ADAMDEC1在人結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)及臨床意義

王成興 譚群英 何耀明

中山大學(xué)附屬江門醫(yī)院胃腸外科，廣東 江門 529000

結(jié)直腸癌（colorectal cancer，CRC）是一種常見(jiàn)的消化道腫瘤，流行病學(xué)統(tǒng)計(jì)顯示，我國(guó)CRC的發(fā)病率處于消化道惡性腫瘤的第3位［1］。由于CRC在發(fā)展初期缺乏典型的癥狀及體征，導(dǎo)致初診的CRC多以中晚期為主［2］。因此，尋找新的生物學(xué)標(biāo)志物對(duì)CRC進(jìn)行早期診斷及預(yù)后評(píng)估具有重要臨床意義。ADAMDEC1（A disintegrin and ametalloprotease domain-like decysin 1）是解聚素-金屬蛋白酶家族成員之一，具有解聚素和金屬蛋白酶兩種結(jié)構(gòu)域，一方面通過(guò)解聚素功能增加腫瘤細(xì)胞的粘附和定植能力，另一方面通過(guò)調(diào)節(jié)金屬蛋白酶活性參與細(xì)胞因子的加工及胞外基質(zhì)的降解［3-4］。相關(guān)研究表明，ADAMDEC1的表達(dá)與腫瘤惡性程度呈正相關(guān)，其高表達(dá)提示更差預(yù)后，具有成為新型腫瘤生物標(biāo)志物或藥物作用靶點(diǎn)的潛力［5-6］。本研究擬通過(guò)對(duì)我院收治的100例CRC患者進(jìn)行回顧性分析，檢測(cè)ADAMDEC1在CRC中的表達(dá)情況并分析其與CRC患者臨床病理特征的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2014年12月至2015年12月在江門市中心醫(yī)院胃腸外科行根治性CRC切除術(shù)的患者100例。分別取CRC組織（T）、癌旁2 cm組織（P）及癌旁大于10 cm組織（N），入組患者術(shù)前均未接受放化療，術(shù)后組織標(biāo)本均經(jīng)病理學(xué)確認(rèn)且各項(xiàng)臨床資料完整。本研究經(jīng)江門市中心醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)（No.JXY2029）。

1.2 方法

1.2.1 免疫組織化學(xué)染色（immunohistochemistry，IHC）取100例T及對(duì)應(yīng)P、N，經(jīng)石蠟包埋切片、脫蠟水化及高壓修復(fù)抗原等工序后，予PBS漂洗，加入封閉液室溫孵育30 min。滴加兔抗人ADAMDEC1多克隆抗體（1∶100）并4℃孵育過(guò)夜。取出后予室溫復(fù)溫60 min，予PBS漂洗后滴加二抗。放置于37℃烤箱孵育30 min，再次PBS漂洗后予二氨基聯(lián)苯胺顯色，進(jìn)而復(fù)染、脫水、透明及封片。結(jié)果判定時(shí)以細(xì)胞質(zhì)和（或）細(xì)胞核出現(xiàn)黃色顆粒為陽(yáng)性結(jié)果，根據(jù)陽(yáng)性結(jié)直腸細(xì)胞比例及著色強(qiáng)度進(jìn)行評(píng)分。陽(yáng)性細(xì)胞比例<5%為0分，5%~25%為1分，>25%~50%為2分，>50%~75%為3分，>75%為4分；著色強(qiáng)度分為無(wú)著色、淡黃色、黃色、棕色，依次為0、1、2、3分。兩部分相加，≤3判為陰性，≥4則判為陽(yáng)性。

1.2.2 Western blot 隨機(jī)取10例T及對(duì)應(yīng)P、N，分別提取總蛋白并測(cè)蛋白濃度，調(diào)整樣品量后上樣，予電泳轉(zhuǎn)移至PVDF膜上。室溫下封閉60 min后加入兔抗人ADAMDEC1多克隆抗體（1∶2 000）、GAPDH（1∶5 000）并4℃孵育過(guò)夜。洗膜后加入二抗（1∶5 000）再孵育60 min。再次洗膜后滴加ECL試劑在室溫下孵育5 min。暗室顯影后攝影并保存為電子照片。每例樣品均分別進(jìn)行3次檢測(cè)，應(yīng)用image J軟件對(duì)條帶灰度值進(jìn)行數(shù)字化處理，以ADAMDEC1與GAPDH之間的灰度比來(lái)表示ADAMDEC1表達(dá)水平。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 25.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。各組間ADAMDEC1表達(dá)差異分析采用χ2檢驗(yàn)；Kaplan-Meier分析方法繪制ADAMDEC1高表達(dá)及低表達(dá)患者的生存曲線；Log-rank檢驗(yàn)比較ADAMDEC1高表達(dá)及低表達(dá)間生存率的差異；單因素及多因素Cox回歸分析臨床病理特征及ADAMDEC1表達(dá)情況與患者預(yù)后的關(guān)系。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié) 果

2.1 ADAMDEC1在CRC組織中的表達(dá)水平

IHC結(jié)果顯示，入組的100例CRC患者中ADAMDEC1在T中呈高表達(dá)84例，低表達(dá)12例，不表達(dá)4例，在對(duì)應(yīng)的P及N中均呈低表達(dá)或不表達(dá)。ADAMDEC1高表達(dá)患者T中的ADAMDEC1表達(dá)量明顯高于P及N，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.021，P=0.017）；而P與N之間的ADAMDEC1表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.072）。詳見(jiàn)圖1。

圖1 IHC檢測(cè)CRC患者不同組織中ADAMDEC1表達(dá)量

Western blot結(jié)果顯示，T中的ADAMDEC1蛋白表達(dá)量明顯高于P及N，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.037）；P及N中的ADAMDEC1蛋白表達(dá)量均呈低表達(dá)或不表達(dá)，兩者之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.107）。詳見(jiàn)圖2。

圖2 Western blot檢測(cè)CRC患者不同組織中ADAMDEC1表達(dá)量

2.2 ADAMDEC1的表達(dá)與CRC患者臨床病理特征的相關(guān)性

ADAMDEC1的高表達(dá)與CRC患者腫瘤大小（P=0.003）、TNM分期（P=0.001）及淋巴轉(zhuǎn)移（P=0.001）呈正相關(guān)，與年齡（P=0.824）、性別（P=0.148）、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移（P=0.284）及家族史（P=0.946）均無(wú)相關(guān)性。詳見(jiàn)表1。

表1 ADAMDEC1表達(dá)與CRC患者臨床病理特征的相關(guān)性

2.3 ADAMDEC1高表達(dá)與CRC患者總體生存率的相關(guān)分析

隨訪100例CRC患者術(shù)后5年，總生存率為42%（42/100），其中ADAMDEC1高表達(dá)患者術(shù)后5年生存率為34.52%（29/84）；而ADAMDEC1低表達(dá)或不表達(dá)者為81.25%（13/16）。兩組差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.023）。詳見(jiàn)圖3。

圖3 ADAMDEC1表達(dá)與CRC患者術(shù)后總體生存率的關(guān)系

2.4 Cox回歸分析CRC的獨(dú)立危險(xiǎn)因素

單因素分析結(jié)果顯示，腫瘤大小（P=0.008）、TNM分期（P=0.001）、淋巴轉(zhuǎn)移（P=0.001）及ADAMDEC1高表達(dá)（P=0.001）與患者的總體生存期顯著相關(guān)；進(jìn)而多因素分析顯示TNM分期（P=0.001）、淋巴轉(zhuǎn)移（P=0.033）及ADAMDEC1高表達(dá)（P=0.018）為CRC的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。詳見(jiàn)表2。

表2 Cox回歸分析ADAMDEC1表達(dá)對(duì)CRC患者總生存率的預(yù)后價(jià)值

3 討 論

CRC作為一種消化道惡性腫瘤，發(fā)病率在全球男性惡性腫瘤中排第3位，在女性中排第2位［7］，其病死率位居惡性腫瘤死因的第3位［8］。在我國(guó)納入腫瘤發(fā)病率重點(diǎn)監(jiān)控的5個(gè)大城市中，近年來(lái)CRC的發(fā)病率均有不同程度的上升［9］。針對(duì)CRC進(jìn)行早期診斷及早期治療是提高患者生存率及生活質(zhì)量的重要舉措。

近年來(lái)ADAMDEC1逐漸被發(fā)現(xiàn)在多種腫瘤中表達(dá)異常，且參與腫瘤的表型調(diào)控。Xu等［10］發(fā)現(xiàn)ADAMDEC1 mRNA在顱咽管瘤中高表達(dá)，而在正常腦組織中無(wú)表達(dá)。本研究通過(guò)IHC對(duì)T、P及N進(jìn)行了ADAMDEC1表達(dá)水平的檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)ADAMDEC1在T中總體呈高表達(dá)，而在P及N中均呈低表達(dá)或無(wú)表達(dá)；Western blot顯示CRC患者中ADAMDEC1蛋白的表達(dá)情況與IHC趨勢(shì)一致。本研究中IHC及Western blot顯示ADAMDEC1在CRC組織中呈高表達(dá)，結(jié)果與國(guó)內(nèi)外相關(guān)研究類似［10-11］。研究顯示，ADAMDEC1具有解聚素、金屬蛋白酶活性，參與蛋白水解，負(fù)調(diào)控細(xì)胞附著，破壞腫瘤細(xì)胞侵襲的組織學(xué)屏障，在腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移過(guò)程中具有重要作用［12-13］。Crouser等［14］發(fā)現(xiàn)，ADAMDEC1在肺肉瘤組織中呈明顯高表達(dá)，且表達(dá)情況與疾病的嚴(yán)重程度呈正相關(guān)，提示其參與了肺組織的損害或改造過(guò)程，并具有作為疾病活動(dòng)判斷指標(biāo)的潛力。Liu等［15］通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)下調(diào)ADAMDEC1可抑制膠質(zhì)瘤的發(fā)生和進(jìn)展，推測(cè)其可能成為膠質(zhì)瘤治療的新靶點(diǎn)。本研究相關(guān)性分析顯示患者的ADAMDEC1表達(dá)水平與腫瘤大小、TNM分期及淋巴轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)；Kaplan-Meier生存分析進(jìn)一步顯示ADAMDEC1高表達(dá)的CRC患者相比低表達(dá)或無(wú)表達(dá)患者具有更低的總體生存期；Cox回歸分析中提示ADAMDEC1的表達(dá)水平是影響CRC患者術(shù)后總體生存率的一個(gè)獨(dú)立危險(xiǎn)因素，這提示ADAMDEC1的高表達(dá)導(dǎo)致了CRC患者更差的預(yù)后，通過(guò)對(duì)ADAMDEC1表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè)，可協(xié)助醫(yī)生早期診斷CRC及判斷其預(yù)后。但當(dāng)前對(duì)ADAMDEC1在CRC發(fā)生、發(fā)展及侵襲轉(zhuǎn)移等領(lǐng)域的相關(guān)研究較少，其生物功能及分子機(jī)制仍需要進(jìn)一步挖掘。

綜上所述，ADAMDEC1具有成為一種CRC早期診斷及預(yù)后評(píng)價(jià)的腫瘤生物標(biāo)志物的潛力。進(jìn)一步對(duì)其作用機(jī)制進(jìn)行深入研究，有助于闡明CRC的發(fā)生、發(fā)展機(jī)制，為臨床上CRC的診療提供新的靶點(diǎn)。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突