黔產(chǎn)中藥材綠豆衣薄層色譜鑒別方法研究

盧 婷，姚 斌

(貴州省黔東南州食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心，貴州 凱里 556011)

綠豆衣是在泡發(fā)綠豆后揉搓下來的種皮曬干后得到的一種物品，為豆科菜豆屬植物綠豆Phaseolus radiatus L.的種子皮(即綠豆皮)，富含膳食纖維、黃酮類物質(zhì)(主要是牡荊素[1]、異牡荊素[2])等具有生物活性的化學(xué)成分，在體內(nèi)具有重要的生理作用，是維持人體健康不可缺少的營(yíng)養(yǎng)素[3]。有報(bào)道證實(shí)綠豆的食療保健功效主要來自其種子皮[4]。本次實(shí)驗(yàn)采用薄層色譜法對(duì)綠豆衣中牡荊素、異牡荊素進(jìn)行定性研究，以期為黔產(chǎn)綠豆衣的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)建立提供參考依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器

AL104電子天平(梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司)；DFY-500高速中藥粉碎機(jī)(溫嶺市林大機(jī)械有限公司)；卡瑪LINOMATAT5 半自動(dòng)點(diǎn)樣器。

1.2 材料

薄層板：浙江省臺(tái)州市路橋四甲生化塑料廠出品聚酰胺薄膜(批號(hào)：160726)；青島勝海精細(xì)硅膠化工有限公司硅膠G板(批號(hào)：130525)；天津思利達(dá)科技有限公司硅膠GF254(批號(hào)：130515)；上海國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司聚酰胺薄膜(批號(hào)：20170417)。

試劑：正丁醇(分析純)；乙酸(分析純)；氯仿(分析純)；氨試液(分析純)；甲醇(分析純)；純化水。

對(duì)照品：牡荊素(批號(hào)：101213，含量≥98%，中國(guó)食品藥品檢定研究院)；異牡荊素(批號(hào)100304，含量≥98%，江蘇永健醫(yī)藥科技有限公司)。

樣品：貴州思南縣合朋溪鎮(zhèn)群河村(編號(hào)為樣品1、2)，甕安縣天文鎮(zhèn)烏江村(編號(hào)為樣品3、4)，凱里市舟溪鎮(zhèn)石青村(編號(hào)為樣品5、6)三地的綠豆衣樣本。

2 方法與結(jié)果

2.1 供試品溶液的制備

取藥材粉末0.5 g，加入1 mL氨試液濕潤(rùn)，再加入60%甲醇20 mL超聲30 min，濾過，濾液揮干，加入2 mL甲醇使殘?jiān)芙猓鳛楣┰嚻啡芤骸?/p>

2.2 對(duì)照品溶液的制備

稱取牡荊素、異牡荊素對(duì)照品適量，分別加60%甲醇溶解，制成濃度為0.1 mg/mL溶液，作為對(duì)照品溶液。

2.3 不同展開劑的考察

參照《中國(guó)藥典》2015年版四部0502薄層色譜法[5]，依次吸取牡荊素對(duì)照品、綠豆衣樣品1、綠豆衣樣品2、異牡荊素對(duì)照品各溶液5 μL，點(diǎn)于同一已活化的聚酰胺薄膜板上，根據(jù)其主要含牡荊素、異牡荊素?cái)M定以下展開條件：甲苯∶甲醇∶乙酸(15∶5∶1)、醋酸乙酯∶甲酸∶水(8∶1∶1)及正丁醇∶乙酸∶水∶氯仿(6∶2∶2∶1)的上層液為展開劑，展開前，把聚酰胺薄膜板置于展開缸飽和半小時(shí)，展開后噴以1%三氯化鋁溶液后晾干，置紫外燈光(365 nm)下檢視，試驗(yàn)結(jié)果顯示以正丁醇∶乙酸∶水∶氯仿(6∶2∶2∶1)的上層液為展開劑，所得斑點(diǎn)較為圓整清晰，分離度好。詳見圖1。

圖1 綠豆衣TLC鑒別展開劑考察Fig.1 Investigation of TLC developing solvent formung bean seed-coat

2.4 綠豆衣TLC不同填料板考察

按照《中國(guó)藥典》2015年版四部0502薄層色譜法[5]，分別吸取牡荊素對(duì)照品、綠豆衣樣品1、綠豆衣樣品2、異牡荊素對(duì)照品各溶液5 μL，分別點(diǎn)于已活化硅膠G板(批號(hào)：130525)、硅膠GF254(批號(hào)：130515)、聚酰胺薄膜(批號(hào)：160726)三個(gè)不同填料的薄層板上，以正丁醇∶乙酸∶水∶氯仿(6∶2∶2∶1)的上層液為展開劑，同法操作。結(jié)果顯示聚酰胺薄膜板上效果最佳。結(jié)果見圖2。

圖2 綠豆衣TLC不同填料板考察Fig.2 Investigation of TLC filler plate for mung bean seed-coat

通過對(duì)不同展開劑、不同填料薄層板的考察，最終確定以正丁醇∶乙酸∶水∶氯仿(6∶2∶2∶1)的上層液為展開劑，取三個(gè)不同產(chǎn)地即：貴州思南縣合朋溪鎮(zhèn)群河村(編號(hào)為樣品1、2) 、 甕安縣天文鎮(zhèn)烏江村(編號(hào)為樣品3、4)、 凱里市舟溪鎮(zhèn)石青村(編號(hào)為樣品5、6)的綠豆衣樣品在聚酰胺薄膜板上進(jìn)行以下方法的耐用性考察。點(diǎn)樣順序?yàn)椋耗登G素對(duì)照品、綠豆衣樣品1、綠豆衣樣品2、綠豆衣樣品3、綠豆衣樣品4、綠豆衣樣品5、綠豆衣樣品6、異牡荊素對(duì)照品。

2.5 不同溫度的考察

進(jìn)行了低溫(5 ℃，10 ℃)、室溫(20 ℃)和高溫(30 ℃，40 ℃)的考察，結(jié)果均較好，詳見圖3。

圖3 綠豆衣TLC不同溫度考察Fig.3 Investigation of TLC temperature for mung beanseed-coat

2.6 不同濕度考察

進(jìn)行了低濕度(30%)、中等濕度(50%)和高濕度(70%)的考察，結(jié)果顯示，不同濕度下都能較好分離。具體見圖4。

圖4 綠豆衣TLC不同濕度考察Fig.4 Investigation of TLC humidity for mung bean seed-coat

2.7 不同廠家薄層板考察

共試驗(yàn)兩個(gè)廠家的聚酰胺薄膜板，分別為浙江省臺(tái)州市路橋四甲生化塑料廠和上海國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，分離效果佳，所得斑點(diǎn)較為圓整清晰。具體見圖5。

圖5 綠豆衣TLC不同廠家薄層板考察Fig.5 Investigation of TLC thin-layer plate formung bean seed-coat

3 討論

本次實(shí)驗(yàn)通過對(duì)不同薄層板及展開劑的比較，發(fā)現(xiàn)用硅膠G薄層板、GF254薄層板，以甲苯∶甲醇∶乙酸(15∶5∶1)、醋酸乙酯∶甲酸∶水(8∶1∶1)為展開劑，所得薄層色譜均不甚理想。進(jìn)一步篩選后，確定以聚酰胺薄膜板，正丁醇∶乙酸∶水∶氯仿(6∶2∶2∶1)的上層液為展開劑，展開后噴以1%三氯化鋁溶液后晾干，置紫外燈光(365 nm)下檢視，所得斑點(diǎn)圓整清晰，分離度好，可作為綠豆衣薄層色譜試驗(yàn)條件。

本次實(shí)驗(yàn)采用薄層色譜法對(duì)貴州三個(gè)不同產(chǎn)地的綠豆衣進(jìn)行了試驗(yàn)，通過對(duì)溫度、濕度、不同廠家薄層板的考察，發(fā)現(xiàn)溫度、濕度、不同廠家薄層板對(duì)分離效果均無影響，方法耐用性佳。本方法適合南方濕度較大的環(huán)境，重現(xiàn)性好，方法簡(jiǎn)便，可作為貴州產(chǎn)綠豆衣質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)依據(jù)。