70.5%，特異性為94.3%(圖2B)。結(jié)果提示，檢測(cè)miR-608和MIF mRNA的表達(dá)對(duì)于鑒別正常乳腺組織和IBC-NST組織具有一定的診斷價(jià)值。Pearson相關(guān)性分析結(jié)果顯示，25例IBC-NST組織中miR-608和MIF mRNA的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(r=-0.669 5，P=0.000 3，圖3A、B)。

圖1 A.qRT-PCR檢測(cè)25例IBC-NST組織和癌旁正常乳腺組織中miR-608表達(dá)量的倍比關(guān)系：T. IBC-NST組織；N.癌旁正常乳腺組織；B.qRT-PCR檢測(cè)25例IBC-NST組織和癌旁正常乳腺組織中miR-608的相對(duì)表達(dá)量；C.qRT-PCR檢測(cè)25例IBC-NST組織和癌旁正常乳腺組織中MIF mRNA表達(dá)量的倍比關(guān)系：T. IBC-NST組織；N.癌旁正常乳腺組織；D.qRT-PCR檢測(cè)25例IBC-NST組織和癌旁正常乳腺組織中MIF mRNA的相對(duì)表達(dá)量

圖2 A.ROC曲線評(píng)估m(xù)iR-608的診斷價(jià)值；B.ROC曲線評(píng)估MIF的診斷價(jià)值

圖3 A.25例IBC-NST組織中miR-608與MIF mRNA相對(duì)表達(dá)量折線圖；B.Pearman相關(guān)性分析25例IBC-NST組織中miR-608與MIF mRNA表達(dá)的相關(guān)性

2.2 IBC-NST組織中miR-608和MIF mRNA表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系利用miR-608或MIF mRNA表達(dá)量的中位值將25例IBC-NST分為高表達(dá)組和低表達(dá)組。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組miR-608的低表達(dá)率(69.2%，9/13)顯著高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(25.0%，3/12)(P<0.05)；TNM分期Ⅲ期組miR-608的低表達(dá)率(85.7%，6/7)顯著高于TNM分期Ⅰ+Ⅱ期組(33.3%，6/18)(P<0.05)；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組MIF mRNA的高表達(dá)率(76.9%，10/13)顯著高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(25.0%，3/12)(P<0.05)；TNM分期Ⅲ期組MIF mRNA的高表達(dá)率(100%，7/7)顯著高于TNM分期Ⅰ+Ⅱ期組(33.3%，6/18)(P<0.05)。而在患者年齡、腫瘤直徑及組織學(xué)分級(jí)方面，miR-608和MIF mRNA的表達(dá)差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。miR-608表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及TNM分期(P<0.05)呈負(fù)相關(guān)，MIF mRNA表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及TNM分期(P<0.05)呈正相關(guān)，兩者表達(dá)均與患者年齡、腫瘤直徑及組織學(xué)分級(jí)無關(guān)(P>0.05，表1)。

表1 miR-608和MIF mRNA表達(dá)與IBC-NST臨床病理特征的關(guān)系[n(%)]

2.3 IBC-NST細(xì)胞中miR-608調(diào)控MIF表達(dá)的初步機(jī)制初探通過TargetScan數(shù)據(jù)庫預(yù)測(cè)miR-608與MIF的結(jié)合位點(diǎn)，結(jié)果顯示兩者結(jié)合位點(diǎn)類型是“8mer”，即miR-608第2～8位種子序列與MIF-3′UTR區(qū)堿基存在完全互補(bǔ)配對(duì)；“context ++ score percentile”為99，該評(píng)分反應(yīng)結(jié)合位點(diǎn)的保守性，數(shù)值越接近100，表示該位點(diǎn)是真正結(jié)合靶點(diǎn)的概率越大(圖4)。將人乳腺癌細(xì)胞株SK-BR-3轉(zhuǎn)染miR-608 mimics和inhibitor后，qRT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示，與NC組(對(duì)照組)相比，轉(zhuǎn)染miR-608 mimics后miR-608表達(dá)量顯著升高(t=24.84，P<0.000 1，圖5A)，MIF mRNA表達(dá)量顯著降低(t=20.05，P<0.000 1，圖5B)；Western blot檢測(cè)結(jié)果顯示，與NC組相比，轉(zhuǎn)染miR-608 mimics后MIF蛋白表達(dá)顯著下降(圖5C)。與inh-NC組(對(duì)照組)相比，轉(zhuǎn)染miR-608 inhibitor后miR-608表達(dá)顯著降低(t=49.07，P<0.000 1，圖5D)，MIF的mRNA(t=13.34，P<0.001，圖5E)和蛋白表達(dá)顯著增加(圖5F)。以上結(jié)果提示：miR-608負(fù)向調(diào)控MIF表達(dá)，兩者間可能存在位點(diǎn)特異性結(jié)合關(guān)系。

圖4 TargetScan數(shù)據(jù)庫預(yù)測(cè)miR-608和MIF存在結(jié)合位點(diǎn)

圖5 A.qRT-PCR檢測(cè)人乳腺癌細(xì)胞株SK-BR-3轉(zhuǎn)染miR-608 mimics后miR-608的表達(dá)；B.qRT-PCR檢測(cè)人乳腺癌細(xì)胞株SK-BR-3轉(zhuǎn)染miR-608 mimics后MIF mRNA的表達(dá)；C.Western blot法檢測(cè)人乳腺癌細(xì)胞株SK-BR-3轉(zhuǎn)染miR-608 mimics后MIF蛋白表達(dá)；D.qRT-PCR檢測(cè)人乳腺癌細(xì)胞株SK-BR-3轉(zhuǎn)染miR-608 inhibitor后miR-608的表達(dá)；E.qRT-PCR檢測(cè)人乳腺癌細(xì)胞株SK-BR-3轉(zhuǎn)染miR-608 inhibitor后MIF mRNA的表達(dá)；F.Western blot法檢測(cè)人乳腺癌細(xì)胞株SK-BR-3轉(zhuǎn)染miR-608 inhibitor后MIF蛋白的表達(dá)

2.4 免疫組化法檢測(cè)IBC-NST組織中MIF蛋白的表達(dá)及其與臨床病理特征的關(guān)系免疫組化結(jié)果顯示，82例IBC-NST和癌旁正常乳腺組織中MIF陽性率分別為68.3%(56/82)和31.7%(26/82)，兩組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=21.951，P<0.001，圖6)。在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移乳腺癌組中MIF的陽性率(82.9%，29/35)顯著高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(57.4%，27/47)(P<0.05)。在TNM分期Ⅰ期乳腺癌組中MIF的陽性率(40%，6/15)顯著低于TNM分期Ⅱ期(78.3%，36/46)和Ⅲ期(66.7%，14/21)乳腺癌組(P<0.05)。82例IBC-NST中管腔A型占22.0%(18/82)，管腔B型占52.4%(43/82)，HER-2過表達(dá)型占13.4%(11/82)，三陰型占12.2%(10/82)，MIF在HER-2過表達(dá)型(90.9%，10/11)和三陰型(90.0%，9/10)乳腺癌組中的陽性率顯著高于管腔A型(44.4%，8/18)和管腔B型組(67.4%，29/43)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。p53突變型(79.2%，38/48)IBC-NST組中MIF的陽性率顯著高于p53野生型組(52.9%，18/34)。然而患者年齡、腫瘤發(fā)生側(cè)別、腫瘤直徑及組織學(xué)分級(jí)方面，MIF的陽性率差異均無顯著性(P>0.05)。綜上，82例IBC-NST中MIF表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期、分子分型及p53突變相關(guān)(P<0.05)，與患者年齡、腫瘤部位、腫瘤直徑、組織學(xué)分級(jí)均無關(guān)(表2)。

表2 MIF蛋白表達(dá)與IBC-NST臨床病理特征的相關(guān)性[n(%)]

圖6 IBC-NST組織中MIF的表達(dá)，EliVision兩步法：A.MIF在三陰型乳腺癌組織中陽性；B.MIF在HER-2過表達(dá)型乳腺癌組織中陽性；C.MIF在三陰型乳腺癌癌旁正常乳腺組織中陰性；D.MIF在HER-2過表達(dá)型乳腺癌癌旁正常乳腺組織中陰性

2.5 IBC-NST組織中MIF表達(dá)與患者預(yù)后的關(guān)系獲得隨訪的80例IBC-NST患者中有13例疾病進(jìn)展(其中5例患者因乳腺癌死亡，余8例患者出現(xiàn)乳腺癌復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移)。80例IBC-NST患者的3年和5年P(guān)FS分別為90%(72/80)和83.8%(67/80)；3年和5年OS分別為95%(76/80)和93.8%(75/80)。利用GraphPad-Prism 6.0軟件繪制生存曲線結(jié)合Gehan-Breslow-Wilcoxon檢驗(yàn)分析，結(jié)果顯示MIF陰性患者(平均47.2±9.87個(gè)月)的OS優(yōu)于MIF陽性患者(平均31.2±11.99個(gè)月)，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=1.448，P=0.229,圖7A)；MIF陰性患者(平均55.1±6.52個(gè)月)的PFS優(yōu)于MIF陽性患者(平均42.5±9.99個(gè)月)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=4.196，P=0.041,圖7B)。

圖7 A.MIF表達(dá)與IBC-NST患者OS的關(guān)系；B.MIF表達(dá)與IBC-NST患者PFS的關(guān)系

3 討論

目前乳腺癌已然成為威脅女性健康的第一殺手，從表觀遺傳學(xué)角度深入挖掘其發(fā)生、發(fā)展機(jī)制，將為乳腺癌診治提供新思路。miRNAs是具有20～22個(gè)核苷酸的非編碼小RNA，是重要的細(xì)胞功能和發(fā)育調(diào)控因子。目前生物界存在的miRNA主要包括細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞外miRNA，在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中，細(xì)胞內(nèi)miRNA的功能由細(xì)胞器驅(qū)動(dòng)，細(xì)胞外miRNA通過循環(huán)在細(xì)胞外空間發(fā)揮通信作用[12]。miRNA主要通過誘導(dǎo)其靶基因的mRNA降解或抑制其蛋白翻譯發(fā)揮作用，可以將其分為促癌miRNA、抑癌miRNA及促癌和抑癌雙重作用miRNA[13]。Fong等[14]研究發(fā)現(xiàn)miR-122可促進(jìn)乳腺癌的轉(zhuǎn)移，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)亦證實(shí)抑制miR-122能恢復(fù)遠(yuǎn)處器官(包括腦和肺)的葡萄糖攝取，降低乳腺癌的轉(zhuǎn)移率。miR-199a-5p通過調(diào)節(jié)EGF和SP1下調(diào)ERK5表達(dá)抑制乳腺癌細(xì)胞的侵襲[15]。miR-608是新近報(bào)道的miRNA分子，目前研究顯示其在不同腫瘤中發(fā)揮的作用并不一致。miR-608通過靶向BRD4抑制細(xì)胞增殖，在肝癌中發(fā)揮抑癌作用[16]。在肺癌中miR-608通過與靶基因AKT2結(jié)合促進(jìn)細(xì)胞凋亡，發(fā)揮抑癌作用[17]。Xiang等[18]報(bào)道顯示，在膀胱癌中miR-608發(fā)揮促進(jìn)腫瘤增殖和抑制腫瘤凋亡的作用。目前，miR-608在乳腺癌中的表達(dá)情況及其生物學(xué)功能尚未見報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，miR-608在IBC-NST組織中的表達(dá)顯著低于癌旁正常乳腺組織，并且miR-608低表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及TNM高分期相關(guān)，以上結(jié)果提示miR-608可能在IBC-NST中發(fā)揮抑癌作用。

MIF定位于人染色體22q11.2，是由115個(gè)氨基酸組成的進(jìn)化保守蛋白[19]，在炎癥反應(yīng)和免疫調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要功能。近年來，MIF與腫瘤的關(guān)系報(bào)道較多，其在非小細(xì)胞肺癌[20]、黑色素瘤[21]、膀胱癌[22]和乳腺癌[23]中均發(fā)現(xiàn)MIF表達(dá)上調(diào)。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果與上述一致，本實(shí)驗(yàn)從mRNA和蛋白水平均檢測(cè)出IBC-NST組織中MIF高表達(dá)；且MIF表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM高分期、分子分型及p53突變相關(guān)，MIF在HER-2過表達(dá)型和三陰型乳腺癌中的陽性率顯著高于管腔A和管腔B型。Wang等[24]對(duì)732例乳腺癌的研究顯示，MIF在三陰型乳腺癌中的表達(dá)顯著高于管腔型(P<0.05)。目前研究顯示，人類半數(shù)以上的惡性腫瘤均存在p53基因突變，p53的突變形式包括錯(cuò)義突變和無義突變[25]，乳腺癌中p53蛋白表達(dá)大多數(shù)為錯(cuò)義突變模式[26]。Hainaut等[27]報(bào)道p53突變?cè)诨准?xì)胞樣型和HER-2過表達(dá)型乳腺癌中常見(分別為65%和53.4%)，在管腔A和管腔B型中少見(分別為9.3%和24.8%)，且p53突變?cè)贖ER-2過表達(dá)型中與患者不良預(yù)后相關(guān)。Jung等[28]在乳腺癌細(xì)胞株MCF7和結(jié)直腸癌細(xì)胞株HCT116中均發(fā)現(xiàn)，MIF通過穩(wěn)定胞質(zhì)中MDM2和p53的結(jié)合來抑制后者的活性。以上研究結(jié)果提示：在乳腺癌不同分子亞型中MIF蛋白表達(dá)與p53基因突變關(guān)系密切，且兩者間可能存在潛在的作用機(jī)制。此外，對(duì)本組IBC-NST患者進(jìn)行生存分析，結(jié)果顯示MIF表達(dá)與患者PFS呈負(fù)相關(guān)。Wang等[24]分析3 951例乳腺癌微陣列數(shù)據(jù)亦發(fā)現(xiàn)，MIF高表達(dá)與患者總生存率降低相關(guān)(P<0.01)。綜上，MIF可能是IBC-NST患者不良預(yù)后預(yù)測(cè)因子。目前，針對(duì)MIF靶點(diǎn)相關(guān)治療的研究取得較大進(jìn)展；體外實(shí)驗(yàn)證實(shí)MIF抑制劑ISO-1可顯著抑制結(jié)腸癌和黑色素瘤細(xì)胞的增殖[29]。MIF小分子抑制劑CPSI-1306能抑制小鼠原位乳腺癌模型的腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移[30]。隨著研究的深入，MIF抑制劑可能進(jìn)入臨床實(shí)驗(yàn)階段。

馬穎光等[31]報(bào)道m(xù)iR-451可直接結(jié)合MIF的3′-UTR區(qū)來調(diào)控人結(jié)直腸癌細(xì)胞的增殖、侵襲和遷移。李曉娜等[32]報(bào)道m(xù)iR-451靶向MIF，經(jīng)由PI3K/AKT通路抑制甲狀腺癌細(xì)胞增殖和促進(jìn)其凋亡。由此可見，在不同腫瘤中MIF接受同種miRNA調(diào)控是常見的分子事件。Yu等[8]研究發(fā)現(xiàn)miR-608通過靶向MIF抑制肺腺癌侵襲和遷移。Wang等[9]報(bào)道m(xù)iR-608負(fù)向調(diào)控MIF表達(dá)介導(dǎo)PI3K/AKT和JNK通路失活，抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖、侵襲和遷移。miR-608通過下調(diào)EGFR和p53介導(dǎo)MAPK信號(hào)通路調(diào)控造釉細(xì)胞瘤細(xì)胞增殖、分化、凋亡和細(xì)胞周期。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，在IBC-NST組織中miR-608與MIF表達(dá)呈負(fù)相關(guān)；在人乳腺癌細(xì)胞株SK-BR-3中，miR-608模擬物和抑制劑能負(fù)調(diào)控MIF的mRNA和蛋白表達(dá)；TargetScan數(shù)據(jù)庫提示miR-608和MIF存在高評(píng)分結(jié)合位點(diǎn)。因此，筆者推測(cè)miR-608可能通過結(jié)合MIF的3′-UTR區(qū)在IBC-NST中發(fā)揮抑癌作用。本課題組后續(xù)將通過設(shè)計(jì)雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)等進(jìn)一步驗(yàn)證兩者的結(jié)合關(guān)系，并深入探索miR-608和MIF結(jié)合后其下游的信號(hào)通路是否與p53基因突變相關(guān)。

綜上所述，在IBC-NST中miR-608呈低表達(dá)，MIF呈高表達(dá)，兩者均與不良臨床病理特征相關(guān)；在人乳腺癌細(xì)胞株中miR-608負(fù)向調(diào)控MIF表達(dá)。miR-608和MIF可能是IBC-NST的預(yù)后標(biāo)志物和潛在的治療靶點(diǎn)。