飼料中添加天蠶素抗菌肽對南美白對蝦免疫功能、抗病力的影響

房 媛，董林娟，王 孟，張龍龍

（陜西服裝工程學(xué)院，陜西西安 712046）

南美白對蝦是我國海水養(yǎng)殖的重要對象，其肉質(zhì)鮮美、營養(yǎng)豐富、經(jīng)濟(jì)價值高，深受人們的喜愛（羅智偉等，2019；張小利等，2019）。南美白對蝦的生長速度快，繁殖數(shù)量高，且后代存活率高，已成為我國市場重要的水產(chǎn)品之一，其市場具有廣闊的發(fā)展前景（沈春蕾等，2019）。近年來，由于南美白對蝦養(yǎng)殖規(guī)模不斷增大，養(yǎng)殖戶濫用抗生素預(yù)防疾病，導(dǎo)致南美白對蝦的耐藥性增強(qiáng)，造成水體大量污染，嚴(yán)重威脅水產(chǎn)品安全。與抗生素相比，天蠶抗菌肽具有蛋白分子小、安全、健康、性質(zhì)穩(wěn)定等優(yōu)勢，對宿主內(nèi)細(xì)胞的影響程度較小。而天蠶素抗菌肽是一種常見的抗菌肽，已作為飼料添加劑在魚類飼料中使用，顯著提高了魚類的生長發(fā)育（董俊等，2020）。

目前，抗菌肽作為飼料添加劑被廣泛應(yīng)用于魚類養(yǎng)殖中，發(fā)揮了良好的作用（羅陽瑞等，2020）。研究結(jié)果表明，飼料中添加抗菌肽可顯著提高魚類的生長性能，增強(qiáng)機(jī)體免疫功能（張耀文等，2020）。盡管抗菌肽作為飼料添加劑在魚類中的應(yīng)用比較廣泛，但抗菌肽在南美白對蝦養(yǎng)殖中的研究較少；本文主要以南美白對蝦為研究對象，分析飼料中天蠶抗菌肽的添加水平對南美白對蝦免疫功能、抗病力的影響，為天蠶抗菌肽在南美白對蝦養(yǎng)殖的合理使用量提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料天蠶素抗菌肽、玉米蛋白粉、進(jìn)口魚粉、魚油、花生粕及玉米，礦物質(zhì)原料和維生素原料均購置于嘉康飼料有限公司，南美白對蝦來自當(dāng)?shù)仞B(yǎng)殖場。

1.2 飼料配方設(shè)計試驗飼料成分如表2所示，南美白對蝦飼料配方中天蠶抗菌肽的添加水平為0%、1%、2%、3%、4%和5%。稱取所有南美白對蝦飼料原料后，測定其飼料配方中營養(yǎng)元素含量，放入飼料破碎儀破碎，并加入水混合，制成2 mm的顆粒料，放入烘干箱干燥處理，放入4℃冰箱備用。

表2 飼料中添加天蠶素抗菌肽對南美白對蝦的生長性能影響

1.3 飼養(yǎng)管理方法試驗的南美白對蝦均來自于試驗和教學(xué)人工養(yǎng)殖基地。養(yǎng)殖試驗在教學(xué)基地室內(nèi)養(yǎng)殖循環(huán)桶內(nèi)進(jìn)行，將（2.36±0.11）g的南美白對蝦隨機(jī)分為對照組和試驗組，對照組飼喂常規(guī)飼料，試驗組在常規(guī)飼料中添加天蠶素抗菌肽，每組4個重復(fù)，每組重復(fù)44尾。正式飼養(yǎng)試驗開始之前對循環(huán)養(yǎng)殖桶進(jìn)行消毒處理，南美白對蝦放入暫養(yǎng)池內(nèi)暫養(yǎng)2周。飼養(yǎng)期間，每天定時投喂適量餌料，每天3次，根據(jù)天氣、水溫、攝食狀況及時調(diào)整餌料，并記錄南美白對蝦的養(yǎng)殖情況，定時檢測養(yǎng)殖水質(zhì)狀況，包括溶氧（＞6 mg/L），氨氮，pH（7.9～8.5）和水溫（26.8℃），鹽度為25%。飼養(yǎng)試驗期間定期換水，溶氧程度達(dá)到9～15 mg/L，養(yǎng)殖試驗為期8周。

表1 試驗飼料配方組成 %

1.4 生長性能指標(biāo)飼養(yǎng)試驗結(jié)束后，測定南美白對蝦的初體重和末體重，依據(jù)相應(yīng)的公式計算南美白對蝦生長發(fā)育情況，具體計算公式如下：

1.5 免疫指標(biāo)測定飼養(yǎng)試驗結(jié)束后，將南美白對蝦禁食24 h，靜脈采血10 mL，采用相關(guān)酶聯(lián)免疫吸附試劑盒測定南美白對蝦血清的酸性磷酸酶（ACP），過氧化物酶（POD），超氧化物歧化酶（SOD）的濃度，檢測方法參照試劑盒說明書。

1.6 腸道酶活指標(biāo)測定南美白對蝦飼養(yǎng)周期結(jié)束后，將試驗組中分別取出3條健康的南美白對蝦，取出南美白對蝦腸道中的沉積物，采用試劑盒檢測南美白對蝦腸道酶活指標(biāo)，包括胃蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶。

1.7 數(shù)據(jù)分析試驗數(shù)據(jù)采用Excel表格記錄，用SPSS 22.0軟件進(jìn)行方差分析，P＜0.05表示組間差異顯著。

2 試驗結(jié)果

2.1 天蠶素抗菌肽對南美白對蝦的生長性能影響由表2可知，隨著飼料中天蠶素抗菌肽添加水平的升高，南美白對蝦的增重率和特定生長率隨著飼料中天蠶素抗菌肽含量的增加先升高后下降，3%組南美白對蝦的增重率和特定生長率最大，為348.2%和3.06%，與對照組有顯著差異（P＜0.05）；南美白對蝦的餌料系數(shù)與飼料天蠶素抗菌肽呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)。隨著飼料中天蠶素抗菌肽的添加水平不斷上升，3%組南美白對蝦的蛋白質(zhì)沉淀率顯著高于對照組（P＜0.05），其余組南美白對蝦的蛋白質(zhì)效率與對照組無顯著差異（P＞0.05）。飼料中不同添加水平天蠶素抗菌肽對南美白對蝦攝食率和存活率無顯著影響（P＞0.05）。

2.2 天蠶素抗菌肽對南美白對蝦的免疫指標(biāo)影響由表3可知，隨著飼料中天蠶素抗菌肽添加水平的不斷增加，3%組南美白對蝦的ACP含量達(dá)到最大水平，為89.69 ng/L，SOD含量達(dá)到最大水平，為27.23 U/ml，與對照組有顯著差異（P＜0.05），2%組和4%組南美白對蝦的ACP含量無顯著差異，與對照組有顯著差異（P＜0.05）；隨著飼料中天蠶素抗菌肽添加水平的不斷增加，3%組南美白對蝦的POD含量達(dá)到最大水平，為3.54 ng/L，與對照組有顯著差異（P＜0.05）；2%組和4%組南美白對蝦的POD含量類似，與對照組有顯著差異（P＜0.05）。

表3 飼料中添加天蠶素抗菌肽對南美白對蝦的免疫指標(biāo)影響

2.3 天蠶素抗菌肽對南美白對蝦的腸道酶活指標(biāo)影響由表4可知，隨著飼料中天蠶素抗菌肽添加水平的不斷上升，3%組南美白對蝦的淀粉酶、胃蛋白酶和脂肪酶含量最高，分別為1.99、3.34和4.54 U/mg，與對照組差異顯著（P＜0.05）；4%組和5%組南美白對蝦的胃蛋白酶、淀粉酶的含量無顯著差異，與對照組有顯著差異（P＜0.05）；1%組和2%組南美白對蝦的脂肪酶與對照組有顯著差異（P＜0.05）。

表4 飼料中添加天蠶素抗菌肽對南美白對蝦的腸道指標(biāo)影響 U/mg

3 討論

3.1 飼料中添加天蠶素抗菌肽對南美白對蝦生長性能的影響天蠶素抗菌肽是一種廣譜抗菌藥物，能有效抵御外界病原菌的侵襲，參與體內(nèi)的免疫反應(yīng)，促進(jìn)淋巴細(xì)胞的分化，增強(qiáng)機(jī)體免疫反應(yīng)，改善腸道內(nèi)部酶活性，促進(jìn)腸道內(nèi)部食物營養(yǎng)物質(zhì)的消化，有利于動物的生長發(fā)育（李波和韓文瑜，2014）。在本研究中，飼料添加3%的天蠶素抗菌肽可顯著提高南美白對蝦的特定生長率和增重率，提高南美白對蝦的生長發(fā)育速度。黃小紅等（2018）研究發(fā)現(xiàn)，飼料中天蠶素抗菌肽的添加水平為500mg/kg可顯著提高草魚的生長發(fā)育速度，顯著提高草魚的特定生長率和增重率。王自蕊等（2014）研究發(fā)現(xiàn)，飼料中添加150mg/kg的天蠶素抗菌肽可顯著提高湘云鯽的特定生長率和增重率，有利于湘云鯽的生長發(fā)育，一旦飼料中天蠶素抗菌肽的添加水平超過150mg/kg，湘云鯽的生長發(fā)育將會受到抑制。因此，南美白對蝦的特定生長率和增重率與飼料中天蠶素添加水平息息相關(guān)。

本研究中，適宜的天蠶素抗菌肽添加水平可以促進(jìn)南美白對蝦腸道內(nèi)部消化酶的活性，促進(jìn)腸道消化速度，從而降低南美白對蝦的餌料系數(shù)。隨著飼料中天蠶素抗菌肽添加水平的不斷上升，3%組南美白對蝦的蛋白質(zhì)沉淀率達(dá)到最高，提示3%添加水平有利于南美白對蝦的蛋白質(zhì)沉積，有利于南美白對蝦的營養(yǎng)累積，可加快對蝦的生長發(fā)育速度，降低飼料成本。且飼料中抗菌肽的添加水平對南美白對蝦的存活率和攝食率不存在顯著影響，提示飼料中抗菌肽與南美白對蝦的攝食和存活率無關(guān)聯(lián)。

3.2 飼料中添加天蠶素抗菌肽對南美白對蝦的免疫功能、抗病力的影響南美白對蝦腸道內(nèi)消化酶對南美白對蝦的消化吸收有密切聯(lián)系，有助于營養(yǎng)物質(zhì)的消化、吸收，提高飼料利用率。胃蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶是腸道內(nèi)重要的消化酶之一，可反應(yīng)腸道內(nèi)部的消化能力（黃小紅等，2018；王自蕊等，2014）。在本研究中，隨著飼料中天蠶素抗菌肽添加水平的上升，3%組南美白對蝦的淀粉酶和胃蛋白酶含量最高，提示飼料中添加適量的天蠶素抗菌肽有助于刺激南美白對蝦腸道消化酶的分泌，顯著提高其消化酶活性，從而提高腸道內(nèi)營養(yǎng)物質(zhì)的利用率，顯著促進(jìn)南美白對蝦的營養(yǎng)物質(zhì)沉積，有利于南美白對蝦的生長發(fā)育。

ACP是參與動物機(jī)體免疫應(yīng)答的重要活性物質(zhì)，POD可參與機(jī)體內(nèi)部的免疫反應(yīng)，超氧化物歧化酶有效清除體內(nèi)自由基的作用，是反映動物健康狀態(tài)的重要指標(biāo)。在本研究中，隨著飼料中天蠶素抗菌肽添加水平的不斷增加，3%組南美白對蝦的ACP、SOD、POD含量最大，且免疫水平不斷增強(qiáng)，提示飼料中添加適量的天蠶素抗菌肽有助于提高南美白對蝦的免疫力，提高南美白對蝦的免疫耐受能力和環(huán)境適應(yīng)能力。飼料中天蠶素抗菌肽與內(nèi)部黏膜免疫發(fā)生作用，與外來病原發(fā)生作用機(jī)制，從而刺激機(jī)體的免疫反應(yīng)，增強(qiáng)機(jī)體免疫功效，清除外來病原菌。

4 結(jié)論

飼料中添加天蠶素抗菌肽可顯著提高南美白對蝦的增重率和特定生長率，提高動物的生長發(fā)育速度，有利于促進(jìn)腸道消化酶的分泌，促進(jìn)消化吸收，增強(qiáng)南美白對蝦的免疫活性，提高免疫抗病力。在本次試驗中，飼料中添加3%的天蠶素抗菌肽有利于南美白對蝦的生長發(fā)育，增強(qiáng)了南美白對蝦的抗病力。