妊娠期糖尿病孕婦IL-1β和IL-10基因多態(tài)性分析

林 鳳，張利娜

陜西省渭南市婦幼保健院產(chǎn)科，陜西渭南 714000

妊娠期糖尿病(GMD)是指妊娠期間首次發(fā)生或首次發(fā)現(xiàn)的糖耐量異常[1-2]，是孕期常見的一種疾病，臨床研究顯示，GMD在世界各國(guó)妊娠期女性中發(fā)病率為1.1%～10.4%，且近年來(lái)發(fā)病率呈逐年增加趨勢(shì)[3-4]。GMD的具體發(fā)病機(jī)制尚不明確，普遍認(rèn)為與妊娠期間胎盤產(chǎn)生的生乳素、糖皮質(zhì)激素、孕激素及垂乳素水平增加，抑制胰島素分泌，造成機(jī)體內(nèi)胰島素功能降低有關(guān)[5]。GMD可增加流產(chǎn)、胎兒畸形、妊娠期高血壓、羊水感染及早產(chǎn)等的發(fā)生率，嚴(yán)重影響孕婦及胎兒的健康，因此，早期診斷及預(yù)防GMD的發(fā)生意義重大[6]。炎癥細(xì)胞因子介導(dǎo)的免疫反應(yīng)在GMD的發(fā)生和發(fā)展中發(fā)揮重要作用，GMD孕婦血清白細(xì)胞介素(IL)-1β和IL-10水平較健康人明顯升高[7]。單核苷酸多態(tài)性(SNP)為基因組水平上由單個(gè)核苷酸變異所引起的DNA序列多態(tài)性，其廣泛存在于生物基因組中，也是當(dāng)前臨床與科研實(shí)驗(yàn)中比較常見的分子標(biāo)記。隨著測(cè)序技術(shù)的普及與功能基因組學(xué)研究的進(jìn)步，越來(lái)越多的疾病相關(guān)易感基因被挖掘出來(lái)，已有研究發(fā)現(xiàn)與糖尿病發(fā)病相關(guān)的部分SNP也與GMD的發(fā)病相關(guān)[8]。本研究探討了GMD孕婦IL-1β和IL-10的基因多態(tài)性情況，為臨床早期診斷及干預(yù)提供依據(jù)，從而降低GMD的發(fā)生率，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2018年2月至2021年6月在本院建檔分娩的488例孕婦作為研究對(duì)象。根據(jù)GMD發(fā)生情況分為發(fā)生GMD(GDM組)18例，未發(fā)生GMD(非GDM組)470例。納入標(biāo)準(zhǔn)：均順利完成健康體檢；均在本地區(qū)居住且無(wú)長(zhǎng)期外地居住史；本院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)了此研究；年齡20～45歲；單胎妊娠；孕20～28周；均自愿參與本研究并簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：患有嚴(yán)重的心腦血管、肝腎肺等器官組織疾??；未完成建檔分娩；孕期搬家遷出本地區(qū)；既往有2型糖尿病的孕婦；妊娠前曾服用過(guò)影響糖代謝藥物者；合并甲狀腺功能低下或亢進(jìn)者；精神疾病患者等。

1.2方法

1.2.1血糖檢測(cè) 所有孕婦均給予75 g口服葡萄糖耐量試驗(yàn)，禁食6～8 h后采集空腹靜脈血4 mL，然后將75 g葡萄糖粉充分溶入300 mL溫開水，一次喝完，然后在2 h后再次進(jìn)行靜脈抽血檢查。空腹血糖(FBG)<5.1 mmol/L、餐后2 h血糖<8.5 mmol/L為正常水平，任意一項(xiàng)血糖水平異常即可診斷為GMD。

1.2.2IL-1β和IL-10基因多態(tài)性檢測(cè) 采集所有孕婦空腹靜脈血2～3 mL，分離血清后采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)血清IL-1β和IL-10水平。然后提取基因組DNA，本研究中IL-1β rs231362和IL-10 rs2283194位點(diǎn)的聚合酶鏈反應(yīng)擴(kuò)增引物及單堿基延伸引物采用NCBI的primer軟件進(jìn)行設(shè)計(jì)，并由生工生物工程(上海)股份有限公司合成。擴(kuò)增后采用序列SNP檢測(cè)技術(shù)[生工生物工程(上海)股份有限公司]進(jìn)行基因測(cè)序與分析。見表1。

表1 IL-1β和IL-10基因多態(tài)性檢測(cè)序列

2 結(jié) 果

2.1兩組孕婦一般資料比較 GDM組孕婦年齡、孕周、體質(zhì)量指數(shù)、腰圍、三酰甘油(TG)、總膽固醇(TC)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)與非GDM組比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表2。

表2 兩組孕婦一般資料比較

2.2兩組孕婦血清IL-1β和IL-10水平比較 GDM組孕婦血清IL-1β和IL-10水平均高于非GDM組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表3。

2.3IL-1β和IL-10基因多態(tài)性比較 兩組孕婦IL-1β rs231362和IL-10 rs2283194位點(diǎn)符合Hardy-Weinberg平衡。GDM組孕婦IL-1β rs231362位點(diǎn)CC基因型與C等位基因頻率、IL-10 rs2283194位點(diǎn)TT基因型與T等位基因頻率與非GDM組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表4。

表4 兩組孕婦IL-1β和IL-10基因多態(tài)性比較[ n(%)]

表3 兩組孕婦血清IL-1β和IL-10水平比較

2.4IL-1β和IL-10基因多態(tài)性與GMD發(fā)生的相關(guān)性分析 Spearman相關(guān)分析結(jié)果顯示，GMD與IL-1β rs231362位點(diǎn)CC基因型與C等位基因、IL-10 rs2283194位點(diǎn)TT基因型與T等位基因均存在相關(guān)性(P<0.05)。見表5。

表5 IL-1β和IL-10基因多態(tài)性與GMD發(fā)生的相關(guān)性

2.5影響GMD發(fā)生的多因素分析 非條件多因素Logistic回歸分析結(jié)果顯示，IL-1β rs231362位點(diǎn)CC基因型與C等位基因、IL-10 rs2283194位點(diǎn)TT基因型與T等位基因均為GMD發(fā)生的影響因素(P<0.05)。見表6。

表6 影響GMD發(fā)生的多因素分析

3 討 論

GMD當(dāng)前在臨床上比較多見，易造成孕婦及胎兒并發(fā)癥發(fā)生。本研究結(jié)果顯示，488例孕婦中發(fā)生GMD 18例，發(fā)生率為3.7%。臨床有研究顯示，GMD可嚴(yán)重影響胎兒發(fā)育，流產(chǎn)發(fā)生率高達(dá)15.0%～25.0%，同時(shí)妊娠期高血壓發(fā)生率為正常孕婦的3～4倍，這與GMD孕婦嚴(yán)重的胰島素抵抗有關(guān)[9]。GMD還可增加妊娠期感染發(fā)生率，進(jìn)一步加重機(jī)體糖代謝紊亂，嚴(yán)重者可出現(xiàn)酮癥酸中毒等嚴(yán)重并發(fā)癥。受高血糖及高滲性利尿等因素影響，GMD孕婦羊水過(guò)多發(fā)生率也增加。有研究顯示，GMD孕婦再次妊娠后其GMD復(fù)發(fā)率高達(dá)35.0%～61.5%，部分患者還可發(fā)展為2型糖尿病，嚴(yán)重影響孕婦生命健康[10]。GMD還可對(duì)胎兒造成嚴(yán)重危害，有研究顯示，GMD孕婦巨大胎兒發(fā)生率高達(dá)26.8%～39.7%，主要認(rèn)為與機(jī)體長(zhǎng)期處于高胰島素狀態(tài)，增強(qiáng)胎兒蛋白質(zhì)及脂肪合成，引起胎兒發(fā)育過(guò)度有關(guān)[11]。同時(shí)，高血糖對(duì)胚胎營(yíng)養(yǎng)供應(yīng)抑制可造成胎兒生長(zhǎng)受限，胎兒畸形發(fā)生率增加，且新生兒呼吸窘迫綜合征發(fā)生率也提高，嚴(yán)重影響了胎兒的發(fā)育及健康，為此，明確GMD的發(fā)生機(jī)制具有重要價(jià)值。隨著臨床對(duì)IL-1β和IL-10研究的深入，發(fā)現(xiàn)不同糖尿病患者其循環(huán)水平存在明顯差異。本研究結(jié)果顯示，GDM組孕婦血清IL-1β和IL-10水平均高于非GDM組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。從機(jī)制上分析，GMD孕婦存在血小板被激活破壞，在此過(guò)程中大量IL-1β和IL-10被釋放，使血清IL-1β和 IL-10水平明顯增加[12]。特別是當(dāng)孕婦處于高血糖狀態(tài)時(shí)，促進(jìn)了有絲分裂激酶的介導(dǎo)作用，胎盤微血管慢性缺氧，也刺激了IL-1β和 IL-10的廣泛表達(dá)[13]。

GMD和2型糖尿病有相似的病理生理機(jī)制，特別是妊娠期母體雌激素、孕激素和胰島素分泌增加，導(dǎo)致其拮抗胰島素的作用增強(qiáng)，當(dāng)胰島素分泌不足以補(bǔ)償胰島素抵抗時(shí)引起的血糖水平升高時(shí)，可導(dǎo)致GMD發(fā)生。目前主要認(rèn)為，GMD發(fā)生是遺傳因素、外界環(huán)境因素及妊娠期特殊生理?xiàng)l件共同作用的結(jié)果[14]。有研究發(fā)現(xiàn)，胎兒可使孕婦內(nèi)分泌腺體代償性增大，且刺激胎盤分泌胰島素拮抗劑，共同作用造成機(jī)體胰島素水平明顯提升[15]。糖尿病家族史是GMD的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)多個(gè)易感基因與GMD發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)[15]。本研究結(jié)果顯示，GDM組和非GDM組孕婦IL-1β rs231362和IL-10 rs2283194位點(diǎn)符合Hardy-Weinberg平衡。GDM組孕婦IL-1β rs231362位點(diǎn)CC基因型與C等位基因頻率、IL-10 rs2283194位點(diǎn)TT基因型與T等位基因頻率與非GDM組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；Spearman相關(guān)分析結(jié)果顯示，GMD與IL-1β rs231362位點(diǎn)CC基因型與C等位基因、IL-10 rs2283194位點(diǎn)TT基因型與T等位基因均存在相關(guān)性(P<0.05)；非條件多因素Logistic回歸分析結(jié)果顯示，IL-1β rs231362位點(diǎn)CC基因型與C等位基因、IL-10 rs2283194位點(diǎn)TT基因型與T等位基因均為GMD發(fā)生的影響因素(P<0.05)。從機(jī)制上分析，IL-1β是一種含DNA結(jié)構(gòu)域的轉(zhuǎn)錄因子，IL-10 rs2283194長(zhǎng)度為99 bp，受檢人群的基因型為TT、AT、AA型位點(diǎn)，以AT野生型為主，二者均可間接介導(dǎo)Wnt/β-連環(huán)蛋白信號(hào)傳導(dǎo)通路，激活胰高血糖素原基因發(fā)生轉(zhuǎn)錄，具有調(diào)節(jié)血糖穩(wěn)態(tài)的作用。IL-1β發(fā)生變異，使胰高血糖素原基因mRNA在腸內(nèi)分泌細(xì)胞的表達(dá)減少，可致血糖升高，促使GMD發(fā)生。本研究也存在一定的不足，納入的孕婦數(shù)量比較少，調(diào)查的指標(biāo)也比較少，將在后續(xù)研究中進(jìn)一步探討。

綜上所述，GMD孕婦多伴有血清IL-1β和IL-10水平的高表達(dá)，IL-1β和IL-10基因多態(tài)性為GMD發(fā)生的影響因素。