• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    乳酸菌富硒及產胞外多糖條件的研究

    2022-03-18 02:22:50白芳芳張榮榮原倩倩于鈺杰李坤學馬玲
    中國調味品 2022年3期
    關鍵詞:鼠李糖胞外菌種

    白芳芳,張榮榮,原倩倩,于鈺杰,李坤學,馬玲

    (山西農業(yè)大學 食品科學與工程學院,山西 晉中 030801)

    硒是一種人體必需的微量元素[1],是谷胱甘肽過氧化物酶、硒磷酸酯合成酶等酶活性中心的組成成分[2-5],可改善機體免疫功能,增強抵抗力,保護心血管和心肌的健康,防癌抗癌,是重金屬的天然解毒劑等,并且能促進身體生長,保護視覺器官[6-8]。2017年中國營養(yǎng)學會推薦14歲以上居民每日攝入膳食硒量為60 μg[9-10],人體缺硒會引發(fā)克山病、癌癥、心腦血管疾病、甲狀腺功能障礙等[11]。

    硒多糖是多糖與硒的復合物,是有機硒化合物的一種,同時具有硒和多糖的生物活性,但天然的硒多糖并不多,僅存在于某些動植物和微生物中。利用乳酸菌對亞硒酸鈉的轉化,產物穩(wěn)定,毒性減弱[12],但需確定培養(yǎng)條件,乳酸菌硒多糖的產量與多種因素有關,例如碳源、氮源、培養(yǎng)時間、溫度、培養(yǎng)次數、亞硒酸鈉濃度等[13]。陳春[14]的研究表明桑葚多糖組分均具有較好的抗氧化活性,能夠抑制α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶的活性,降低機體對糖分的吸收速度,并且經過與硒結合后,抗氧化活性顯著增強,增加了組織細胞對葡萄糖的吸收能力,提高了人體葡萄糖耐量,從而具有降血糖的功能。硒化乳酸菌胞外多糖的免疫激活作用優(yōu)于胞外多糖,硒多糖可激活淋巴細胞的鈣通道,有效促進免疫功效,同時富硒胞外多糖還具有抗腫瘤的功效[15-16]。

    微生物可通過生物轉化將無機硒轉化為有利于人體吸收利用的有機硒及單質硒[17-19],有機硒化合物的毒性低[20],在激發(fā)免疫反應上比無機硒顯著[21],且吸收率更高。大量研究表明大多乳酸菌(如植物乳桿菌、嗜熱鏈球菌、鼠李糖乳桿菌、嗜酸乳桿菌、干酪乳桿菌等)都具有富硒能力,Calomme等[22]研究發(fā)現(xiàn)保加利亞乳桿菌將硒非特異性地摻入細菌蛋白質中,將無機硒生物轉化為硒代半胱氨酸。此外,乳酸菌對硒具有一定的耐受能力,趙愛兵[23]通過復合誘變選育高富硒嗜熱鏈球菌種,將菌株ZZ-CW4的富硒率提升至83.43%。楊鶴[24]對5種乳酸菌的富硒能力進行了研究,發(fā)現(xiàn)嗜酸乳桿菌08001的富硒能力較好,此外,還發(fā)現(xiàn)當不同乳酸菌進行復配時,富硒能力顯著高于單一菌株的富硒能力(P<0.05)。

    本試驗選用6種乳酸菌為研究對象,通過測定生長曲線確定各個菌種生長的穩(wěn)定期,加入不同濃度的亞硒酸鈉,以確定菌種的耐硒濃度。在菌種的不同耐硒濃度條件下,以3,3′-二氨基聯(lián)苯胺法測定菌種的富硒率,苯酚-硫酸法測定其胞外多糖含量,篩選出同時具有較高富硒率和胞外多糖含量的菌種,通過正交試驗優(yōu)化菌種富硒及產胞外多糖條件。

    1 材料與方法

    1.1 試驗材料

    1.1.1 菌種

    嗜熱鏈球菌(Streptococcusthermophilus)、動物雙歧桿菌(Bifidobacteriumanimalis)、鼠李糖乳桿菌(Lactobacillusrhamnosus)、嗜酸乳桿菌(Lactobacillusacidophilus)、副干酪乳桿菌(Lactobacillusparacasei)、植物乳桿菌(Lactobacillusplantarum):由山西農業(yè)大學畜產實驗室提供。

    1.1.2 培養(yǎng)基

    MRS培養(yǎng)基[25](牛肉膏10.0 g,蛋白胨10.0 g,葡萄糖20.0 g,酵母膏5.0 g,硫酸錳0.25 g,吐溫-80 1 mL, 磷酸氫二鉀2.0 g, 乙酸鈉5.0 g, 檸檬酸氫二銨2.0 g,硫酸鎂0.58 g,蒸餾水1000 mL)、M17培養(yǎng)基:均購自青島海博生物技術有限公司。

    1.2 試驗試劑

    鹽酸、硫酸、氫氧化鈉、苯酚、無水乙醇:天津風船化學試劑有限公司;亞硒酸鈉:成都麥卡?;び邢薰?;3,3′-二氨基聯(lián)苯胺(3,3'-diaminobenzidine,DAB):西格瑪奧德里奇有限公司;三氯乙酸:天津凱通化學試劑有限公司;試劑均為分析純。

    1.3 主要設備

    WFJT200型可見分光光度計 尤尼科儀器有限公司;HY-2調速多用振蕩器 常州國華電器有限公司;ST-2100 pH計 梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司;5801R冷凍離心機 德國Eppendorf公司;RE-52AA旋轉蒸發(fā)儀 上海亞榮生化儀器廠;BenchTop Pro真空冷凍干燥機 德祥科技有限公司。

    1.4 試驗方法

    1.4.1 菌種的活化[26]

    將嗜熱鏈球菌選用M17培養(yǎng)基在42 ℃條件下活化3代,嗜酸乳桿菌、鼠李糖乳桿菌、動物雙歧桿菌、副干酪乳桿菌和植物乳桿菌則選用MRS培養(yǎng)基在37 ℃條件下活化3代。

    1.4.2 菌種生長曲線的繪制[27]

    已活化的嗜熱鏈球菌在M17培養(yǎng)基中以接菌量3%進行培養(yǎng)24 h,每間隔2 h測定其在600 nm處的吸光度值,并繪制菌種生長曲線。其余5種菌種則在MRS培養(yǎng)基中同條件下進行培養(yǎng),并繪制OD600 nm生長曲線。

    1.4.3 乳酸菌耐硒濃度的確定

    根據各菌種的生長曲線,選擇在菌種對數期時加入1 mg/mL亞硒酸鈉溶液,使其在培養(yǎng)基中的濃度為0,5,10,15,20,25,30,35,40,45,50 μg/mL,培養(yǎng)24 h后觀察試管底部顏色變化。

    1.4.4 3,3′-二氨基聯(lián)苯胺法測定乳酸菌富硒含量

    1.4.4.1 標準曲線的繪制

    參考楊靖鵬等[28]的方法,并稍加修改。稱取0.1000 g亞硒酸鈉,與鹽酸按1∶1混合,溶解后定容至100 mL容量瓶中。吸取1 mL定容后的液體稀釋50倍,再吸取稀釋液0,2,4,6,8,10 mL至燒杯中,加蒸餾水使溶液體積為35 mL,分別加入5% EDTA-2Na溶液1 mL,調節(jié)溶液pH值至2.5,分別加入0.5% DAB溶液4 mL,暗反應30 min,使用5%的NaOH將溶液pH值調節(jié)至7.0。將上述溶液加至分液漏斗中,與10 mL甲苯溶液混合,振搖,靜置使溶液分層,取甲苯層在420 nm處測量吸光度值。

    1.4.4.2 樣品的測定

    取40 mL樣品,以4000 r/min離心30 min,吸取20 mL離心后的液體,加蒸餾水使溶液體積為35 mL,加入5% EDTA-2Na溶液2 mL,下同標曲。

    1.4.5 苯酚硫酸法測定乳酸菌產胞外多糖含量

    1.4.5.1 標準曲線的繪制

    參考李進等[29]的苯酚-硫酸法測胞外多糖含量,并繪制標準曲線。

    1.4.5.2 胞外多糖的提取

    將發(fā)酵液樣品沸水浴10 min,冷卻至室溫后加入濃度為80%的三氯乙酸使其終濃度為7%,4 ℃靜置過夜,10000 r/min離心15 min除去菌體和變性蛋白,抽濾除去雜質,旋蒸濃縮體積至原體積的1/3,再加入2~3倍體積的無水乙醇,靜置使多糖析出,將溶液以10000 r/min離心10 min,保留沉淀,加蒸餾水透析48 h收集多糖溶液進行胞外多糖含量的測定。

    1.4.6 乳酸菌富硒單因素試驗

    1.4.6.1 亞硒酸鈉濃度對乳酸菌富硒率及產胞外多糖的影響

    以接菌量為3%,培養(yǎng)時間為24 h,培養(yǎng)溫度為37 ℃,添加亞硒酸鈉濃度為5,7.5,10,12.5,15 μg/mL,測定乳酸菌的胞外多糖產量及富硒率。

    1.4.6.2 培養(yǎng)時間對乳酸菌富硒率及產胞外多糖的影響

    以接菌量為3%,添加亞硒酸鈉濃度為10%,培養(yǎng)溫度為37 ℃,培養(yǎng)時間為12,24,36,48,60 h,測定乳酸菌的胞外多糖產量及富硒率。

    1.4.6.3 接菌量對乳酸菌富硒率及產胞外多糖的影響

    以培養(yǎng)時間為24 h,添加亞硒酸鈉濃度為10%,培養(yǎng)溫度為37 ℃,接菌量為2%、3%、4%、5%、6%,測定乳酸菌的胞外多糖產量及富硒率。

    1.4.6.4 培養(yǎng)溫度對乳酸菌富硒率及產胞外多糖的影響

    以接菌量為3%,添加亞硒酸鈉濃度為10%,培養(yǎng)時間為24 h,培養(yǎng)溫度為33,35,37,39,41 ℃,測定乳酸菌的胞外多糖產量及富硒率。

    1.4.7 正交試驗優(yōu)化乳酸菌富硒條件

    由單因素試驗結果得出各因素適宜條件,以乳酸菌胞外多糖含量和富硒率為測定指標進行三因素三水平的正交試驗,設計見表1。

    表1 正交試驗的因素與水平Table 1 The factors and levels of orthogonal experiment

    1.5 數據統(tǒng)計分析

    試驗均重復3次,結果以平均值±標準差表示,使用Statistix 8.1進行數據顯著性分析,使用IBM SPSS Statistics 25進行數據統(tǒng)計分析,使用Origin 9.0繪圖軟件繪制圖。

    2 結果與分析

    2.1 菌種生長曲線

    6種乳酸菌的生長曲線見圖1。

    圖1 6種乳酸菌生長曲線Fig.1 The growth curves of six strains of lactic acid bacteria

    由圖1可知,鼠李糖乳桿菌、動物雙歧桿菌和植物乳桿菌在培養(yǎng)3 h后進入對數期,持續(xù)到10 h;嗜熱鏈球菌在培養(yǎng)4 h后進入對數期,持續(xù)到8 h;副干酪乳桿菌、嗜酸乳桿菌在培養(yǎng)4 h后進入對數期,持續(xù)到12 h。因此鼠李糖乳桿菌、動物雙歧桿菌和植物乳桿菌選擇在培養(yǎng)5 h后添加亞硒酸鈉,副干酪乳桿菌、嗜熱鏈球菌在培養(yǎng)6 h后添加亞硒酸鈉,嗜酸乳桿菌則在培養(yǎng)8 h后添加亞硒酸鈉。選擇對數期作為加硒時間,有利于菌體轉化無機硒和單質硒。宋照軍等[30]研究表明在嗜熱鏈球菌生長代謝旺盛時加入亞硒酸鈉,對菌體代謝活動抑制較弱,此時有著較高的轉化率。

    2.2 乳酸菌富硒顏色變化

    在6種乳酸菌生長對數期添加不同質量濃度的亞硒酸鈉培養(yǎng)24 h后,各種菌株的顏色變化為:植物乳桿菌在亞硒酸鈉質量濃度為10 μg/mL,嗜酸乳桿菌和嗜熱鏈球菌在亞硒酸鈉質量濃度為15 μg/mL,鼠李糖乳桿菌、動物雙歧桿菌和副干酪乳桿菌在亞硒酸鈉質量濃度為20 μg/mL時,顏色均為微紅。Xia等[31]研究發(fā)現(xiàn)乳酸菌在富硒過程中,將一部分無機硒合成硒代胱氨酸,而另一部分則可將無機硒還原成單質硒,試驗中菌體變紅,則是由于培養(yǎng)基中存在單質硒,說明菌體將部分亞硒酸鈉還原成單質硒。

    隨著亞硒酸鈉濃度的不斷增大,部分菌體的顏色逐漸加深,最終呈現(xiàn)深紅色,而嗜熱鏈球菌、鼠李糖乳桿菌和嗜酸乳桿菌耐硒濃度較低,在較高的亞硒酸鈉質量濃度下菌株已無法正常生長。黃秀錦[32]研究乳桿菌的富硒條件時,發(fā)現(xiàn)隨著亞硒酸鈉質量濃度的增加,生物量急劇下降,乳酸菌對硒的富集由生理性富集轉變?yōu)椴±硇愿患?。因此,選擇在0~20 μg/mL亞硒酸鈉質量濃度下培養(yǎng)的乳酸菌進行富硒率的測定。

    2.3 乳酸菌富硒率及產胞外多糖含量測定

    由3,3′-二氨基聯(lián)苯胺法測得的硒標準曲線為:y=0.0029x+0.093,R2=0.9919。由苯酚硫酸法測得的胞外多糖含量標準曲線為:y=0.0151x+0.0756,R2=0.9982。

    測定6種乳酸菌富硒率的結果見圖2。

    圖2 6種乳酸菌添加不同亞硒酸鈉質量濃度下的富硒率Fig.2 Se enrichment rates of six strains of lactic acid bacteria with different concentration of sodium selenite

    由圖2可知,在亞硒酸鈉質量濃度為0~20 μg/mL時,6種乳酸菌均具有富硒能力,而亞硒酸鈉質量濃度影響乳酸菌對硒的富集作用。隨著亞硒酸鈉質量濃度的增加,各乳酸菌的富硒率呈先增加后下降的趨勢。在亞硒酸鈉質量濃度為15 μg/mL時,鼠李糖乳桿菌的富硒率最大,為81.48%;當濃度超過15 μg/mL時,富硒率呈現(xiàn)整體下降趨勢,菌株的生長受到了抑制。徐穎等[33]的研究表明在亞硒酸鈉質量濃度為8~12 μg/mL時,乳酸菌的富硒率趨于平穩(wěn)。鼠李糖乳桿菌在各亞硒酸鈉濃度下的生長情況較其他菌種良好,選定鼠李糖乳桿菌作為耐硒菌種。

    測定6種乳酸菌添加不同亞硒酸鈉質量濃度下胞外多糖含量的結果見圖3。

    圖3 6種乳酸菌添加不同亞硒酸鈉質量濃度下的胞外多糖含量Fig.3 Extracellular polysaccharide content of six strains of lactic acid bacteria with different concentration of sodium selenite

    由圖3可知,亞硒酸鈉的添加對乳酸菌的胞外多糖含量有影響。當添加一定質量濃度的亞硒酸鈉時,各乳酸菌的胞外多糖含量均低于未硒化時;隨著亞硒酸鈉質量濃度的增大,嗜熱鏈球菌和鼠李糖乳桿菌的胞外多糖含量呈先上升后下降的趨勢,這可能是因為低濃度的亞硒酸鈉可促進這兩種乳酸菌的生長[34],當添加大于10 μg/mL的亞硒酸鈉時,菌株的生長受到抑制,多糖的含量降低。植物乳桿菌、動物雙岐桿菌、副干酪乳桿菌和嗜酸乳桿菌的生長受亞硒酸鈉的影響較大,胞外多糖含量隨著亞硒酸鈉質量濃度的增大不斷降低。當亞硒酸鈉質量濃度為10 μg/mL時,鼠李糖乳桿菌的胞外多糖產量為51.48 μg/mL,高于其余菌種。結合6種乳酸菌富硒率的結果,選擇鼠李糖乳桿菌作為產胞外多糖的耐硒菌種進行單因素試驗。

    2.4 單因素試驗結果

    2.4.1 亞硒酸鈉濃度對乳酸菌富硒率及產胞外多糖的影響

    由圖4可知,亞硒酸鈉質量濃度的變化影響鼠李糖乳桿菌的富硒率和胞外多糖含量。隨著亞硒酸鈉質量濃度的增大,菌種的富硒率和胞外多糖含量先增大后減小。當亞硒酸鈉濃度為12.5 μg/mL時,鼠李糖乳桿菌的富硒率達到最大值,為85.41%;當亞硒酸鈉為10 μg/mL時,鼠李糖乳桿菌的胞外多糖含量達到最大值,為52.21 μg/mL;隨著亞硒酸鈉濃度的增大,菌體的生長受到抑制,鼠李糖乳桿菌的富硒率和胞外多糖含量均顯著降低(P<0.05)。

    圖4 亞硒酸鈉濃度對乳酸菌富硒率及產胞外多糖的影響Fig.4 Effect of sodium selenite concentration on selenium enrichment rates and extracellular polysaccharide content of lactic acid bacteria

    2.4.2 培養(yǎng)時間對乳酸菌富硒率及產胞外多糖的影響

    由圖5可知,在培養(yǎng)12~24 h時,鼠李糖乳桿菌的富硒率(80.05%)顯著增加(P<0.05),而后隨著時間的增加,產量不斷下降。菌株胞外多糖的峰值(46.8 μg/mL)則在培養(yǎng)36 h時出現(xiàn),此后顯著下降(P<0.05)。培養(yǎng)時間過長,菌體細胞不斷衰亡,葡萄糖激酶、轉葡萄糖苷酶以及烯醇丙酮酸磷酸-糖磷酸轉移酶等的活性下降,不再合成和分泌胞外多糖[35],同時菌體長時間的培養(yǎng)會產生更多的單質硒,富硒率也出現(xiàn)顯著下降(P<0.05)。

    圖5 培養(yǎng)時間對乳酸菌富硒率及產胞外多糖的影響Fig.5 Effect of culture time on selenium enrichment rates and extracellular polysaccharide content of lactic acid bacteria

    2.4.3 接菌量對乳酸菌富硒及產胞外多糖的影響

    由圖6可知,隨著接菌量的增大,鼠李糖乳桿菌的富硒率和胞外多糖含量呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢。當接菌量過低時,菌體量不足,菌體對硒的富集能力以及合成胞外多糖能力較低,而接菌量過大時,菌體消耗過多的碳源,培養(yǎng)液的低pH影響酶的活性,不利于胞外多糖的積累[36]。當接菌量為5%時,菌株的富硒率和胞外多糖含量均達到最大值,分別為83.18%和59.03 μg/mL。因此,選擇接菌量為5%時,能使菌種同時具有較高的富硒率和胞外多糖含量。

    圖6 接菌量對乳酸菌富硒率及產胞外多糖的影響Fig.6 Effect of inoculation amount on selenium enrichment rates and extracellular polysaccharide content of lactic acid bacteria

    2.4.4 培養(yǎng)溫度對乳酸菌富硒率及產胞外多糖的影響

    由圖7可知,溫度是微生物生長及代謝活動的重要因素[37],不同的培養(yǎng)溫度對鼠李糖乳桿菌的富硒率和胞外多糖含量有所影響。鼠李糖乳桿菌生長的適宜溫度范圍為30~40 ℃,當溫度從33 ℃升至37 ℃時,菌株的富硒率和胞外多糖含量均顯著提升(P<0.05)且在37 ℃時達到最大值,分別為80.74%和51.26 μg/mL。在培養(yǎng)溫度較低時,菌體的活力下降,菌體的代謝能力弱,而當溫度高于37 ℃時,菌體的活力受到抑制,菌株的富硒率和胞外多糖含量下降。因此,選擇37 ℃為鼠李糖乳桿菌高富硒率和高產胞外多糖的溫度,確保菌種具有較高的活性。

    圖7 培養(yǎng)溫度對乳酸菌富硒率及產胞外多糖的影響Fig.7 Effect of culture temperature on selenium enrichment rates and extracellular polysaccharide content of lactic acid bacteria

    2.5 正交試驗結果

    由表2可知,當以鼠李糖乳桿菌胞外多糖含量為評價指標時,由R1B>R1A>R1C>R1D可知,4種因素對其含量的影響主次順序為接菌量>培養(yǎng)時間>亞硒酸鈉質量濃度>培養(yǎng)溫度。由試驗組結果可知胞外多糖含量最高的組合為A2B2C3D1,理論值最優(yōu)組合為A2B2C1D3。通過表3比較可知,組合A2B2C1D3優(yōu)于組合A2B2C3D1,所以以胞外多糖含量為評價指標時的最優(yōu)組合為培養(yǎng)時間24 h,接菌量5%,亞硒酸鈉質量濃度10 μg/mL,培養(yǎng)溫度37 ℃。

    表2 正交試驗結果Table 2 The results of orthogonal experiment

    表3 理論值與試驗值比較結果Table 3 Comparison of theoretical values and experimental values

    當以鼠李糖乳桿菌富硒率為評價指標時,由R2A>R2B>R2D>R2C可知,4種因素對其富硒率影響的主次順序為培養(yǎng)時間>接菌量>培養(yǎng)溫度>亞硒酸鈉質量濃度。由試驗組結果可知富硒率最大的組合為A2B1C2D3,理論值最優(yōu)組合為A2B2C2D3。通過對比試驗結果可知,組合A2B2C2D3優(yōu)于A2B1C2D3,所以當以富硒率為評價指標時的最優(yōu)組合為培養(yǎng)時間24 h,接菌量5%,亞硒酸鈉質量濃度12.5 μg/mL,培養(yǎng)溫度37 ℃。由于試驗需要對比研究鼠李糖乳桿菌胞外含量多糖與其硒多糖結構等的差異,所以以富硒率為主要參考指標,探究硒元素對胞外多糖結構等的影響,選定A2B2C2D3為試驗條件進行后續(xù)試驗,即培養(yǎng)時間為24 h,接菌量為5%,亞硒酸鈉質量濃度為12.5 μg/mL,培養(yǎng)溫度為37 ℃,以不含亞硒酸鈉的發(fā)酵液所產的鼠李糖乳桿菌胞外多糖作為對照組,與硒多糖進行對比研究。

    研究發(fā)現(xiàn)鼠李糖乳桿菌經過硒化后的胞外多糖含量和富硒率在培養(yǎng)條件范圍內呈現(xiàn)先增加后減少的趨勢,這與陳營等[38]研究發(fā)現(xiàn)乳酸菌在多糖高產量下菌體活性也最強,隨著培養(yǎng)時間的增加,培養(yǎng)基的pH降低,菌體活性減弱,結合多糖降解酶的作用,菌種多糖產量降低的結果相符。通過單因素和正交試驗得出的最佳試驗條件為培養(yǎng)時間24 h,接菌量5%,亞硒酸鈉質量濃度12.5 μg/mL,培養(yǎng)溫度37 ℃,而與實際試驗條件相比有誤差,這可能是由于乳酸菌多次傳代影響多糖產量有關。

    3 結論

    試驗選用了6種乳酸菌,由其生長曲線確定各菌的加硒時間,通過對比6種乳酸菌在不同亞硒酸鈉質量濃度下的顏色變化、富硒率變化和胞外多糖含量變化,選定鼠李糖乳桿菌作為最佳試驗菌種。通過單因素試驗確定了正交試驗的因素及水平,由正交試驗結果得到最佳試驗條件:培養(yǎng)時間24 h,接菌量5%,亞硒酸鈉質量濃度12.5 μg/mL,培養(yǎng)溫度37 ℃。此條件下,鼠李糖乳桿菌的富硒率為79.21%,胞外多糖含量為51.47 μg/mL。

    猜你喜歡
    鼠李糖胞外菌種
    硝化顆粒污泥胞外聚合物及信號分子功能分析
    螞蟻琥珀中發(fā)現(xiàn)新蘑菇菌種
    軍事文摘(2021年18期)2021-12-02 01:28:04
    生物膜胞外聚合物研究進展
    鼠李糖脂發(fā)酵液驅油性能研究
    生物表面活性劑鼠李糖脂研究概況
    水華期間藻類分層胞外聚合物與重金屬的相互作用機制研究
    銅綠假單胞菌半固態(tài)發(fā)酵生產鼠李糖脂
    以甘油為底物鼠李糖脂高產菌株的誘變選育
    手外傷感染的菌種構成及耐藥性分析
    食用菌液體菌種栽培技術的探討
    山西農經(2015年7期)2015-07-10 15:00:57
    丝袜美足系列| 亚洲美女黄片视频| 黄片小视频在线播放| 香蕉丝袜av| 国产极品粉嫩免费观看在线| 黄片播放在线免费| 黄色成人免费大全| 美女午夜性视频免费| 黑丝袜美女国产一区| 69精品国产乱码久久久| 欧美大码av| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 精品人妻1区二区| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 久久精品91无色码中文字幕| 中出人妻视频一区二区| 又黄又粗又硬又大视频| 国产在线观看jvid| 最近最新中文字幕大全免费视频| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 亚洲午夜理论影院| 日韩欧美国产一区二区入口| 久久久精品欧美日韩精品| 国产欧美日韩一区二区精品| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 国产91精品成人一区二区三区| 免费搜索国产男女视频| 成人18禁在线播放| 一边摸一边做爽爽视频免费| 在线永久观看黄色视频| 亚洲人成电影观看| 精品久久久久久久久久免费视频| 久久婷婷成人综合色麻豆| 久久精品国产清高在天天线| 高清毛片免费观看视频网站| 亚洲在线自拍视频| 日本黄色视频三级网站网址| 亚洲熟妇熟女久久| bbb黄色大片| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 他把我摸到了高潮在线观看| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 人妻久久中文字幕网| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 午夜免费成人在线视频| 免费看美女性在线毛片视频| 久久久久国产一级毛片高清牌| 国产熟女xx| 欧美一区二区精品小视频在线| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 9色porny在线观看| 成人av一区二区三区在线看| 亚洲无线在线观看| 十分钟在线观看高清视频www| 一本综合久久免费| 国产主播在线观看一区二区| 午夜免费激情av| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 成年版毛片免费区| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 国产精品av久久久久免费| 很黄的视频免费| 看片在线看免费视频| 国产精品1区2区在线观看.| 男人舔女人下体高潮全视频| 啪啪无遮挡十八禁网站| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 亚洲av片天天在线观看| 人人妻人人澡欧美一区二区 | 国产精品,欧美在线| 最近最新中文字幕大全免费视频| 日本三级黄在线观看| 男女床上黄色一级片免费看| 午夜老司机福利片| 一本大道久久a久久精品| 精品人妻1区二区| 俄罗斯特黄特色一大片| 久久午夜亚洲精品久久| 人妻久久中文字幕网| 欧美性长视频在线观看| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 亚洲色图av天堂| 精品一区二区三区四区五区乱码| 精品国产乱码久久久久久男人| 成人亚洲精品一区在线观看| a在线观看视频网站| 免费人成视频x8x8入口观看| 真人一进一出gif抽搐免费| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 久久中文字幕一级| 久热这里只有精品99| 好男人电影高清在线观看| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 99在线人妻在线中文字幕| 国产精品精品国产色婷婷| 久久精品国产亚洲av高清一级| 一区二区三区精品91| 国产精华一区二区三区| 很黄的视频免费| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 看片在线看免费视频| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 一区二区三区高清视频在线| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 亚洲 国产 在线| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 亚洲精品在线美女| 免费在线观看影片大全网站| 国产野战对白在线观看| 国产又爽黄色视频| 精品久久久久久久毛片微露脸| 亚洲国产欧美一区二区综合| 精品一区二区三区四区五区乱码| 午夜成年电影在线免费观看| 午夜日韩欧美国产| 色老头精品视频在线观看| 欧美激情久久久久久爽电影 | 国产精品久久久av美女十八| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 久久精品影院6| 男女下面插进去视频免费观看| 国产亚洲av嫩草精品影院| 在线av久久热| 精品第一国产精品| 亚洲av片天天在线观看| 又紧又爽又黄一区二区| 精品久久久久久,| 天堂√8在线中文| 人成视频在线观看免费观看| 最新在线观看一区二区三区| 一级毛片高清免费大全| 国产午夜福利久久久久久| 成人三级黄色视频| 一a级毛片在线观看| 亚洲国产看品久久| 天堂√8在线中文| 亚洲国产欧美一区二区综合| 日韩有码中文字幕| 日韩欧美在线二视频| 色综合婷婷激情| 老司机在亚洲福利影院| 日本五十路高清| 黄片小视频在线播放| 久久精品国产亚洲av高清一级| 操出白浆在线播放| 两个人看的免费小视频| 欧美国产精品va在线观看不卡| 欧美一区二区精品小视频在线| 国产成年人精品一区二区| 久久狼人影院| 操美女的视频在线观看| 亚洲男人的天堂狠狠| 亚洲午夜理论影院| 色哟哟哟哟哟哟| 亚洲第一av免费看| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区 | 欧美亚洲日本最大视频资源| 国产欧美日韩一区二区三| 久久中文字幕一级| 热99re8久久精品国产| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 激情在线观看视频在线高清| 久久亚洲精品不卡| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放 | 日本vs欧美在线观看视频| 日韩国内少妇激情av| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 久久午夜亚洲精品久久| 欧美不卡视频在线免费观看 | avwww免费| 一区二区三区精品91| 亚洲中文日韩欧美视频| 欧美午夜高清在线| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 一级毛片女人18水好多| 亚洲 欧美一区二区三区| 免费不卡黄色视频| 精品久久久久久久久久免费视频| 两个人视频免费观看高清| 夜夜爽天天搞| 成人国语在线视频| 国产精品亚洲美女久久久| 免费在线观看影片大全网站| 亚洲视频免费观看视频| 夜夜爽天天搞| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 亚洲精品av麻豆狂野| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 一a级毛片在线观看| 久久精品国产亚洲av高清一级| 久久久国产成人精品二区| 中文字幕高清在线视频| 亚洲一区二区三区色噜噜| 91麻豆精品激情在线观看国产| 日本a在线网址| 一边摸一边抽搐一进一小说| 亚洲人成伊人成综合网2020| 欧美中文综合在线视频| 日日夜夜操网爽| 老熟妇仑乱视频hdxx| 大陆偷拍与自拍| 国产国语露脸激情在线看| 国内精品久久久久精免费| 亚洲精品在线美女| 久久久久久国产a免费观看| 99久久精品国产亚洲精品| 中文字幕高清在线视频| 大型黄色视频在线免费观看| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 男人操女人黄网站| 脱女人内裤的视频| 最好的美女福利视频网| 91成年电影在线观看| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 9191精品国产免费久久| 亚洲中文字幕日韩| 在线观看一区二区三区| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 精品熟女少妇八av免费久了| 精品第一国产精品| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 性色av乱码一区二区三区2| 热99re8久久精品国产| 国内精品久久久久精免费| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 精品国产一区二区三区四区第35| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 真人一进一出gif抽搐免费| 亚洲在线自拍视频| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 变态另类丝袜制服| 99在线视频只有这里精品首页| 中文字幕久久专区| 国产又爽黄色视频| 免费不卡黄色视频| 男人舔女人的私密视频| 久久久久九九精品影院| av免费在线观看网站| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 国产av一区在线观看免费| 国产三级在线视频| 亚洲人成电影免费在线| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 精品免费久久久久久久清纯| 看片在线看免费视频| 久久天堂一区二区三区四区| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 成人国产一区最新在线观看| av超薄肉色丝袜交足视频| 91精品国产国语对白视频| 日韩欧美一区视频在线观看| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 欧美+亚洲+日韩+国产| 亚洲人成电影观看| 色老头精品视频在线观看| avwww免费| 18美女黄网站色大片免费观看| 欧美一级毛片孕妇| 欧美黄色淫秽网站| 国产国语露脸激情在线看| www日本在线高清视频| 岛国视频午夜一区免费看| 精品熟女少妇八av免费久了| 女性被躁到高潮视频| 啦啦啦 在线观看视频| 免费在线观看亚洲国产| 超碰成人久久| 午夜福利欧美成人| 丝袜人妻中文字幕| 欧美日本视频| 深夜精品福利| 女人被狂操c到高潮| 国产亚洲av高清不卡| 香蕉丝袜av| 久久人人爽av亚洲精品天堂| av中文乱码字幕在线| 欧美成人性av电影在线观看| 我的亚洲天堂| 精品久久久久久,| 久久午夜亚洲精品久久| 无限看片的www在线观看| 精品国产美女av久久久久小说| 欧美日韩福利视频一区二区| 又黄又爽又免费观看的视频| 日本精品一区二区三区蜜桃| 亚洲一区高清亚洲精品| 国产精品免费视频内射| 一二三四社区在线视频社区8| aaaaa片日本免费| www日本在线高清视频| 亚洲精品粉嫩美女一区| 欧美黄色淫秽网站| 一级a爱视频在线免费观看| 男女床上黄色一级片免费看| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 一本综合久久免费| 免费少妇av软件| 国产成人精品久久二区二区91| 国产片内射在线| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 国产精品九九99| 欧美丝袜亚洲另类 | 欧美大码av| 精品电影一区二区在线| 黄频高清免费视频| 国产片内射在线| 好男人电影高清在线观看| 给我免费播放毛片高清在线观看| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 啪啪无遮挡十八禁网站| 9热在线视频观看99| 男女之事视频高清在线观看| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 精品久久久久久久人妻蜜臀av | 亚洲,欧美精品.| 美女 人体艺术 gogo| 亚洲成人免费电影在线观看| 国产精品久久视频播放| 久久国产精品影院| a级毛片在线看网站| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放 | 黑人操中国人逼视频| 国产一区二区三区综合在线观看| 国产精品一区二区在线不卡| 丰满的人妻完整版| 99久久综合精品五月天人人| 美女大奶头视频| 夜夜夜夜夜久久久久| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 大型av网站在线播放| 校园春色视频在线观看| 欧美丝袜亚洲另类 | 久久人妻福利社区极品人妻图片| 免费不卡黄色视频| 757午夜福利合集在线观看| 国产欧美日韩一区二区三| 操出白浆在线播放| 岛国在线观看网站| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 夜夜夜夜夜久久久久| 亚洲欧美激情在线| 黑丝袜美女国产一区| 亚洲第一电影网av| 欧美一区二区精品小视频在线| 久久久久久久精品吃奶| 免费在线观看日本一区| 在线视频色国产色| 一本久久中文字幕| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 欧美日本中文国产一区发布| 成人亚洲精品av一区二区| 日本免费一区二区三区高清不卡 | 99精品在免费线老司机午夜| 亚洲精品av麻豆狂野| 美国免费a级毛片| 欧美日本中文国产一区发布| 最新美女视频免费是黄的| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 可以在线观看的亚洲视频| 一边摸一边做爽爽视频免费| av视频在线观看入口| 日日爽夜夜爽网站| 男女做爰动态图高潮gif福利片 | 91老司机精品| 国产又爽黄色视频| x7x7x7水蜜桃| 久久婷婷成人综合色麻豆| av超薄肉色丝袜交足视频| 精品久久久精品久久久| 欧美日本中文国产一区发布| 99久久综合精品五月天人人| 18禁观看日本| 日韩大码丰满熟妇| 精品卡一卡二卡四卡免费| 欧美黑人欧美精品刺激| 老司机福利观看| 一级黄色大片毛片| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区 | 成熟少妇高潮喷水视频| 18禁观看日本| 制服诱惑二区| 亚洲熟女毛片儿| 久久人妻熟女aⅴ| 啦啦啦韩国在线观看视频| 欧美黑人精品巨大| 老司机午夜十八禁免费视频| 一区二区三区激情视频| 亚洲av第一区精品v没综合| 国产1区2区3区精品| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 精品久久久久久成人av| 亚洲少妇的诱惑av| 1024视频免费在线观看| 亚洲一区二区三区不卡视频| 露出奶头的视频| 看黄色毛片网站| 俄罗斯特黄特色一大片| 美女国产高潮福利片在线看| 99riav亚洲国产免费| 一边摸一边做爽爽视频免费| 久久香蕉激情| 国产三级在线视频| 校园春色视频在线观看| 国产精品,欧美在线| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 国产一区二区在线av高清观看| 日日夜夜操网爽| 久久久国产精品麻豆| 99国产精品99久久久久| 欧美日韩乱码在线| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| a在线观看视频网站| 欧美日韩黄片免| 免费在线观看黄色视频的| 18禁观看日本| 欧美中文日本在线观看视频| 久久婷婷人人爽人人干人人爱 | 长腿黑丝高跟| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看 | 成熟少妇高潮喷水视频| 久久精品国产清高在天天线| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 国产一区二区激情短视频| 久久精品国产综合久久久| 18禁美女被吸乳视频| 一个人观看的视频www高清免费观看 | 亚洲国产看品久久| 最新美女视频免费是黄的| 老汉色av国产亚洲站长工具| 91在线观看av| 国产亚洲精品久久久久5区| 曰老女人黄片| 久久久久九九精品影院| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 成人国语在线视频| 国产免费av片在线观看野外av| 亚洲在线自拍视频| 久久久精品欧美日韩精品| 国产精品乱码一区二三区的特点 | 纯流量卡能插随身wifi吗| 欧美色欧美亚洲另类二区 | 国产成人av激情在线播放| 久久精品影院6| 在线国产一区二区在线| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放 | av免费在线观看网站| 成人手机av| 成人国产一区最新在线观看| 婷婷丁香在线五月| 午夜福利,免费看| 看片在线看免费视频| 制服丝袜大香蕉在线| 美女国产高潮福利片在线看| 青草久久国产| av中文乱码字幕在线| 色av中文字幕| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 在线国产一区二区在线| 日韩av在线大香蕉| av电影中文网址| 国产成人精品久久二区二区91| 中文亚洲av片在线观看爽| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 国产在线观看jvid| 精品第一国产精品| 久久久精品欧美日韩精品| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 国产精品久久视频播放| 日本免费一区二区三区高清不卡 | 亚洲人成伊人成综合网2020| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 欧美久久黑人一区二区| 成在线人永久免费视频| 在线观看66精品国产| 中文字幕人妻熟女乱码| 日本欧美视频一区| 91老司机精品| 免费看美女性在线毛片视频| 国产亚洲av高清不卡| 日本一区二区免费在线视频| 亚洲国产看品久久| 啦啦啦观看免费观看视频高清 | 国语自产精品视频在线第100页| 久久午夜亚洲精品久久| 波多野结衣av一区二区av| 国产亚洲欧美精品永久| 午夜福利,免费看| 亚洲午夜理论影院| 麻豆av在线久日| 亚洲国产高清在线一区二区三 | 亚洲欧美日韩高清在线视频| 欧美在线黄色| 少妇的丰满在线观看| 欧美+亚洲+日韩+国产| 国产伦人伦偷精品视频| 亚洲av成人一区二区三| 欧美日本中文国产一区发布| 中文字幕久久专区| www.999成人在线观看| 久久久久精品国产欧美久久久| av欧美777| 午夜久久久在线观看| 97人妻精品一区二区三区麻豆 | 中国美女看黄片| 一级a爱视频在线免费观看| 亚洲黑人精品在线| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 51午夜福利影视在线观看| 超碰成人久久| а√天堂www在线а√下载| 午夜福利影视在线免费观看| 黄色视频,在线免费观看| 91在线观看av| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 国产成人免费无遮挡视频| 国产三级黄色录像| 国产99久久九九免费精品| 91精品三级在线观看| 91老司机精品| 亚洲熟妇熟女久久| 精品高清国产在线一区| 日本 欧美在线| 久久人人97超碰香蕉20202| 亚洲男人的天堂狠狠| 国产精品九九99| 亚洲av五月六月丁香网| 一进一出抽搐动态| 免费少妇av软件| 我的亚洲天堂| 国产高清有码在线观看视频 | 啦啦啦韩国在线观看视频| 亚洲av第一区精品v没综合| 亚洲精品国产区一区二| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 亚洲激情在线av| 色播在线永久视频| 十八禁人妻一区二区| 男女午夜视频在线观看| 久久午夜综合久久蜜桃| 黑丝袜美女国产一区| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 女人精品久久久久毛片| 深夜精品福利| www日本在线高清视频| 69精品国产乱码久久久| 亚洲片人在线观看| 久久 成人 亚洲| 日韩av在线大香蕉| 成人国产一区最新在线观看| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| avwww免费| 亚洲中文日韩欧美视频| 日韩高清综合在线| 欧美av亚洲av综合av国产av| 脱女人内裤的视频| 老鸭窝网址在线观看| 神马国产精品三级电影在线观看 | 午夜福利成人在线免费观看| 美女高潮到喷水免费观看| 9热在线视频观看99| 美女 人体艺术 gogo| 国产私拍福利视频在线观看| 欧美乱色亚洲激情| 69精品国产乱码久久久| 久热这里只有精品99| 国产亚洲精品av在线| 91国产中文字幕| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 啦啦啦韩国在线观看视频| 日本 欧美在线| 男女午夜视频在线观看| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 免费搜索国产男女视频| 婷婷精品国产亚洲av在线| 欧美久久黑人一区二区| 国产成人精品久久二区二区91| 成人国产一区最新在线观看| 精品久久久久久成人av| 久久中文看片网| 国产精品乱码一区二三区的特点 | 国产一区在线观看成人免费| 精品国内亚洲2022精品成人| 国产精品久久视频播放| 亚洲成人精品中文字幕电影| 我的亚洲天堂| 电影成人av| 国产亚洲精品第一综合不卡| 精品一区二区三区av网在线观看| 欧美在线一区亚洲| 日本五十路高清| 日韩大尺度精品在线看网址 | 黄色 视频免费看| 亚洲国产精品久久男人天堂| 亚洲人成77777在线视频| 亚洲中文字幕日韩| 午夜福利成人在线免费观看| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 不卡一级毛片| 午夜福利成人在线免费观看| 一个人免费在线观看的高清视频| 妹子高潮喷水视频| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 俄罗斯特黄特色一大片| 少妇粗大呻吟视频| 国产人伦9x9x在线观看| 狠狠狠狠99中文字幕| 乱人伦中国视频| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 中亚洲国语对白在线视频|