超高效液相色譜-四極桿/靜電場軌道阱高分辨質(zhì)譜快速測定乳及乳制品中21種真菌毒素

何卓霖，穆 蕾 ，王 濤，王 亮, ，謝云峰

（1.新疆大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，新疆烏魯木齊 830046；2.中糧營養(yǎng)健康研究院，營養(yǎng)健康與食品安全北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 102209）

真菌毒素是由產(chǎn)毒真菌在一定條件產(chǎn)生的次級代謝產(chǎn)物，大多數(shù)有致癌、致畸、致突變的作用，對人體及動(dòng)物的健康產(chǎn)生極大影響[1-4]。乳及乳制品中的真菌毒素來源于動(dòng)物食用被真菌毒素污染的飼料，這些毒素通過食物鏈直接或間接地危害人和動(dòng)物的健康，如奶牛食用被黃曲霉毒素、伏馬毒素和嘔吐毒素等真菌毒素污染的飼料后，在擠出的鮮奶中可檢測到相應(yīng)的真菌毒素及其代謝物[5-8]。此外，以乳類和乳蛋白為原料的各種添加制品也有真菌毒素污染的風(fēng)險(xiǎn)，如谷物或水果添加乳制品。Yang等[9]利用穩(wěn)定同位素結(jié)合液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)建立了測定液態(tài)奶中17種真菌毒素的檢測方法，并在谷物和紅棗添加液態(tài)奶中檢測到黃曲霉毒素M1、脫氧雪腐鐮烯醇、伏馬菌素B1和B2、玉米赤霉烯酮等毒素。Mao等[10]利用超高效液相色譜-四極桿靜電場軌道阱質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)測定生牛乳中的真菌毒素，研究表明生牛乳中除了含有國家限量的黃曲霉毒素M1外，還有玉米赤霉烯酮及其衍生物以及赭曲霉毒素等。目前我國、美國和歐盟等國家和組織都對乳及乳制品中黃曲霉毒素M1設(shè)定了較為嚴(yán)格的限量標(biāo)準(zhǔn)[11-13]，但均未對其它種類毒素作明確規(guī)定，存在目標(biāo)物種類覆蓋不全面和忽視了毒素衍生物的潛在危害等問題。為更好的監(jiān)測乳及乳制品中的真菌毒素，開發(fā)簡單、快速、準(zhǔn)確的多真菌毒素前處理和檢測方法非常有必要。

乳及乳制品基質(zhì)復(fù)雜并且各真菌毒素結(jié)構(gòu)差異較大，因此對樣品前處理以及檢測技術(shù)要求較高。目前常用的前處理方法有固相萃取、免疫親和柱凈化和QuEChERS法等，其中免疫親和柱凈化具有高效性、專一性和基質(zhì)干擾小等優(yōu)點(diǎn)而應(yīng)用廣泛，但成本較高且無法對多種真菌毒素同時(shí)凈化[14-17]。儀器方法主要有高效液相色譜法、高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法、氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法等[18-21]，高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢測靈敏度高，抗干擾能力強(qiáng)，可對食品中的真菌毒素進(jìn)行準(zhǔn)確定量因此應(yīng)用較廣泛。近年來，由于靜電場軌道阱高分辨質(zhì)譜具有高通量、高選擇性和高分辨率等優(yōu)勢，能夠在超高分辨率下測定化合物及其碎片離子的精確分子質(zhì)量并且能夠有效降低基質(zhì)干擾，適用于多種目標(biāo)化合物的篩查和定量研究[22-24]，在此基礎(chǔ)上建立的超高效液相色譜-高分辨質(zhì)譜聯(lián)用分析技術(shù)在痕量多組分分析檢測方面得到越來越多的應(yīng)用[25-26]，然而應(yīng)用于乳制品中多真菌毒素檢測方法的報(bào)道較少，因此，開發(fā)適用于乳及乳制品中多真菌毒素的篩查技術(shù)具有非常重要的現(xiàn)實(shí)意義和應(yīng)用價(jià)值。

乳及乳制品中含有大量蛋白質(zhì)、脂質(zhì)以及水分會(huì)對真菌毒素檢測造成干擾，快速、高效的前處理方法是檢測乳及乳制品中真菌毒素的關(guān)鍵，利用多功能凈化柱的前處理方法能夠有效去除蛋白質(zhì)和脂質(zhì)干擾，減少樣品處理時(shí)間。本研究圍繞液態(tài)和粉狀乳及乳制品，針對其中蛋白質(zhì)、脂質(zhì)、乳糖、水分等的含量特點(diǎn)，通過優(yōu)化萃取溶液和篩選多功能凈化柱結(jié)合超高效液相色譜-四極桿/靜電場軌道阱高分辨質(zhì)譜，建立乳及乳制品中21種真菌毒素快速測定的方法，該方法具有前處理簡單、分析時(shí)間短和靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)，可實(shí)現(xiàn)乳及乳制品中多真菌毒素的快速測定，為真菌毒素的有效監(jiān)測提供有力的技術(shù)支持。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

黃曲霉毒素混合標(biāo)準(zhǔn)液：黃曲霉毒素B1（AFTB1）2 μg/mL、黃曲霉毒素 B2（AFTB2） 0.5 μg/mL、黃曲霉毒素 G1（AFTG1） 2 μg/mL、黃曲霉毒素 G2（AFTG2）0.5 μg/mL、黃曲霉毒素 M1（AFTM1） 0.5 μg/mL、黃曲霉毒素 M2（AFTM2） 10 μg/mL；嘔吐毒素混合標(biāo)準(zhǔn)液：嘔吐毒素（DON） 100 μg/mL、3-乙酰脫氧雪腐鐮刀菌烯醇（3-AC-DON） 100 μg/mL、15-乙酰脫氧雪腐鐮刀菌烯醇（15-AC-DON） 100 μg/mL、T-2毒素（T-2） 100 μg/mL、HT-2 毒素（HT-2） 100 μg/mL、伏馬毒素 B1（FB1） 50 μg/mL、伏馬毒素 B2（FB2） 50 μg/mL、伏馬毒素 B3（FB3） 50 μg/mL、赭曲霉毒素A（OTA） 10 μg/mL、赭曲霉毒素 B（OTB） 10 μg/mL美國Romer公司；玉米赤霉烯酮混合標(biāo)準(zhǔn)溶液：玉米赤霉酮（ZAN） 100 μg/mL、赤霉烯酮（ZEN）100 μg/mL、α-赤霉醇（α-ZAL） 100 μg/mL、β-玉米赤霉醇（β-ZAL） 100 μg/mL、α-玉米赤霉烯醇（α-ZEL）100 μg/mL、β-玉米赤霉烯醇（β-ZEL） 100 μg/mL上海安譜科技實(shí)驗(yàn)股份有限公司；實(shí)驗(yàn)用液態(tài)乳制品（如純牛奶、酸奶、水果和谷物添加奶等）和粉狀乳制品（如嬰幼兒配方乳粉、脫脂乳粉等） 均購自市場超市；甲醇、乙腈 色譜純，美國sigma公司；甲酸色譜純，霍尼韋爾貿(mào)易（上海）有限公司；甲酸 98%，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；超純水 Mili Q純水機(jī)制得。

Captiva-EMR Lipid 凈化柱（600 mg，6 cc） 安捷倫科技有限公司；Oasis PRIME-HLB 凈化柱（200 mg，6 cc）、CORTECS-UPLC-C18柱（2.1 mm×100 mm，1.6 μm） 上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司；Accucore C18柱（2.1 mm×100 mm，2.6 μm） 美國Thermo Fisher Scientific 公司；Q-Exactive 四極桿/靜電場軌道阱高分辨率質(zhì)譜儀配備Transcend Ⅰ 液相色譜儀 美國Thermo Fisher Scientific公司；4-20R臺(tái)式高速冷凍離心機(jī) 湖南可成儀器設(shè)備有限公司；ZX-DC型氮吹儀 北京眾信佳儀科技有限公司；Milli-Q Advantage超純水系統(tǒng) 美國Millipore公司；Dragon Lab QL902渦旋振蕩器、SB-120DTN超聲波清洗機(jī) 寧波新芝生物科技股份有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液的配制 分別移取一定體積的21種真菌毒素儲(chǔ)備液于5 mL容量瓶中，加入適量80%乙腈水溶液稀釋并定容至刻度線，得到21種真菌毒素混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液，各真菌毒素的濃度見表1，充分混勻后于-20 ℃冰箱內(nèi)避光保存。

表1 真菌毒素混合標(biāo)準(zhǔn)中間液濃度Table 1 Concentration of mycotoxins mixed standard intermediate solution

1.2.2 樣品前處理 準(zhǔn)確稱取（2.00±0.05）g 液態(tài)或粉狀乳及乳制品，置于50 mL聚丙烯離心管中，粉狀樣品先加入2 mL水后渦旋振蕩使其充分混勻，所有樣品再加入 8 mL乙腈-甲酸（98:2，v:v）溶液，渦旋1 min，30 ℃、50 赫茲超聲提取 20 min，8000 r/min離心10 min，取上清液于10 mL聚丙烯離心管中，渦旋30 s，取5 mL上清液過Captiva-EMR Lipid凈化柱凈化，加正壓，控制流速在每秒3滴，使提取液流出凈化柱，加入 1 mL 乙腈-水（80:20，v:v）淋洗液洗脫，加正壓吹干，合并淋洗液，置于40 ℃水浴中氮?dú)獯抵两?，加?250 μL 乙腈-水-甲酸（30:70:0.1，v:v:v）復(fù)溶，渦旋振蕩1 min，超聲5 min，將復(fù)溶液轉(zhuǎn)移至2 mL離心管中，12000 r/min離心10 min，取上清液于帶有內(nèi)插管的進(jìn)樣瓶中。

加標(biāo)陰性樣品前處理：準(zhǔn)確稱取（2.00±0.05）g液態(tài)或粉狀乳及乳制品，置于50 mL聚丙烯離心管中，粉狀樣品先加入2 mL水后渦旋振蕩使其充分混勻，根據(jù)需要加入一定體積的混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液，其余步驟均與上述步驟相同，利用加標(biāo)陰性樣品進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證。

1.2.3 色譜條件 21種真菌毒素依據(jù)其化學(xué)性質(zhì)分別在正、負(fù)離子模式下進(jìn)行數(shù)據(jù)采集，色譜條件如下：色譜柱：CORTECS-UPLC-C18柱（2.1 mm×100 mm，1.6 μm）；流速：0.2 mL/min；進(jìn)樣量：10 μL；流動(dòng)相A：含0.1%甲酸水溶液；流動(dòng)相B：甲醇。梯度洗脫條件如表2。

表2 梯度洗脫程序Table 2 Gradient elution program

1.2.4 質(zhì)譜條件 離子源：加熱電噴霧離子（HESI）源；掃描方式：正/負(fù)離子模式掃描；采集模式：全掃描/數(shù)據(jù)依賴二級掃描（Full MS/ddMS2）；離子源溫度：350 ℃；毛細(xì)管加熱溫度：320 ℃；鞘氣（N2）流速：40 unit；輔助氣（N2）流速 15 unit；噴霧電壓：（±）3.00 kV；Full MS掃描分辨率（R）：70000；自動(dòng)增益控制進(jìn)入軌道阱中的離子數(shù)（AGC target）：3×106；最大駐留時(shí)間：100 ms；掃描范圍：100～1000 m/z；ddMS2 掃描分辨率（R）：17500；自動(dòng)增益控制進(jìn)入軌道阱中的離子數(shù)（AGC target）：1×105；最大駐留時(shí)間：50 ms；Top N：5；碰撞池能量（NCE）：20、30、40；實(shí)驗(yàn)室所用氣體均為高純氮?dú)狻?/p>

1.2.5 定性定量方法 結(jié)合高分辨質(zhì)譜的精確質(zhì)量數(shù)，采用保留時(shí)間和兩個(gè)碎片離子進(jìn)行定性，一級母離子進(jìn)行定量，21種真菌毒素的保留時(shí)間、分子離子準(zhǔn)確質(zhì)量以及碎片離子準(zhǔn)確質(zhì)量等見表3。

表3 21種真菌毒素的保留時(shí)間和選擇離子的準(zhǔn)確分子量Table 3 Retention time of 21 mycotoxins and accurate molecular weight of selected ions

1.3 數(shù)據(jù)庫的建立

精確吸取“1.2.1”標(biāo)準(zhǔn)中間溶液 200 μL，置于帶內(nèi)插管的進(jìn)樣瓶中，按質(zhì)譜色譜條件進(jìn)樣，通過一級全掃描獲得目標(biāo)物的精確質(zhì)量數(shù)和保留時(shí)間，同時(shí)結(jié)合數(shù)據(jù)依賴性二級掃描模式獲得目標(biāo)物的二級特征質(zhì)譜圖和二級碎片離子，將信息輸入軟件TraceFinder中，建立質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫，利用目標(biāo)物的精確質(zhì)量數(shù)和保留時(shí)間進(jìn)行定量和定性，同時(shí)結(jié)合二級掃描質(zhì)譜圖為準(zhǔn)確定性提供保障。

2 結(jié)果與分析

2.1 提取條件的優(yōu)化

針對液態(tài)和粉狀的乳及乳制品中蛋白質(zhì)、脂質(zhì)、乳糖、水分等的含量特點(diǎn)，分別優(yōu)化萃取液配比以實(shí)現(xiàn)21種真菌毒素同時(shí)提取。對于粉狀乳制品，分別使用 10 mL 乙腈:水:甲酸=80:18:2（v:v:v）的提取液提取和先加入2 mL水溶解樣品再加入8 mL乙腈:甲酸=98:2（v:v）提取，21種真菌毒素的回收率如圖1所示。相比粉狀乳制品，液態(tài)樣品水分含量較高，分別考察使用 8 mL乙腈:水:甲酸=80:18:2（v:v:v）的提取液和 8 mL 乙腈:甲酸=98:2（v:v）提取，21種真菌毒素的回收率如圖2。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，對于粉狀乳制品應(yīng)先加2 mL水溶解再加8 mL乙腈:甲酸=98:2（v:v）提取，液態(tài)樣品直接加入8 mL乙腈:甲酸=98:2（v:v）提取即可，以上兩種針對不同類型乳制品的提取方法均可實(shí)現(xiàn)21種真菌毒素的統(tǒng)一前處理并保證各毒素目標(biāo)物回收率均滿足要求。

圖1 提取液對粉狀乳制品中各真菌毒素回收率的影響Fig.1 Effects of extract on the recovery rate of mycotoxins in powdered dairy products

圖2 提取液對液態(tài)乳制品中各真菌毒素回收率的影響Fig.2 Effects of extract on the recovery rate of mycotoxins in liquid dairy products

2.2 凈化柱的篩選

乳及乳制品經(jīng)提取液提取后仍含有大量的蛋白質(zhì)、脂質(zhì)、礦物質(zhì)等，會(huì)對真菌毒素的檢測造成干擾，且不同真菌毒素的理化性質(zhì)相差較大，因此選擇合適的凈化方式非常重要。目前針對多種真菌毒素同時(shí)凈化的方法主要有QuEChER法[5,27]和多功能凈化柱法[5,28]，QuEChER法需要幾種凈化劑單一或組合對樣品進(jìn)行凈化，存在對部分真菌毒素的吸附作用容易造成毒素?fù)p失[22,27]；而常用的MycoSpin 400多功能凈化柱填料對于赭曲霉毒素A、伏馬毒素FB1、伏馬毒素FB2及3-乙酰基脫氧雪腐鐮刀菌烯醇等毒素具有吸附作用，使得毒素的回收率降低，影響定量結(jié)果[28-29]。本研究選取兩種多功能凈化柱并考察其對于21種真菌毒素的凈化效率，Captiva-EMR Lipid凈化柱具有較高選擇性，能夠高效去除蛋白質(zhì)和脂質(zhì)，且Captiva-EMR Lipid凈化柱不需活化，減少樣品處理時(shí)間[29-30]；Oasis PRIME-HLB一種新型的反相固相萃?。⊿PE）小柱，不需要平衡活化可直接上樣，屬于過濾型去除雜質(zhì)的固相小柱，極大簡化SPE流程[31-32]。比較使用Captiva-EMR Lipid柱和Oasis PRIME-HLB柱的凈化后響應(yīng)信號(hào)，發(fā)現(xiàn)使用Captiva-EMR Lipid柱凈化21種真菌毒素的回收率均可滿足要求，兩種凈化柱對真菌毒素回收率影響結(jié)果如圖3所示。

圖3 不同凈化柱對各真菌毒素回收率的影響Fig.3 Effects of different purification columns on the recovery rate of each mycotoxin

2.3 色譜條件的優(yōu)化

2.3.1 色譜柱的選擇 對比CORTECS-UPLC-C18柱（2.1 mm×100 mm，1.6 μm）與Accucore C18柱（2.1 mm×100 mm，2.6 μm）的分離效果。結(jié)果表明， CORTECS-UPLC-C18柱峰型更加對稱，且色譜柱填料粒徑較小，能達(dá)到較好的分離效果。

2.3.2 流動(dòng)相的優(yōu)化 分別考察在水相中添加0.1%甲酸和5 mmol/L甲酸銨的分離效果。結(jié)果表明，目標(biāo)化合物在0.1%甲酸水-甲醇流動(dòng)相中分離度較好。在流動(dòng)相中加入適量的甲酸可以提高分析物的離子響應(yīng)強(qiáng)度和分離度。以0.1%甲酸水-甲醇流動(dòng)相時(shí)，各目標(biāo)化合物的質(zhì)譜響應(yīng)強(qiáng)度高、保留時(shí)間穩(wěn)定，峰型較好。21種真菌毒素提取離子流色譜圖見圖4。

圖4 21種真菌毒素提取離子流色譜圖Fig.4 Extracted ion current chromatogram of the 21 mycotoxins

2.4 質(zhì)譜條件的優(yōu)化

2.4.1 噴霧電壓的優(yōu)化 離子源采用HESI源，對比了2.8、3.0、3.5 kV的噴霧電壓對目標(biāo)化合物電離程度的影響。結(jié)果表明，噴霧電壓為3.0 kV時(shí)，目標(biāo)化合物較易電離，在此噴霧電壓條件下有很好的離子化效率。

2.4.2 碰撞能量的優(yōu)化 能量直接影響目標(biāo)化合物二級譜圖信息的豐富程度。碰撞能量低，目標(biāo)化合物分子離子的響應(yīng)強(qiáng)度高，但得到的二級碎片信息少。增大碰撞能量，會(huì)導(dǎo)致目標(biāo)化合物分子離子的響應(yīng)逐漸減弱，碎片離子增多。對于不同正、負(fù)離子，本實(shí)驗(yàn)考察了10～50和-10～-50 eV碰撞電壓的影響。為得到信息更為全面的MS/MS譜圖，選取三種不同碰撞能采集的譜圖進(jìn)行疊加，作為最終的MS/MS譜圖，最終選取的正離子模式的碰撞能為20、30、40 eV，負(fù)離子模式的碰撞能為-20、-30、-40 eV。

2.4.3 采集模式的優(yōu)化 在優(yōu)化質(zhì)譜采集參數(shù)時(shí)，同時(shí)考察21種毒素在正、負(fù)離子模式下的響應(yīng)值，發(fā)現(xiàn)6種黃曲霉毒素、3種伏馬毒素、2種脫氧雪腐鐮刀菌烯醇類以及T-2與HT-2毒素在正離子模式響應(yīng)較強(qiáng)，其余毒素則在負(fù)離子模式下響應(yīng)較強(qiáng)，并且T-2與HT-2毒素的母離子[M+NH4]+峰響應(yīng)較[M+H]+峰更強(qiáng)。

2.5 基質(zhì)效應(yīng)的影響

通過空白基質(zhì)配標(biāo)校準(zhǔn)曲線的斜率與溶劑配標(biāo)校準(zhǔn)曲線的斜率百分比值定義方法的基質(zhì)效應(yīng)（信號(hào)增強(qiáng)或抑制），該比值代表了干擾物對目標(biāo)分析物離子化效率的影響。21種真菌毒素基質(zhì)效應(yīng)結(jié)果見圖5，從圖5可以看出，黃曲霉毒素G1、G2，伏馬毒素類在乳及乳制品中基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng)明顯，玉米赤霉烯酮、T-2毒素、HT-2毒素在乳及乳制品中基質(zhì)抑制效應(yīng)明顯，其它毒素的基質(zhì)效應(yīng)尚在可接受范圍（80%～120%）。為補(bǔ)償基質(zhì)效應(yīng)的影響，選用基質(zhì)配標(biāo)法進(jìn)行目標(biāo)物的定量分析，外標(biāo)法定量。

圖5 21種真菌毒素的基質(zhì)效應(yīng)Fig.5 Matrix effects of 21 mycotoxins

2.6 方法學(xué)考察

2.6.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線、檢出限和定量限 取空白樣品基質(zhì)溶液準(zhǔn)確配制不同質(zhì)量濃度的真菌毒素混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，采用逐級稀釋方法獲得21種真菌毒素的定量限，以3倍信噪比（S/N）確定化合物檢出限（LOD）、10倍信噪比確定不同化合物的定量限（LOQ）。經(jīng)高分辨質(zhì)譜檢測，以峰面積（Y）為縱坐標(biāo)，質(zhì)量濃度（X，μg/L）為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果如表4所示，在質(zhì)量濃度范圍內(nèi)21種真菌毒素色譜峰面積與質(zhì)量濃度呈良好線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)r均大于0.99，檢出限（LOD）為 0.3～31.2 μg/kg，定量限為（LOQ）為 1.0～93.8 μg/kg。

表4 21種真菌毒素的線性范圍、檢出限和定量限Table 4 Linear range, detection limit and quantification limit of 21 mycotoxins

2.6.2 回收率與精密度 取乳粉、液態(tài)乳及乳制品空白樣品基質(zhì)，分別添加低、中、高3個(gè)濃度水平的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，按“1.2.2”進(jìn)行樣品前處理，每個(gè)水平測定6次，計(jì)算回收率和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD），21種真菌毒素的回收率為60.3%～107.0%，RSD＜15%，結(jié)果見表5。符合GB/T 27404-2008《實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范食品理化檢測》的技術(shù)要求[33]，方法具有良好的準(zhǔn)確度和精密度，適用于乳及乳制品中21種真菌毒素的日常監(jiān)測。

表5 21種真菌毒素的加標(biāo)回收率和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（n=6）Table 5 Standard addition recovery rates and relative standard deviations of 21 mycotoxins (n=6)

2.6.3 方法對比 目前乳及乳制品中真菌毒素的檢測方法對比如表6所示，本研究前處理采用Captiva-EMR Lipid柱凈化，四極桿/靜電場軌道阱高分辨質(zhì)譜測定，樣品前處理能夠高效去除蛋白質(zhì)和脂質(zhì)，減少樣品處理時(shí)間，與表6所列方法對比，目標(biāo)物種類覆蓋更全面，首次對乳及乳制品中的嘔吐毒素衍生物進(jìn)行定量分析，該方法具有較高的適用性和推廣性。

表6 乳及乳制品中多真菌毒素檢測方法對比Table 6 Test results of multiple mycotoxins in milk and dairy products

續(xù)表 5

2.7 實(shí)際樣品測定

應(yīng)用建立的方法對從超市購買的36份乳及乳制品進(jìn)行檢測，包括乳粉樣品18份，液態(tài)乳樣品18份，其中一份水果添加液態(tài)酸奶樣品檢出黃曲霉毒素B2，含量為18.29 μg/kg，其余樣品均未檢出真菌毒素，陽性樣品中黃曲霉毒素B2的提取離子流色譜圖如圖6，二級質(zhì)譜圖如圖7所示。陽性樣品表明該酸奶在原料采集以及生產(chǎn)加工過程中存在真菌毒素污染風(fēng)險(xiǎn)，可能是由乳制品中的添加原料引入，從而危害人體健康。為確保乳及乳制品的質(zhì)量，除了其中乳類原料，關(guān)注其他成分的質(zhì)量安全以及良好的生產(chǎn)規(guī)范都是十分必要的。

圖6 標(biāo)準(zhǔn)溶液（a）、陽性樣品（b）中黃曲霉毒素 B2的提取離子流色譜圖Fig.6 Extracted ion chromatogram of aflatoxin B2 in(a) standard solution and (b) positive sample

圖7 標(biāo)準(zhǔn)溶液（a）、陽性樣品（b）中黃曲霉毒素B2二級質(zhì)譜圖Fig.7 MS2 spectra of aflatoxin B2 in (a) the standard solution and (b) the positive sample

3 結(jié)論

Q-Exactive高分辨質(zhì)譜技術(shù)有較高分辨率和高質(zhì)量精度，可實(shí)現(xiàn)目標(biāo)物的準(zhǔn)確定性，在檢測復(fù)雜基質(zhì)時(shí)能夠在較高分辨率下測定化合物及其碎片離子的精確分子量，具有較強(qiáng)的抗干擾能力。本文基于高分辨質(zhì)譜技術(shù)的優(yōu)勢，針對粉狀和液態(tài)乳及乳制品中不同成分的含量特點(diǎn)，通過優(yōu)化萃取溶液和篩選凈化柱，建立了乳及乳制品中21種真菌毒素快速篩查方法。樣品中的真菌毒素經(jīng)酸化乙腈提取后，通過Captiva-EMR Lipid凈化柱凈化，超高效液相色譜-四極桿/靜電場軌道阱高分辨質(zhì)譜聯(lián)用法進(jìn)行測定。加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證了方法準(zhǔn)確度和精密度，且具有良好的回收率，能夠快速、準(zhǔn)確、高效的實(shí)現(xiàn)乳制品中21種真菌毒素的篩查，具有較高的實(shí)用性和推廣性，為乳及乳制品中多真菌毒素的快速篩查分析提供可靠技術(shù)支持，為食品安全管理機(jī)構(gòu)制定有效的風(fēng)險(xiǎn)管理政策提供科學(xué)依據(jù)，保障乳及乳制品質(zhì)量安全。