豆蔻飲片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

趙斌 韓麗麗

（濰坊市檢驗(yàn)檢測中心 山東濰坊 261100）

1 前言

豆蔻始載于《名醫(yī)別錄》，被列為上品，但并未區(qū)分白豆蔻與草豆蔻，統(tǒng)稱“豆蔻”[1]，《開元本草》將其分列為“白豆蔻”與“草豆蔻”二項(xiàng)[2]?！吨袊幍洹?953年版始收載豆蔻，其來源是小豆蔻而非白豆蔻或爪哇白豆蔻，又規(guī)定以白豆蔻代用小豆蔻[3]，《中國藥典》1985年版將植物來源始定為白豆蔻、爪哇白豆蔻[4]。之后的歷版中國藥典均沿用此植物來源。

《山東中藥飲片炮制規(guī)范》2012年版收載豆蔻[5]，其植物來源與藥典相同，按照山東地區(qū)臨床使用豆蔻的實(shí)際情況，將豆蔻分為豆蔻仁、豆蔻皮2種炮制規(guī)格。本文基于2012年版的《山東中藥飲片炮制規(guī)范》，并參考《中國藥典》的相關(guān)內(nèi)容，結(jié)合市售豆蔻飲片的實(shí)際情況，對豆蔻飲片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行修訂和補(bǔ)充，為完善豆蔻飲片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供數(shù)據(jù)支撐。

2 儀器與試藥

2.1 儀器

顯微鏡（LEICA，DM1000型）；千分之一電子天平（PB203型），萬分之一電子天平（XSE204B型），百萬分之一電子天平（XPR10型）（梅特勒公司）；恒溫干燥箱（精鷹醫(yī)療，102型）；馬弗爐（龍口電爐，SX2-5-12D型）；電熱套（北京永光明，DZTW型）；氣相色譜儀（安捷倫，7890A型）。

2.2 試藥

α-蒎烯（批號：110897-201803，含量：99.9%）；桉油精（批號：110788-201707，含量：100%）；芳樟醇（批號：111503-201603，含量：97.8%）；樟腦（批號：110747-201409，含量：98.7%）；α-松油醇（批號：111859-201503）（中國食品藥品檢定研究院）。

水為超純水；正己烷為色譜純（國藥）；其他試劑均為分析純（國藥）；硅膠G薄層板（青島海洋，批號：20180612，規(guī)格：10 cm×20 cm）；11批豆蔻仁和8批豆蔻皮，均由山東濰坊當(dāng)?shù)仫嬈瑥S提供，飲片信息詳見表1。

表1 豆蔻飲片信息

3 方法與結(jié)果

3.1 性狀

豆蔻仁[5]：俗稱“蔻球”，多集結(jié)成團(tuán)，蔻球分三瓣，各瓣間有白色隔膜分隔，每瓣有種子7~10粒，習(xí)稱“蔻米”，種子背面略隆起，呈不規(guī)則的多面體，直徑3~4 mm，表面呈暗棕色或灰棕色，質(zhì)堅(jiān)硬，斷面為白色，呈粉質(zhì)，有油性，氣芳香，味辛涼[5]，詳見圖1。

豆蔻皮[5]：不規(guī)則的薄片，有較深的在縱向凹紋，黃白色至淡黃棕色，體輕，質(zhì)脆，氣微香，味辛[5]，詳見圖1。

3.2 顯微特征

使用水合氯醛將豆蔻仁與豆蔻皮的粉末進(jìn)行透化，置于顯微鏡下觀察。檢驗(yàn)結(jié)果與《中國藥典》2015年版一部[6]及《山東中藥飲片炮制規(guī)范》2012年版[5]豆蔻項(xiàng)的相關(guān)描述內(nèi)容進(jìn)行對照，結(jié)果一致，方法合理。檢驗(yàn)結(jié)果見圖2。

3.3 薄層色譜

3.3.1 供試品溶液與對照品溶液制備

取豆蔻飲片，粉碎成粗粉，稱取適量粗粉，按照《中國藥典》2015年版四部通則2204揮發(fā)油測定法[8]進(jìn)行測定，提取揮發(fā)油，分取上述揮發(fā)油0.1 ml，置于適宜容器中，加入正已烷20 ml使其溶解，制成供試品溶液[6]。另稱取適量桉油精對照品，置于量瓶中，加入正已烷試劑，將其溶解為50 mg/1ml的對照品溶液[6]。

3.3.2 色譜條件

按照《中國藥典》2015年版四部通則0502薄層色譜法[8]試驗(yàn)，吸取上述2種溶液各2μl，分別置于同一塊10 cm×20 cm的硅膠G薄層板上[6]；按照《中國藥典》2015年版一部[6]，將展開劑的配置比例定為：環(huán)己烷-二氯甲烷-乙酸乙酯（15∶5∶0.5）；將展開劑傾入展開缸內(nèi)，同時(shí)放入已點(diǎn)樣的薄層板（保持在展開劑液面以上），密閉15 min；將薄層板置于展開劑液面以下進(jìn)行展開，展開約8cm后，取出，晾干，以5%香草醛硫酸溶液均勻噴灑至薄層板上，將薄層板置于溫度調(diào)至105℃的恒溫干燥箱內(nèi)，加熱至斑點(diǎn)顯色清晰[6]。

3.3.3 試驗(yàn)結(jié)果

按上述條件展開并顯色后，供試品色譜與對照品色譜在相同位置有相同的斑點(diǎn)[6]，斑點(diǎn)齊整，分離度良好，結(jié)果見圖3。

3.4 桉油精含量測定

3.4.1 色譜條件

參照《中國藥典》2015年版一部[6]含量測定桉油精項(xiàng)下的色譜條件并根據(jù)試劑情況加以調(diào)整：色譜柱的固定相：甲基硅橡膠（SE-54）；涂布濃度：10%[6]；柱溫：100℃；進(jìn)樣口溫度：150℃；檢測器：FID；檢測器溫度：200℃[6]；進(jìn)樣量：1μl；分流比：120∶1；理論板數(shù)：≥1 000（按桉油精峰計(jì)算）[6]。按此色譜條件進(jìn)行試驗(yàn)，各項(xiàng)指標(biāo)均符合要求[8]，色譜圖見圖4。

3.4.2 溶液制備

對照品溶液制備[6]：參照《中國藥典》2015年版一部[6]含量測定桉油精項(xiàng)下對照品溶液的制備方法，制備本實(shí)驗(yàn)的對照品溶液，得每1 ml含25 mg的對照品溶液。

供試品溶液制備[6]：取豆蔻仁與豆蔻皮飲片，用粉碎機(jī)反復(fù)粉碎，使所有粉末均能過3號篩，取豆蔻仁粉末約5 g，取豆蔻皮粉末約25 g，精密稱定，參照《中國藥典》2015年版一部[6]含量測定桉油精項(xiàng)下供試品溶液的制備方法，制備本實(shí)驗(yàn)的供試品溶液。

3.4.3 方法學(xué)考察

線性考察[8]：按上述對照品溶液的制備方法，精密稱取對照品適量，置于適宜容量的量瓶中，加正己烷試劑，分別制成濃度為6.3215 mg/ml、12.643 mg/ml、25.286 mg/ml、37.929 mg/ml、50.572 mg/ml、63.215 mg/ml的溶液[8]，按3.4.1中的色譜條件進(jìn)行試驗(yàn)，分別吸取上述溶液，注入氣相色譜儀，記錄對照品的峰面積，進(jìn)行線性回歸統(tǒng)計(jì)，以進(jìn)樣量為橫軸，以峰面積為縱軸[8]，繪制回歸曲線，得回歸方程y=308.01x+2.4674，相關(guān)系數(shù)為r=0.999 9。試驗(yàn)結(jié)果說明，桉油精濃度在6.321 5 mg/ml~63.215 mg/ml之間時(shí)，峰面積與濃度的線性關(guān)系良好[8]。

精密度試驗(yàn)[8]：按3.4.1中的色譜條件進(jìn)行試驗(yàn)，精密吸取3.4.2中的對照品溶液1μl，注入氣相色譜儀，記錄對照品的峰面積，連續(xù)測定6次[8]，試驗(yàn)結(jié)果顯示，峰面積的RSD為0.55%，表明儀器具有良好的精密度[8]。

穩(wěn)定性試驗(yàn)[8]：按3.4.1中的色譜條件進(jìn)行試驗(yàn)，精密吸取3.4.2中的供試品溶液1μl，注入氣相色譜儀，每隔4 h進(jìn)樣1次，共考察24 h[8]，記錄對照品的峰面積，試驗(yàn)結(jié)果顯示，峰面積的RSD為0.88%，說明供試品溶液在24 h內(nèi)具有良好的穩(wěn)定性[8]。

重復(fù)性試驗(yàn)[8]：取供試品（批 號：19121603）適量，按3.4.2中的供試品溶液制備方法，制備6份平行樣品[8]，按3.4.1中的色譜條件進(jìn)行試驗(yàn)，注入氣相色譜儀，測定對照品的峰面積，試驗(yàn)結(jié)果顯示，峰面積的RSD為1.8%，表明該方法具有良好的重復(fù)性[8]。

加樣回收試驗(yàn)[8]：取已粉碎且過3號篩的供試品（含量已測得，批號：19121603）約1g，精密稱取6份[8]，向每份樣品中精密加入2 ml濃度為25.286 mg/ml的桉油精對照品溶液[8]，再按照3.4.2中的供試品溶液制備方法，制備供試品溶液，按3.4.1中的色譜條件進(jìn)行試驗(yàn)，計(jì)算RSD和回收率，結(jié)果顯示，回收率為98.8%，RSD為1.7%，表明該方法具有良好的準(zhǔn)確度[8]。

3.4.4 樣品測定

取所收集的豆蔻仁飲片11批，豆蔻皮飲片8皮，按3.4.2中的方法制備供試品溶液和對照品溶液，按3.4.1中的色譜條件進(jìn)行測定，記錄峰面積，計(jì)算供試品中桉油精的含量，結(jié)果見表2、表3。擬定豆蔻仁含桉油精≥2.0%。

表2 豆蔻仁桉油精含量測定結(jié)果

表3 豆蔻皮桉油精含量測定結(jié)果

4 討論

豆蔻的主要作用是利濕理氣、溫止嘔吐，主要用于治療濕阻中焦、濕溫初起、脾胃虛寒所致的惡心嘔吐，以及妊娠嘔吐[9]。當(dāng)代藥理學(xué)研究表明，本品可增加胃黏膜的血流量，提高血清中的胃泌素水平，改善胃黏膜對抗氧自由基損傷的作用[10]。此外，本品還具有顯著的抗氧化作用[11-12]。

《中國藥典》雖收載豆蔻，但并未區(qū)分豆蔻仁與豆蔻皮2種炮制規(guī)格。本文在考慮山東地區(qū)臨床用藥實(shí)際情況的基礎(chǔ)上，區(qū)分了2種炮制規(guī)格，同時(shí)也充分利用了豆蔻藥材資源。

本文的顯微特征鑒別是在參照《中國藥典》[6]與《山東中藥飲片炮制規(guī)范》[5]的基礎(chǔ)上經(jīng)實(shí)際檢驗(yàn)確定的結(jié)果，與標(biāo)準(zhǔn)結(jié)果一致?？紤]到標(biāo)準(zhǔn)的延續(xù)性，故采用了原標(biāo)準(zhǔn)的描述。

本文改進(jìn)了《中國藥典》[6]與《山東中藥飲片炮制規(guī)范》[5]中的薄層色譜鑒別方法[5-6]。在研究中發(fā)現(xiàn)，將飲片提取的揮發(fā)油稀釋200倍后點(diǎn)樣，能得到更清晰的薄層色譜斑點(diǎn)。

對于豆蔻仁桉油精含量，本文在參考藥典標(biāo)準(zhǔn)[4]的基礎(chǔ)上，根據(jù)實(shí)際情況，對色譜條件及含量限度進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整。豆蔻皮中的桉油精含量較低，不宜使用桉油精控制其質(zhì)量。

對于雜質(zhì)、水分、總灰分、酸不溶性灰分等檢查項(xiàng)，以及浸出物測定法，因本文篇幅所限，將另文論述。