辣椒根際細(xì)菌的分離篩選及回接辣椒促生效果

吳曉青，趙曉燕，周方園，范素素，張廣志，謝雪迎，周紅姿，張新建

（齊魯工業(yè)大學(xué)（山東省科學(xué)院）生態(tài)研究所／山東省應(yīng)用微生物重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，山東 濟(jì)南 250103）

設(shè)施作物生產(chǎn)過(guò)程中，利用基質(zhì)進(jìn)行育苗已成為作物種苗生產(chǎn)的主要方式，育苗基質(zhì)材料質(zhì)地輕，保水、保肥、透氣性好，是種苗工廠化生產(chǎn)的基礎(chǔ)物質(zhì)，優(yōu)良的基質(zhì)可充當(dāng)“植物根系營(yíng)養(yǎng)庫(kù)”，決定了栽培植物的營(yíng)養(yǎng)供給及生長(zhǎng)發(fā)育狀況［1］。前人研究表明，利用微生物可改善根際礦質(zhì)元素有效性、調(diào)節(jié)根際次生代謝物、增強(qiáng)作物抗逆性等［2］；將定向篩選的具有生防促生等功能的微生物加入傳統(tǒng)基質(zhì)具有提質(zhì)增產(chǎn)效果，是作物通過(guò)與有益微生物互作進(jìn)行的主動(dòng)調(diào)節(jié)。例如在基質(zhì)中添加芽孢桿菌等微生物對(duì)辣椒、番茄等蔬菜作物具有壯苗效果［3］。外添微生物主要來(lái)源有商品化的生防菌及菌肥產(chǎn)品［4］、實(shí)驗(yàn)室篩選的高效生防促生菌株制劑［5］、廢棄物發(fā)酵菌肥等［6］。外添微生物的選擇往往僅考察功能性菌株單方面作用，忽略了植物對(duì)其定殖微生物的主動(dòng)選擇效應(yīng)。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，植物表面及內(nèi)部富集的微生物比宿主植物編碼了更多的基因，通過(guò)協(xié)作和競(jìng)爭(zhēng)形成穩(wěn)定的群落結(jié)構(gòu)，對(duì)作物抗逆及生長(zhǎng)發(fā)育至關(guān)重要［7，8］。根際是植物與微生物互作的重要場(chǎng)所，植物根際微生物對(duì)于維持植物健康發(fā)揮著重要作用［9，10］，其中細(xì)菌占菌群種類的大多數(shù)。目前一種完善農(nóng)業(yè)生態(tài)系統(tǒng)的新策略，即利用植物自身的有益微生物特征菌群，分離構(gòu)建植物體的微生態(tài)穩(wěn)定性，從而達(dá)到抗逆增產(chǎn)提質(zhì)的目的［9］，受到廣泛關(guān)注。為了驗(yàn)證在種苗基質(zhì)培養(yǎng)中添加作物自身根際細(xì)菌的促生效應(yīng)，本研究對(duì)辣椒根際高豐度細(xì)菌進(jìn)行分離鑒定，篩選具有生防及促生活性的菌株，并將其回接至基質(zhì)培養(yǎng)的同品種辣椒苗，驗(yàn)證根際細(xì)菌的促生作用，為研發(fā)功能性生物基質(zhì)奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 樣品采集和處理

辣椒根系樣品于2020年采自濟(jì)南市設(shè)施蔬菜溫室，辣椒品種為赤峰欣育（甜椒）。隨機(jī)采集幼苗期、初花期和結(jié)果期各6棵辣椒植株新鮮根系，收集離地面5～15 cm的根系組織，置于50 mL滅菌Falcon離心管（BD公司，美國(guó)）中，用無(wú)菌水清洗至無(wú)肉眼可見的土壤顆粒。隨后將根系轉(zhuǎn)移至新的50 mL Falcon離心管，加入滅菌的1×PBS（phosphate buffered saline，pH＝7）30 mL，室溫下180 r／min振蕩15 min。PBS重復(fù)清洗3次。將清洗后的根系取出并置于滅菌濾紙上吸干表面PBS，切分成約2 mm小段并混合。稱取1 g根系組織轉(zhuǎn)移至50 mL離心管（Corning，美國(guó)），無(wú)菌環(huán)境中加入10 mL（10 mmol／L）滅菌MgCl2溶液重懸，然后用無(wú)菌搗杵研磨直至均質(zhì)［11］。獲得的根系均質(zhì)液一部分用于16SrDNA測(cè)序分析菌群結(jié)構(gòu)，一部分用于平板培養(yǎng)。

1.2 16SrDNA測(cè)序

對(duì)辣椒不同生長(zhǎng)期根系均質(zhì)液分別進(jìn)行DNA提取，PCR擴(kuò)增純化后構(gòu)建小片段文庫(kù)，在Illumina NovaSeq平臺(tái)（北京諾禾致源科技股份有限公司）進(jìn)行雙末端測(cè)序。測(cè)序原始數(shù)據(jù)經(jīng)過(guò)拼接、過(guò)濾，得到有效數(shù)據(jù)。然后基于有效數(shù)據(jù)進(jìn)行OTU（operational taxonomic units）聚類和物種分類分析。根據(jù)OTU聚類結(jié)果，對(duì)每個(gè)OTU的代表序列做物種注釋，獲得對(duì)應(yīng)的物種信息和基于物種的豐度分布情況。對(duì)每時(shí)期的6個(gè)樣本的物種豐度取并集加和，然后選取每時(shí)期在屬水平上相對(duì)豐度排名前30（Top30）的菌種生成物種相對(duì)豐度柱形累加圖，對(duì)各時(shí)期菌種種類比較分析形成韋恩圖。

1.3 辣椒根際細(xì)菌的分離和鑒定

將各時(shí)期根系均質(zhì)液混合均勻，用無(wú)菌水在無(wú)菌試管中梯度稀釋為10－2、10－3、10－4、10－5、10－6、10－7和10－8，從各梯度中吸取100μL均勻涂布在TSA（trypton soy agar，Solarbio，中國(guó)）平板上，于30℃微生物培養(yǎng)箱內(nèi)倒置培養(yǎng)1～3 d，觀察菌落生長(zhǎng)情況。根據(jù)菌落形態(tài)特征，將差異菌落在新TSA平板上劃線獲得單菌落，重復(fù)3次，根據(jù)形態(tài)特征對(duì)細(xì)菌進(jìn)行分類。

用10μL移液槍頭蘸取單菌落于10μL有滅菌水的96孔PCR板（Axygen，美國(guó)）中，反復(fù)吸打混勻，加入16.6μL Buffer 1（25 mmol／L NaOH＋0.2 mmol／L EDTA－Na2，pH＝12），吸打混勻，覆膜后在PCR儀（Eppendorf，德國(guó)）上95℃運(yùn)行30 min。離心取上清，加入16.6μL Buffer 2（Tris－HCl，pH＝7.46），吸打混勻，獲得裂解液作為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增［11］。采用細(xì)菌16S rDNA通用引物27 F（5′-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3′）和1492 R（5′-TACGGCTACCTTGTTACGACTT-3′）進(jìn)行PCR擴(kuò)增。PCR反應(yīng)體系（30μL）：裂解液3 μL，10×Taqbuffer（含Mg2＋）3μL，dNTP（100 mmol／L）2.4μL，引物27F（10μmol／L）0.3μL，引物1492R（10μmol／L）0.3μL，TaqTMHS（Takara，日本）0.15μL，ddH2O 20.85μL。PCR擴(kuò)增程序：95℃5 min；94℃40 s，52℃30 s，72℃90 s，35個(gè)循環(huán)；72℃10 min。PCR產(chǎn)物送生工生物工程（上海）股份有限公司青島測(cè)序部測(cè)序，測(cè)序結(jié)果在GenBank中比對(duì)并鑒定種屬。使用Mega X鄰接法構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹，設(shè)定Bootstrap值為500。

1.4 根際細(xì)菌的生防及促生指標(biāo)檢測(cè)

1.4.1 對(duì)病原菌的拮抗試驗(yàn) 測(cè)試用病原菌菌株為本實(shí)驗(yàn)室保存的9株可侵染辣椒的病原真菌，分別為藜生鏈格孢（Alternaria chenopodiicola）、多主棒孢霉（Corynespora cassiicola）、角擔(dān)菌（Ceratobasidiumsp.）、極細(xì)枝孢霉（Cladosporium tenuissimum）、灰霉菌（Botrytis cinerea）、木賊鐮孢菌（Fusarium equiseti）、變紅鐮孢 菌（F.incarna-tum）、黃色鐮孢菌（F.culmorum）和輪枝鐮孢菌（F.verticillioides）。

病原菌在PDA（索萊寶，中國(guó)）平板上28℃活化3次；辣椒根際細(xì)菌在TSA平板上30℃活化3次，轉(zhuǎn)移至TSB（索萊寶，中國(guó)）培養(yǎng)液中振蕩培養(yǎng)至OD600＝0.5待用。用5 mm打孔器打取病原菌菌落邊緣菌餅，接種于9 cm PDA平板中軸線距離邊緣5 mm處，在中軸線相對(duì)位置打5 mm孔并加入根際細(xì)菌菌液50μL，28℃暗培養(yǎng)，對(duì)照為不接種根際細(xì)菌的病原菌單獨(dú)培養(yǎng)平板，其余條件一致。對(duì)于生長(zhǎng)速度均衡的病原菌（灰霉菌、變紅鐮孢菌和角擔(dān)菌），測(cè)量抑菌圈半徑時(shí)間為對(duì)照病原菌菌餅沿中軸線長(zhǎng)到平板邊緣時(shí)，抑制率Ⅰ（%）＝（1－對(duì)峙病原菌半徑／對(duì)照病原菌半徑）×100。對(duì)于生長(zhǎng)速度不均衡的病原菌（木賊鐮孢菌、黃色鐮孢菌、輪枝鐮孢菌、藜生鏈格孢、多主棒孢霉和極細(xì)枝孢霉），在接種第3天和第6天分別測(cè)量病原菌沿中軸線的半徑，并計(jì)算兩次測(cè)量半徑的差值。抑制率Ⅱ（%）＝（1－對(duì)峙半徑差／對(duì)照半徑差）×100。篩選抑制率Ⅰ≥20%（且抑菌圈半徑≥1 cm）或抑制率Ⅱ≥50%的菌株，作為待測(cè)活性菌株。

1.4.2 解磷活性、鐵載體和IAA活性的檢測(cè) 解磷活性檢測(cè)培養(yǎng)基參考Nautiyal［12］。NBRIP培養(yǎng)基（L）：葡萄糖10 g，Ca3（PO4）25 g，MgCl2·6H2O 5 g，MgSO4·7H2O 0.25 g，KCl 0.2 g，（NH4）2SO40.1 g，瓊脂15 g。pH值為7.5～8.0。

鐵載體活性檢測(cè)培養(yǎng)基參考Schywn等［13］。CAS培養(yǎng)基（L）：CAS 60.5 mg，CTAB 72.9 mg，1 mmol／L FeCl3·6H2O 10 mL，0.1 mol／L磷酸緩沖液（NaCl 0.125 g、NH4Cl 0.25 g、NaH2PO4·2H2O0.6 g、Na2HPO4·12H2O 2.5 g、KH2PO40.08 g、H2O 1000 mL）50 mL，H2O 940 mL，瓊脂15 g。pH＝6.8。

挑取根際細(xì)菌單菌落，在TSB培養(yǎng)液中振蕩培養(yǎng)至OD600＝0.5，吸取10μL菌液點(diǎn)接至NBRIP培養(yǎng)基或CAS培養(yǎng)基上，每個(gè)菌株3次重復(fù)，30℃黑暗培養(yǎng)96 h，觀察培養(yǎng)基變化。具有解磷活性的菌株應(yīng)在NBRIP培養(yǎng)基上產(chǎn)生透明圈，具有鐵載體的菌株應(yīng)在CAS培養(yǎng)基上出現(xiàn)橙紅色暈圈。

IAA活性檢測(cè)：將根際細(xì)菌單菌落接種于TSB培養(yǎng)液中振蕩培養(yǎng)至OD600＝0.8。取50μL菌液點(diǎn)接在金氏B培養(yǎng)基（青島高科園海博生物技術(shù)有限公司）上，30℃黑暗培養(yǎng)96 h，取4 mL Salkowski顯色劑（0.5 mol／L FeCl3與35%HClO4按體積比1∶50配制）滴加到培養(yǎng)基上，25℃避光反應(yīng)60 min，觀察菌落周圍是否有粉紅色暈圈。每個(gè)菌株3次重復(fù)。

1.5 辣椒根際細(xì)菌回接辣椒的基質(zhì)盆栽試驗(yàn)

將辣椒種子用傳統(tǒng)溫湯浸種法催芽：首先將種子置于55℃水中，保持水溫?cái)噭?dòng)15 min，室溫浸泡6 h，分散置于裝有濕濾紙的平皿上，28℃黑暗條件催芽。催芽時(shí)浸泡在1×104cfu／mL的每種待測(cè)菌懸液中作為單菌處理，將所有待測(cè)菌混合成1×105cfu／mL濃度作混菌處理（MIX），無(wú)菌水浸泡作為對(duì)照處理（CK），每處理共24個(gè)種子，平均種植于3個(gè)育苗缽內(nèi)（為3個(gè)平行重復(fù)）。種子露白后，種植于商品育苗基質(zhì)（湘正農(nóng)科，通用型，基質(zhì)成分為泥炭、脫鹽椰糠、蛭石和珍珠巖，有機(jī)質(zhì)22.21%，pH值為5.5～7.0，出廠前滅菌處理）。不施任何肥料，在26℃、長(zhǎng)日照條件下正常管理2周后，回接組每缽再補(bǔ)接1×106cfu／mL單株或混合菌液3 mL，對(duì)照組無(wú)菌水處理。待大部分植株展開4片真葉時(shí)進(jìn)行取樣統(tǒng)計(jì)。測(cè)量每株最大葉片的葉長(zhǎng)和葉寬；將整苗脫離育苗缽并小心洗脫根系外附著物，立即鋪平用掃描儀掃描成像，用Image J 1.51軟件測(cè)量掃描圖片中的根長(zhǎng)；吸干植株表面水分后，分別稱量根系和地上部重量。

1.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

采用Microsoft Excel進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。利用SPSS 21.0軟件進(jìn)行差異顯著性分析（P＜0.05）；SigmaPlot 12.5制作柱狀圖；BioEdit軟件繪制系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹。

2 結(jié)果與分析

2.1 辣椒根際細(xì)菌的菌群分析及特征群落的分離鑒定

通過(guò)16S rDNA測(cè)序分析，根據(jù)物種注釋結(jié)果（取條帶數(shù)大于等于5），辣椒幼苗期根際細(xì)菌有171個(gè)屬、初花期有199個(gè)屬、結(jié)果期有156個(gè)屬。辣椒3個(gè)生長(zhǎng)時(shí)期屬水平上豐度Top30的菌群結(jié)構(gòu)和豐度有差異。幼苗期豐度最高的3個(gè)屬為黃桿菌屬（Flavobacterium）、鏈霉菌屬（Streptomyces）和纖維弧菌屬（Cellvibrio）；初花期為根瘤菌屬（Rhizobium）、假單胞菌屬（Pseudomonas）和鏈霉菌屬；結(jié)果期為泛菌屬（Pantoea）、假單胞菌屬和食酸菌屬（Acidovorax）（圖1A）。在相對(duì)豐度Top30的屬中，3個(gè)時(shí)期均出現(xiàn)的屬有14個(gè)（圖1B），分別為黃桿菌屬、鏈霉菌屬、纖維弧菌屬、假單胞菌屬、根瘤菌屬、列契瓦尼爾氏菌屬（Lechevalieria）、Roseateles、德沃斯氏菌屬（Devosia）、食酸菌屬、Tahibacter、鞘脂菌屬（Sphingobium）、芽孢桿菌屬（Bacillus）、類芽孢桿菌屬（Paenibacillus）和氣單胞菌屬（Aeromonas），將該14個(gè)屬作為辣椒品種的特征群落。

在辣椒整個(gè)生長(zhǎng)期，利用TSA培養(yǎng)基分離獲得的辣椒根際細(xì)菌共102株，經(jīng)形態(tài)和16SrDNA測(cè)序鑒定屬于15屬102個(gè)種。與16SrDNA測(cè)序結(jié)果比對(duì)可知，分離得到的細(xì)菌中屬于高通量分析中辣椒特征群落的有7個(gè)屬共82株菌（圖1C），包括食酸菌屬（1株）、芽孢桿菌屬（45株）、黃桿菌屬（5株）、假單胞菌屬（17株）、類芽孢桿菌屬（2株）、根瘤菌屬（10株）和鏈霉菌屬（2株）。將上述分離得到的82株根際細(xì)菌進(jìn)行活性分析。其余分離得到的菌株包括布哈加瓦氏菌（Bhargavaea）、成對(duì)桿菌屬（Dyadobacter）、假芽孢桿菌（Fictibacillus）、賴氨酸芽孢桿菌（Lysinibacillus）、森林土源芽孢桿菌（Solibacillus）、微桿菌屬（Microbacterium）、申氏菌（Shinella）和寡養(yǎng)單胞菌（Stenotrophomonas）共8個(gè)屬20株細(xì)菌，其豐度均未達(dá)到各時(shí)期的Top30，本研究后續(xù)不采用。

圖1 辣椒根際細(xì)菌的16SrDNA測(cè)序分析和分離結(jié)果

2.2 辣椒根際拮抗病原菌及促生活性的篩選

對(duì)分離獲得的82株根際細(xì)菌進(jìn)行平板抑菌試驗(yàn)，獲得病原菌藜生鏈格孢的拮抗菌［副地衣芽孢桿菌（B.paralicheniformis）W17等］21株；病原菌灰霉菌的拮抗菌［多粘類芽孢桿菌（P.polymyxa）W33、貝 萊 斯芽 孢桿菌（B.velezensis）W19－2等］17株；病原菌多主棒孢霉的拮抗菌［多粘類芽孢桿菌W33、枯草芽孢桿菌（B.subtilis）W3－B9等］18株；病原菌角擔(dān)菌的拮抗菌［枯草芽孢桿菌W3－B9等］10株；病原菌極細(xì)枝孢霉的拮抗菌［枯草芽孢桿菌W3－B9、解淀粉芽孢桿菌（B.amyloliquefaciens）W2－1等］25株；病原菌木賊鐮孢菌的拮抗菌（解淀粉芽孢桿菌W3－F9、多粘類芽孢桿菌W33等）27株；病原菌變紅鐮孢菌的拮抗菌（多粘類芽孢桿菌W33、枯草芽孢桿菌W3－B9等）18株；病原菌黃色鐮孢菌的拮抗菌（多粘類芽孢桿菌W33、枯草芽孢桿菌W3－B9等）24株；病原菌輪枝鐮孢菌的拮抗菌［解淀粉芽孢桿菌W2－1、普沙根瘤菌（R.pusense）W4－C11等］36株。抑菌譜較廣的拮抗菌有9株，其中多粘類芽孢桿菌W33、解淀粉芽孢桿菌W3－C2、解淀粉芽孢桿菌W2－1和貝萊斯芽孢桿菌W19－2可拮抗9種病原菌，解淀粉芽孢桿菌W2－2、枯草芽孢桿菌W3－B9、枯草芽孢桿菌W3－F8、解淀粉芽孢桿菌W3－F9、普沙根瘤菌W4－C11可拮抗8種病原菌。

對(duì)分離獲得的82株根際細(xì)菌進(jìn)行鐵載體活性、解磷能力和IAA活性檢測(cè)，結(jié)果表明，能溶解Ca3（PO4）2的菌株共31株，其中阿氏芽孢桿菌（B.aryabhattai）W3，香茅醇假單胞菌（Ps.citronellolis）W31－1、W31－2，銅綠假單胞菌（Ps.aeruginosa）W34，Ps.mendocinaW35、假單胞菌W36－1、W36－5、W36－6，普沙根瘤菌W37－1、W37－2和根瘤菌W38－1產(chǎn)生的透明圈徑（透明圈半徑減去菌落半徑）＞1.5 cm。具有鐵載體活性的菌株共15株，包括假單胞菌W36－1、W36－2、W36－3、W36－4、W36－5、W36－6、W36－7，阿氏芽孢桿菌W3，香茅醇假單胞菌W31－1、W31－2，銅綠假單胞菌W34，Ps.mendocinaW35，根瘤菌W38－2和鏈霉菌W42－1、W42－2。具有IAA活性的菌株共9株，包括多粘類芽孢桿菌W33，解淀粉芽孢桿菌W3－B9、W3－C2，枯草芽孢桿菌W3－B9，阿氏芽孢桿菌W3，普沙根瘤菌W37－1、W37－2和根瘤菌W38－1、W38－2。

綜合上述生防及促生活性檢測(cè)結(jié)果，以同時(shí)兼具抑菌和促生活性為標(biāo)準(zhǔn)，最終選擇多粘類芽孢桿菌W33，普沙根瘤菌W37－1、W37－2，根瘤菌W38－1、W38－2，香茅醇假單胞菌W31－1、W31－2，貝萊斯芽孢桿菌W19－2，阿氏芽孢桿菌W3，Ps.mendocinaW35，假單胞菌W36－6，枯草芽孢桿菌W3－B9，解淀粉芽孢桿菌W3－C2、W3－F9、W2－1共15株細(xì)菌進(jìn)行促生作用盆栽試驗(yàn)（圖2）。

圖2 從辣椒根際篩選的15株細(xì)菌的防病促生活性特征圖

2.3 根際細(xì)菌回接辣椒的盆栽試驗(yàn)

結(jié)果（圖3A、B）表明，根際細(xì)菌對(duì)辣椒地上部及根鮮重均有提高作用，其中多粘類芽孢桿菌W33對(duì)地上部和根鮮重均有顯著提高作用（P＜0.05），地上部鮮重較對(duì)照提高48.52%，根鮮重提高151.61%。另外，普沙根瘤菌W37－1和W37－2、根瘤菌W38－1和W38－2、解淀粉芽孢桿菌W3－C2、阿氏芽孢桿菌W3、枯草芽孢桿菌W3－B9、香茅醇假單胞菌W31－2只顯著提高了根鮮重（P＜0.05），較對(duì)照分別提 高73.19%、126.12%、93.69%、89.32%、109.29%、95.63%、76.10%和75.54%。混合菌可顯著提高地上部和根鮮重（P＜0.05），較對(duì)照分別提高40.52%、125.95%。根冠比反映了根系與地上部關(guān)系，一般認(rèn)為，根冠比越高，植株生長(zhǎng)越好。由圖3C可知，根際細(xì)菌W38－2、W3－C2、W37－2和W33對(duì)根冠比有顯著改善作用（P＜0.05），較對(duì)照分別提高98.05%、93.78%、86.35%和68.74%；混合菌顯著提高根冠比60.74%。

對(duì)根長(zhǎng)和葉片大?。ㄈ~長(zhǎng)×葉寬）進(jìn)行測(cè)量，結(jié)果（圖3D、E）表明，除了W35和W31－1與對(duì)照無(wú)顯著差異，其余根際細(xì)菌都顯著增加了根長(zhǎng)（P＜0.05），增幅為22.85%～43.95%?；旌暇部娠@著促進(jìn)根長(zhǎng)（P＜0.05），增幅為35.79%。與對(duì)照相比，根際細(xì)菌W36－6和混合菌對(duì)葉片大小增加作用明顯，而W3－C2、W3－B9、W31－1和W35等菌株抑制葉片生長(zhǎng)，但所有菌株的作用均不顯著（P＜0.05）。

綜上，15株根際細(xì)菌對(duì)辣椒生長(zhǎng)均有不同程度的促進(jìn)作用，其中多粘類芽孢桿菌W33的增重效果最顯著，還可顯著促進(jìn)根的生長(zhǎng)，對(duì)根冠比也有顯著的調(diào)節(jié)作用。而菌株混合接種不僅具有顯著的增重、調(diào)節(jié)根冠比、促根生長(zhǎng)的效果，還在一定程度上增加了葉面積（圖3F），在各促生指標(biāo)上都表現(xiàn)突出。

圖3 15株辣椒根際細(xì)菌及混合菌回接辣椒對(duì)其生長(zhǎng)的影響

3 討論與結(jié)論

本研究分析了辣椒幼苗期、初花期和結(jié)果期的根際細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)，3個(gè)生長(zhǎng)期的相對(duì)豐度均在Top30的屬有14個(gè)，分別為黃桿菌屬、鏈霉菌屬、纖維弧菌屬、假單胞菌屬、根瘤菌屬、列契瓦尼爾氏菌屬、Roseateles、德沃斯氏菌屬、食酸菌屬、Tahibacter、鞘脂菌屬、芽孢桿菌屬、類芽孢桿菌屬和氣單胞菌屬。其中7個(gè)屬可通過(guò)TSA培養(yǎng)獲得，包括食酸菌屬、芽孢桿菌屬、黃桿菌屬、假單胞菌屬、類芽孢桿菌屬、根瘤菌屬和鏈霉菌屬。除了食酸菌屬通常為植物病原菌以外［14］，其它多為具有植物促生潛力的菌屬。例如，芽孢桿菌屬中的解淀粉芽孢桿菌［15］等、黃桿菌屬中的黃桿菌［16］、假單胞菌屬中的Ps.plecoglossicida［17］等、根瘤菌屬中的普沙根瘤菌［18］等和鏈霉菌屬中的變異鏈霉菌（S.variabilis）［19］等均被報(bào)道為植物根際促生菌（PGPR）。

對(duì)分離的屬于辣椒特征群落7個(gè)屬的82株細(xì)菌進(jìn)行抑菌及促生試驗(yàn)。抑菌性測(cè)定選用可侵染辣椒的9種真菌病原菌，其中藜生鏈格孢可引起辣椒黑斑?。?0］，多主棒孢霉引起辣椒棒孢葉斑病［21］，角擔(dān)菌引起絲核菌病害［22］，極細(xì)枝孢霉引起枝孢菌病害［23］，灰霉菌引起灰霉病［24］，木賊鐮孢菌、變紅鐮孢菌、黃色鐮孢菌和輪枝鐮孢菌引起辣椒腐爛病。辣椒根際細(xì)菌中，多粘類芽孢桿菌W33、解淀粉芽孢桿菌W3－C2、解淀粉芽孢桿菌W2－1和貝萊斯芽孢桿菌W19－2對(duì)上述9種病原菌均有抑制作用。其中多粘類芽孢桿菌對(duì)多主棒孢霉、角擔(dān)菌、極細(xì)枝孢霉和木賊鐮孢的抑菌性，解淀粉芽孢桿菌對(duì)多主棒孢霉、角擔(dān)菌、極細(xì)枝孢霉、木賊鐮孢菌、變紅鐮孢菌和黃色鐮孢菌的抑菌性和貝萊斯芽孢桿菌對(duì)多主棒孢霉、角擔(dān)菌、極細(xì)枝孢霉、木賊鐮孢菌和變紅鐮孢菌的抑菌性鮮有報(bào)道。對(duì)82株細(xì)菌的解磷、鐵載體和IAA活性的測(cè)定結(jié)果表明，同時(shí)具有3種促生活性的菌株為阿氏芽孢桿菌W3，另外解淀粉芽孢桿菌W3－C2和W3－F9、普沙根瘤菌W37－1和W37－2、根瘤菌W38－1同時(shí)具有解磷和IAA活性；Ps.mendocinaW35、香茅醇假單胞菌W31－1和W31－2、假單胞菌W36－6同時(shí)具有鐵載體和解磷活性；根瘤菌W38－2同時(shí)具有鐵載體和IAA活性。

基質(zhì)盆栽試驗(yàn)中，除了假單胞菌屬的菌株P(guān)s.mendocinaW35和香茅醇假單胞菌W31－1對(duì)辣椒根長(zhǎng)影響不顯著，其它菌株均有顯著的促進(jìn)作用。大部分根際細(xì)菌對(duì)地上部分的促生效果不顯著，僅多粘類芽孢桿菌W33顯著增加了地上部鮮重；所有菌株對(duì)葉片大小的影響未達(dá)顯著水平；根瘤菌屬、芽孢桿菌屬、類芽孢桿菌屬都有菌株顯著增加根冠比，而假單胞菌屬的菌株對(duì)根冠比無(wú)顯著影響。本研究中對(duì)辣椒具有較好促生作用的菌株有多粘類芽孢桿菌W33和解淀粉芽孢桿菌W3－C2等。張楊等［25］從‘蘇椒5號(hào)’中篩選的高產(chǎn)IAA和ACC脫氨酶的枯草芽孢桿菌NJAU－G10可顯著促進(jìn)基質(zhì)栽培辣椒的生長(zhǎng)。推測(cè)在促生作用上，具有IAA活性是重要的指標(biāo)。另外，混合菌接種的促生效果整體優(yōu)于單菌接種，但在實(shí)際應(yīng)用中多菌株發(fā)酵的難度顯然高于單菌株發(fā)酵，下一步需進(jìn)行發(fā)酵條件的優(yōu)化。本研究驗(yàn)證了辣椒根際細(xì)菌對(duì)基質(zhì)栽培辣椒的促生作用，為研發(fā)功能性生物基質(zhì)奠定了基礎(chǔ)。