珍珠龍膽石斑魚中MS-222 殘留量的氣相色譜-質(zhì)譜檢測方法的建立

黃伊彤，黃 和，尤 揚(yáng)，陳彩燕，李鈺娟，黃錦嫻

（廣東海洋大學(xué) 食品科技學(xué)院，廣東湛江 524088）

lanceolatus）作為一種高蛋白、低脂肪、富含不飽和脂肪酸的優(yōu)質(zhì)水產(chǎn)品，成為消費(fèi)者歡迎的水產(chǎn)品之一[1]。在石斑魚?；钸\(yùn)輸過程中，適量麻醉劑可以起到抑制石斑魚神經(jīng)系統(tǒng)敏感性的作用[2]，等待運(yùn)輸結(jié)束后將石斑魚放在清水中，石斑魚體內(nèi)麻醉劑排出體外后便可復(fù)蘇[3]。

在我國，研究MS-222 麻醉劑對石斑魚麻醉機(jī)理的報道較多，但我國仍未制定MS-222 麻醉劑標(biāo)準(zhǔn)檢測方法。因此，本實驗在已有的研究基礎(chǔ)上，以石斑魚為實驗材料，進(jìn)一步優(yōu)化QuEChERS 前處理方法和氣相色譜、質(zhì)譜條件，建立一種可靠、快速、易操作的MS-222 麻醉劑檢測方法。希望該方法能為我國監(jiān)督管理部門檢測石斑魚中MS-222 殘留量提供技術(shù)支持，以保障石斑魚質(zhì)量安全和消費(fèi)者的食用安全。

1 材料與方法

1.1 試劑與儀器

3-乙氧?；桨芳谆撬猁}標(biāo)準(zhǔn)品（上海麥克林生化科技有限公司）；甲醇、乙腈和乙酸乙酯均為色譜純（Honeywell，美國）；乙二胺-N-丙基硅烷（PSA）、石墨化炭黑（GCB）和十八烷基鍵合硅膠（HC-C18）（上海安譜實驗科技股份有限公司）；氯化鈉（天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司）；無水硫酸鎂（廣東光華科技股份有限公司）。

超純水機(jī)（Merck，德國）；漩渦混勻機(jī)（EYELA，日本）；氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀（GCMS，QP 2010 Ultra，SHIMADZU，日本）；高速冷凍臺式離心機(jī)（Thermo Fisher，美國）；全自動平行濃縮儀和全自動氮?dú)獍l(fā)生器（?？苾x器有限公司，中國）。

1.2 樣品前處理

稱 取2.00 g 樣品，加入2 mL 蒸餾水，手動搖勻，加入一顆均質(zhì)子，渦旋1 min，加入10 mL 乙腈提取溶液，渦旋3 min，超聲萃取 10 min，加入1.50 g 的NaCl，手動搖勻，加入2.00 g無水硫酸鎂，手動搖勻，4 000 r·min-1離心10 min，將離心后的上清液轉(zhuǎn)移到15 mL 離心管中，加入20 mg GCB+100 mg C18+100 mg PSA+300 mg 無水硫酸鎂，手動搖勻，4 000 r·min-1離心7 min，取上清液于15 mL試管，45 ℃氮吹濃縮至樣液近干，加入2 mL 純乙酸乙酯復(fù)溶，然后用0.22 μm 有機(jī)濾膜過濾，上機(jī)測定。

1.3 實驗條件

（1）色譜條件。色譜 柱DB-5MS（30 m× 0.25 mm×0.25 μm）；升溫程序：起始溫度為100 ℃，保持0.5 min，以10 ℃·min-1升溫至200 ℃，最后以25℃·min-1升溫至270 ℃，維持4 min。進(jìn)樣口溫度：280 ℃，不分流進(jìn)樣；進(jìn)樣體積：1 μL；流速： 1.0 mL·min-1；載氣：高純氦氣（純度≥99.999%）。

（2）質(zhì)譜條件。離子源為EI 源；離子源溫度：270 ℃，傳輸線溫度：260 ℃；溶劑延遲時間： 3 min；選擇離子監(jiān)測（SIM）模式分析。MS-222 的定量離子分別為92m/z、120m/z、137m/z、165m/z，各離子豐度比（%）為81 ∶100 ∶37 ∶72，以120m/z作為定量離子。

2 結(jié)果與分析

2.1 提取溶劑的選擇

為了提取樣品中的結(jié)合態(tài)殘留物，同時除去多余的雜質(zhì)，選擇乙腈、甲醇、甲醇∶乙腈（V∶V=1 ∶1）、甲醇∶乙腈（V∶V=1 ∶2）、乙酸乙酯作為提取溶劑進(jìn)行研究。向2 g 樣品添加0.10 mg·kg-1的MS-222，混勻。結(jié)果顯示，乙腈作為提取溶劑時，上清液和水相分層較明顯，樣液澄清，提取出來的雜質(zhì)少，樣液濃縮時間短，提取率高。甲醇作為提取溶劑時，有機(jī)層和水層分層不明顯，導(dǎo)致后續(xù)除雜難度增大，樣液濃縮耗時長，提取率低；甲醇∶乙腈（V∶V=1 ∶1）、甲醇∶乙腈（V∶V=1 ∶2）兩種混合溶劑作為提取溶劑時，提取液中雜質(zhì)多，提取率低；乙酸乙酯作為提取溶劑時，提取液顏色偏黃，樣品容易結(jié)成一團(tuán)，導(dǎo)致大部分目標(biāo)物質(zhì)被包埋，提取率低。因此，選擇乙腈作為提取溶劑。此外，在提取過程中，為提高目標(biāo)物質(zhì)提取率，本實驗加入了氯化鈉，增強(qiáng)乙腈的浸潤作用，使樣品基質(zhì)之間產(chǎn)生劇烈摩擦，然后加入無水硫酸鎂可除去部分水以減輕后續(xù)凈化過程的壓力[4-5]。

2.2 凈化劑的選擇

鑒于樣品基質(zhì)構(gòu)成復(fù)雜，為獲得最佳的凈化效果，選擇了3 種分散固相萃取凈化劑組合進(jìn)行提取液凈化效果研究，分別是①200 mg無水硫酸鎂+50 mg PSA+50 mg C18+10 mg GCB、②200 mg 無水硫酸鎂+50 mg PSA+50 mg C18+20 mg GCB 和③300 mg 無水硫酸鎂+100 mg PSA+100 mg C18+20 mg GCB。向 2 g 樣品添加0.10 mg·kg-1濃度的MS-222，混勻，測定。結(jié)果顯示，①組的回收率最低，只有46.28%，②組的回收率最高，有82.12%，③組和②組的回收率接近，有80.85%。雖然②組的回收率最高，但是由圖1 可知，②組所得色譜圖中MS-222 目標(biāo)峰前的雜峰比③組多，干擾較大。因此，在回收率相近的情況下，選擇③組作為凈化條件，凈化效果 更好。

圖1 3 種分散固相萃取凈化劑組合凈化效果色譜圖

2.3 復(fù)溶液的選擇

選擇了乙酸乙酯、 乙酸乙酯∶甲醇（V∶V=1 ∶1）、乙酸乙酯∶甲醇（V∶V=16 ∶9）作為復(fù)溶液進(jìn)行研究。向2 g 樣品添加0.10 mg·kg-1的MS-222，混勻，測定。結(jié)果表明（圖2），乙酸乙酯作為復(fù)溶液時MS-222 回收率高，為89.29%，而且色譜圖中目標(biāo)峰前的雜峰少；其次是乙酸乙酯∶甲醇（V∶V=1 ∶1），MS-222 回收率為70.99%；乙酸乙酯∶甲醇（V∶V=16 ∶9）的回收率最低，為64.57%。甲醇極性大，容易溶解其他雜質(zhì)，因此含甲醇的復(fù)溶液所得的色譜圖雜峰多。

圖2 3 種復(fù)溶液復(fù)溶MS-222 所得色譜圖

2.4 方法線性關(guān)系及定量限

本實驗設(shè)計6 個MS-222 標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度，分別為0.010 μg·mL-1、0.020 μg·mL-1、0.050 μg·mL-1、 0.100 μg·mL-1、0.200 μg·mL-1和0.500 μg·mL-1， 使用純乙酸乙酯作為溶劑來配制MS-222 標(biāo)準(zhǔn)溶液。按照上述儀器條件進(jìn)行GC-MS 檢測，根據(jù)所得的檢測結(jié)果用Excel 繪制出MS-222 的標(biāo)準(zhǔn)曲線，見圖3。檢測結(jié)果表明，MS-222 在0.010 ～0.50 μg·mL-1具有良好的線性關(guān)系，所得到的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為y= 102 362.3x-276.3，相關(guān)系數(shù)為0.999 9，方法定量限為0.010 mg·kg-1。

圖3 MS-222 標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.5 樣品加標(biāo)回收率試驗

以石斑魚肌肉、肝臟作為樣品，選取0.050 mg·kg-1、0.100 mg·kg-1、0.500 mg·kg-1作為MS-222 標(biāo)準(zhǔn)溶液水平添加濃度，每個水平添加濃度平行測定6 次，按照1.2 前處理方法和1.3 儀器條件進(jìn)行GC-MS 檢測。結(jié)果表明（表1），以肌肉為樣品，添加濃度為0.050 ～ 0.500 mg·kg-1， 平均回收率 為82.10% ～91.47%，RSD 為2.81% ～4.63%；以肝臟為樣品，添 加濃 度 為0.050 ～0.500 mg·kg-1，平均回收率 為81.24%～92.13%，RSD 為0.78%～5.70%。由此可得，本研究建立的方法檢測石斑魚中MS-222 麻醉劑殘留量的準(zhǔn)確度和精密度良好。

表1 樣品加標(biāo)回收率與精密度表

3 結(jié)論

本文以石斑魚為實驗材料， 通過優(yōu)化QuEChERS 前處理方法和氣相色譜，建立了石斑魚中MS-222 殘留量的氣相色譜-質(zhì)譜檢測方法。石斑魚樣品經(jīng)乙腈超聲提取，用QuEChERS 方法對提取液進(jìn)行凈化，氮吹濃縮，使用乙酸乙酯復(fù)溶目標(biāo)物，用0.22 μm 有機(jī)濾膜過濾，GC-MS 測定。在添加濃度為0.050 ～0.500 mg·kg-1時，平均回收率為81.24%～92.13%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.78%～5.70%。本方法簡單、高效、準(zhǔn)確度高，適用于石斑魚中MS-222 麻醉劑殘留量檢測。