血清標(biāo)志物在乙型肝炎病毒感染相關(guān)原發(fā)性肝癌中的臨床應(yīng)用及診斷價值

吳義忠 蹇國

作者單位：628000 四川廣元，廣元市中心醫(yī)院檢驗科

原發(fā)性肝癌（primary hepatic carcinoma，PHC）是目前臨床上常見的惡性腫瘤之一，是指肝細(xì)胞或肝內(nèi)的膽管細(xì)胞發(fā)生癌變，其中PHC的最常見形式是肝細(xì)胞發(fā)生癌變。相關(guān)調(diào)查研究顯示，目前肝細(xì)胞癌排在我國惡性腫瘤的第4位，同時在腫瘤致死的病因中位于第3位［1］。PHC可發(fā)病于任何年齡，我國男性發(fā)病率明顯高于女性，患者男女性別比例為2︰1～5︰1，且男性肝癌患者的預(yù)后更差。肝細(xì)胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）是一種多因素誘發(fā)和多基因參與的常見惡性腫瘤。在我國，HCC患者中約90%存在乙型肝炎（乙肝）病毒感染，提示乙肝病毒感染與肝癌高發(fā)密不可分，尤其是慢性乙肝（chronic hepatitis B，CHB）［2］。若臨床診治不及時，慢性乙肝可能逐步進(jìn)展為肝硬化，甚至HCC［3］。本研究對慢性乙肝、肝硬化、PHC患者的甲胎蛋白（alpha-fetoprotein，AFP）、甲胎蛋白異質(zhì)體（alphafetoprotein-L3，AFP-L3）、α-L-鹽藻糖苷酶（α-Lsalinosidase，AFU）、異常凝血酶原（protein induced by vitamin K absence or antagonist-Ⅱ，PIVKA-Ⅱ）等血清學(xué)指標(biāo)進(jìn)行檢測，探討其在乙肝病毒感染相關(guān)肝硬化和PHC中的臨床應(yīng)用及診斷價值，現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1研究對象與分組 選擇2018年4月—2020年4月在本院明確診斷的30例慢性乙肝患者、40例肝硬化患者以及40例PHC患者作為研究對象，分別納入慢性乙肝組、肝硬化組和PHC組。

1.1.1納入標(biāo)準(zhǔn) ① 臨床診斷符合中國臨床腫瘤學(xué)會（Chinese Society of Clinical Oncology，CSCO）制定的《原發(fā)性肝癌診療指南》和《慢性乙型肝炎防治指南（2015年更新版）》［4］中慢性乙肝、肝硬化、PHC的診斷標(biāo)準(zhǔn)；② 對本研究內(nèi)容知情同意。

1.1.2排除標(biāo)準(zhǔn) ① 合并其他惡性腫瘤；② 精神行為異常，無法配合；③ 處于妊娠期或母乳期的女性；④ 中途退出本研究。

1.1.3倫理學(xué) 本研究符合醫(yī)學(xué)倫理學(xué)標(biāo)準(zhǔn)，并經(jīng)本院倫理委員會審批（審批號：GYZXLL202006），所有檢測均獲得過受檢者或家屬知情同意。

1.2研究方法 使用促凝黃色采血管采集所有受檢對象空腹靜脈血2～3 mL，以3 500 r/min（離心半徑為10 cm）離心5 min分離血清。采用μTASWako i30全自動電泳熒光免疫分析儀（日本和光純藥工業(yè)株式會社）和c16000全自動生化分析儀（北京九強生物技術(shù)股份有限公司）檢測AFP、AFP-L3、PIVKA-Ⅱ、AFU，使用配套檢測試劑盒。不能立即檢測的血清樣本分裝后于-70 ℃冰箱冷凍保存。

1.3統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 19.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。計量資料服從正態(tài)分布，采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，采用獨立樣本t檢驗；相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)分析法。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。繪制受試者工作特征曲線（receiver operator characteristic curve，ROC曲線）并計算ROC曲線下面積（area under ROC curve，AUC），考察AFP、AFU、AFP-L3、PIVKA-Ⅱ?qū)HC的診斷效能。

2 結(jié)果

2.1一般資料 各組患者的性別、年齡等一般資料比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（均P＞0.05）。見表1。

表1 各組一般資料比較

2.2各組血清AFP、AFP-L3、PIVKA-Ⅱ、AFU水平比較 肝硬化組和PHC組的血清AFP、AFP-L3、AFU、PIVKA-Ⅱ水平均明顯高于慢性乙肝組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.05）；PHC組血清AFP、AFP-L3、PIVKA-Ⅱ、AFU水平均明顯高于肝硬化組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.05）。見表2。

表2 各組血清AFP、AFP-L3、PIVKA-Ⅱ、AFU水平比較（±s）

表2 各組血清AFP、AFP-L3、PIVKA-Ⅱ、AFU水平比較（±s）

注：AFP為甲胎蛋白，AFP-L3為甲胎蛋白異質(zhì)體，PIVKA-Ⅱ為異常凝血酶原，AFU為α-L-鹽藻糖苷酶，PHC為原發(fā)性肝癌；與慢性乙肝組比較，aP＜0.05；與肝硬化組比較，bP＜0.05

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2.3相關(guān)性分析 Pearson相關(guān)性分析顯示，PHC組AFP與AFP-L3水平呈中等相關(guān)性（r值為0.477，P值為0.002），PIVKA-Ⅱ與AFU水平呈強相關(guān)性（r值為0.622，P值為0.000）。見圖1～2。

圖1 PHC組AFP與AFP-L3的相關(guān)性分析

圖2 PHC組PIVKA-Ⅱ與AFU的相關(guān)性分析

2.4血清學(xué)指標(biāo)診斷PHC的ROC曲線 AFP、AFU、AFP-L3、PIVKA-Ⅱ診斷PHC的AUC分別為0.786〔95%可信區(qū)間（95% confidence interval，95%CI）為0.697～0.874〕、0.866（95%CI為0.801～0.932）、0.873（95%CI為0.804～0.942、0.669（95%CI為0.561～0.776）。見圖3。

3 討論

糖基轉(zhuǎn)移酶在糖鏈的生物合成中占主導(dǎo)地位，其活性主要受基因表達(dá)水平、原料物質(zhì)、受體分子之間作用的特異性及酶在細(xì)胞器官的定位等因素調(diào)控。是目前糖鏈生物合成關(guān)鍵物質(zhì)。癌變細(xì)胞在細(xì)胞膜上的糖蛋白會發(fā)生改變，尤其是糖蛋白中的寡糖鏈，其中高爾基體的中部位置存在α-1, 6巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶（α-1, 6 fucosyltransferase FUT8），該物質(zhì)主要針對底物蛋白中的巖藻糖進(jìn)行糖基化修飾，從而發(fā)生改變。當(dāng)肝臟等組織發(fā)生惡變時，隨著FUT8活性的升高，核心巖藻糖基化N-糖鏈的含量會明顯增加［5］。本研究中肝硬化組和PHC組AFU水平與慢性乙肝組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義，與肖曉光等［6］研究結(jié)果相似，早期PHC患者血清中的AFU、AFP水平與其他各組比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義。

AFP是最經(jīng)典的肝癌標(biāo)志物，一直廣泛用于臨床篩查與診斷，但部分PHC患者AFP出現(xiàn)假陰性結(jié)果，特別是早期PHC，而且越來越多的臨床研究表明，AFP在PHC診斷中敏感度與特異度均較低［7］。本研究中，PHC組有17例患者AFP ＞400 ng/L，僅占42.5%。俞禾濤等［8］研究表明，單靠AFP診斷HCC存在誤診和漏診。AFP-L3作為AFP的一種異質(zhì)體，是由590個氨基酸組成的糖蛋白，Abdel-Aziz等［9］1970年發(fā)現(xiàn)AFP電泳時存在不同的遷移率。隨后Okuyama等［10］根據(jù)AFP與小扁豆凝集素（lentil agglutinin，LCA）結(jié)合能力不同將其分為LCA非結(jié)合型（AFP-L1和AFP-L2）和LCA結(jié)合型（AFP-L3），臨床上通常以AFP-L3來診斷PHC。2005年美國食品與藥品管理局（Food and Drug Administration，F(xiàn)DA）已批準(zhǔn)將AFP-L3作為HCC的腫瘤血清學(xué)標(biāo)志物。本研究中，PHC組的AFP和AFP-L3水平與慢性乙肝組比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義，肝硬化組與慢性乙肝組AFP-L3水平比較差異亦有統(tǒng)計學(xué)意義，而AFP水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義。有研究表明，肝癌患者術(shù)后AFP-L3陽性與未來生存率有明顯相關(guān)性，陽性患者生存率較低，陰性患者生存率較高［11-12］。

異常凝血酶原最早由Liebman在1984年首次報道［13］，研究表明約90%的HCC患者PIVKA-Ⅱ水平升高，當(dāng)肝細(xì)胞發(fā)生癌變時，γ-羧基谷氨酸結(jié)構(gòu)中的氨基酸殘基羧化不完全，產(chǎn)生不同數(shù)量的谷氨酸殘基，從而生成PIVKA-Ⅱ［14-15］。本研究中，PHC組的PIVKA-Ⅱ水平明顯高于慢性乙肝組和肝硬化組，與Truong等［16］研究結(jié)果一致。PIVKA-Ⅱ是對肝癌診斷的敏感指標(biāo)，同時PIVKA-Ⅱ水平與AFU水平呈強相關(guān)性，聯(lián)合檢測時敏感度更高。

本研究分析4種血清學(xué)指標(biāo)對PHC的診斷效能，AFP、AFP-L3、PIVKA-Ⅱ、AFU的AUC分別為0.786、0.866、0.873、0.669。本研究還對PHC組患者的AFP、AFP-L3、PIVKA-Ⅱ、AFU進(jìn)行Pearson相關(guān)性分析，結(jié)果顯示PHC組AFP與AFP-L3水平呈中等相關(guān)性（r值為0.477，P值為0.002），PIVKA-Ⅱ與AFU水平呈強相關(guān)性（r值為0.622，P值為0.000）。PHC是人類最常見的惡性腫瘤，也是我國常見的消化道惡性腫瘤之一，因此對于通過影像學(xué)無法發(fā)現(xiàn)的早期無癥狀微灶腫瘤，AFP、AFP-L3、PIVKA-Ⅱ和AFU等血清學(xué)標(biāo)志物檢測對腫瘤的早期篩查和診斷具有重要的實驗室參考價值。針對肝癌早期患者，通過對不同標(biāo)志物進(jìn)行聯(lián)合檢測，可以有效提高檢出率，同時進(jìn)行臨床干預(yù)，從而提高患者的生存率和改善預(yù)后。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突