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    基于微納米金屬有機(jī)框架的汗液生物傳感研究

    2022-02-24 07:07:24陳至威陳艷霞秦雷
    傳感器世界 2022年12期
    關(guān)鍵詞:汗液微孔傳感

    陳至威 陳艷霞* 秦雷

    北京信息科技大學(xué)傳感器北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,北京 100101

    0 前言

    目前,人們越來越重視自身的健康狀況,血液也一直被認(rèn)為是檢測人體健康的首選分析物。但是,抽血檢查容易受到感染,具有一定的創(chuàng)傷性。相比之下,汗液檢測是一種非侵入性的分析手段,汗液較容易在表皮上獲取和收集,而且汗液中含有多種與健康評估和疾病診斷有關(guān)的生物標(biāo)志物[1],如pH、葡萄糖、乳酸、蛋白質(zhì)、鈣離子、氯離子等。因此,汗液傳感分析作為一種無創(chuàng)檢測方式,對于疾病診斷有著極其重大的意義。

    隨著納米材料的引入,基于納米材料的新型生物傳感界面發(fā)展迅速[2]。金屬有機(jī)框架(metal-organic framework,MOF)材料是一類新型多孔晶體材料[3],是由金屬離子/團(tuán)簇和有機(jī)橋接配體配位而成的一維、二維或三維結(jié)構(gòu)。金屬有機(jī)框架具有結(jié)構(gòu)與孔道尺寸可調(diào)控性、多孔性、比表面積大、組成多樣、金屬位點(diǎn)不飽和性等特點(diǎn)[4-5]。近年來,金屬有機(jī)框架也作為一種新興傳感材料被廣泛應(yīng)用于食品、環(huán)境、重金屬、有毒氣體等檢測[6-11]。郭穎等人[6]利用分子印跡聚合物、石墨烯量子點(diǎn)以及金屬有機(jī)框架制備了一種熒光傳感器,用于檢測食品中的強(qiáng)力霉素,其檢出限低至0.029 mg/L。劉娜等人[7]利用金屬有機(jī)框架材料摻雜的水凝膠(PAAM-SA/MOF)快速萃取和檢測養(yǎng)殖水體中孔雀石綠。韓璐等人[8]利用3種鑭系元素Ce、Tb、Gd合成了金屬有機(jī)框架納米酶,并將其用于多巴胺(DA)的快速、靈敏檢測,其檢出限為6.47×10-8M。趙吉星等人[9]以Zn/Co-ZIF為前驅(qū)體,制備了雙金屬M(fèi)OF衍生ZnCo多孔碳骨架,并用它來修飾電極,制備出一種新型的電化學(xué)傳感器,用于水環(huán)境中Hg(Ⅱ)的檢測,具有較好的靈敏度和較低的檢測限。DANG W等人[10]制備出AuNPs-NH2/Cu-MOF復(fù)合材料,用其修飾玻碳電極(GCE),用于H2O2的電化學(xué)檢測。劉金彤等人[11]設(shè)計(jì)了一種多功能的金屬有機(jī)框架發(fā)光探針,用于對烯啶蟲胺的高靈敏檢測,檢測限可達(dá)0.16 μg/mL。

    目前,基于金屬有機(jī)框架材料的熒光生物傳感器、電化學(xué)生物傳感器等,多借助外用精密設(shè)備,檢測流程較為復(fù)雜,且其在汗液生物傳感中的應(yīng)用較少。本研究設(shè)計(jì)了一種基于微納米金屬有機(jī)框架的汗液生物傳感界面,用于人體汗液的比色檢測。這種微納米金屬有機(jī)框架制備方法簡單,成本低廉,穩(wěn)定性好,可以長時(shí)間保存。本研究通過比色法對汗液中的葡萄糖、pH進(jìn)行檢測,可以較為直觀地觀察到反應(yīng)過程中的顏色變化,操作方便,檢測快速、靈敏。

    1 材料與方法

    1.1 材料和儀器

    1.1.1 試劑與材料

    載玻片(25.4 mm×76.2 mm×1 mm,帆船牌)、六水合硝酸鋅((Zn(NO3)2·6H2O,99%,國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)、三乙胺鹽酸鹽(C6H16ClN,99%,上海阿拉丁生化科技股份有限公司)、2-甲基咪唑(C4H6N2,98%,上海阿拉丁生化科技股份有限公司)、乙醇(75%,Sigma-Aldrich公司)、甲苯(C7H8,Sigma-Aldrich公司)、十八烷基三氯硅烷(OTS,95%,Sigma-Aldrich公司)。

    葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液(5 mmol/L)、葡萄糖檢測試劑盒、紫色石蕊指示劑、酸堿溶液(pH為5.0~8.0)均購自伊勢久生物科技有限公司。實(shí)驗(yàn)所用的水為去離子水、超純水,其他試劑均為分析純。

    1.1.2 主要儀器

    數(shù)控超聲波清洗機(jī)(KQ3200DE)、電熱恒溫干燥箱(DHG-9031A)、電熱鼓風(fēng)干燥箱(DHG-9075A)、等離子清洗機(jī)(CPC-A)、紫外臭氧清洗機(jī)、光學(xué)接觸角張力測試儀(LSA-100)、掃描電子顯微鏡(SEM)、智能手機(jī)(Android)。

    1.2 實(shí)驗(yàn)部分

    1.2.1 微納米金屬有機(jī)框架的制備

    將載玻片用超聲波清洗器清洗后,放入40 ℃的鼓風(fēng)干燥箱中烘干,然后將烘干的載玻片放置在玻璃培養(yǎng)皿中,用等離子清洗機(jī)清洗,用乙醇清洗稱量瓶,并自然晾干。

    稱取150 mg六水合硝酸鋅,70 mg三乙胺鹽酸鹽,120 mg二甲基咪唑,將其倒入盛有50 mL超純水的離心管中混勻。將清洗干凈的載玻片放置在稱量瓶中,取25 mL配制好的溶液倒入稱量瓶中,用封口膜密封好,將其放到80 ℃的恒溫干燥箱中沉積24小時(shí),制得微納米金屬有機(jī)框架基底。

    1.2.2 表面改性

    用乙醇將稱量瓶清洗干凈,自然晾干,將所制得的微納米金屬有機(jī)框架基底用等離子清洗機(jī)處理5分鐘。

    用移液槍分別取10 mL的甲苯與100 μL的十八烷基三氯硅烷,加入稱量瓶中混勻;然后將潔凈的載玻片放入稱量瓶中,用封口膜密封好,在避光處靜置30分鐘;半小時(shí)后取出載玻片,用無水乙醇輕輕沖洗,然后放入120 ℃的鼓風(fēng)干燥箱中烘干10分鐘或自然晾干,以獲得表面改性的樣品;接著,在樣品表面覆蓋上定制的掩模板,置于紫外臭氧清洗機(jī)中圖案化處理10分鐘,得到超浸潤微孔傳感界面。

    1.2.3 工作液及濃度梯度溶液配制

    配制葡萄糖氧化酶-過氧化物酶(GOD-POD)工作液;另外,利用雙蒸水(ddH2O)配制濃度梯度為 0 mmol/L、1.25 mmol/L、2.5 mmol/L、3.75 mmol/L、 5 mmol/L的葡萄糖梯度溶液,備用。

    1.2.4 功能化底物修飾

    用移液槍取1 μL GOD-POD工作液滴加在微孔中進(jìn)行功能化修飾,待溶劑揮發(fā)后(室溫下自然靜置10分鐘),用于檢測葡萄糖的活性成分會(huì)負(fù)載到微孔中,以獲得用于檢測汗液中葡萄糖的檢測區(qū)域。

    用移液槍取1 μL紫色石蕊指示劑滴加在微孔中進(jìn)行功能化修飾,待溶劑揮發(fā)后(室溫下自然靜置10分鐘),用于檢測pH的活性成分會(huì)負(fù)載到微孔中,以獲得用于檢測汗液pH的檢測區(qū)域。

    1.2.5 檢測

    用移液槍取1 μL待測液滴加在功能化修飾過的微孔檢測區(qū),觀察顏色反應(yīng)變化。

    1.3 表征

    1.3.1 樣品表征

    樣品的表面微觀形貌采用掃描電子顯微鏡進(jìn)行表征,樣品的接觸角采用LSA-100光學(xué)接觸角張力測試儀進(jìn)行測量。

    1.3.2 傳感器比色表征

    用手機(jī)拍攝相同反應(yīng)時(shí)間的不同濃度葡萄糖及不同pH值的比色圖像,并用分析軟件將其數(shù)值化為RGB信號的變化趨勢,作出檢測柱狀圖。

    RGB,指的是常用的RGB模型,它以R(Red,紅)、G(Green,綠)、B(Blue,藍(lán))3個(gè)通道為基礎(chǔ),且這3個(gè)組分的值的范圍均為0到255。當(dāng)這3種基本色以不同比例進(jìn)行混合時(shí),會(huì)產(chǎn)生不同的顏色。這意味著,在一般情況下,每種顏色均可由其對應(yīng)的RGB值進(jìn)行數(shù)值化表示。

    2 結(jié)果與討論

    2.1 樣品表征

    圖1為微納米金屬有機(jī)框架在掃描電子顯微鏡下的表面微觀形貌圖像。從圖中可以看出,金屬有機(jī)框架呈大小均勻的米粒狀,參差不齊,相互交疊,孔隙較多,具有較高的粗糙度及較大的比表面積,有利于待測物的牢固吸附與富集,可以提高檢測靈敏度。

    圖2(a)為制備出的微納米金屬有機(jī)框架在光學(xué)接觸角張力測試儀下的圖像,當(dāng)2 μL的液滴觸碰到微納米界面后會(huì)完全鋪展,接觸角接近于0°,呈超親水性;圖2(b)為微納米金屬有機(jī)框架經(jīng)表面改性后在光學(xué)接觸角張力測試儀下的圖像,接觸角為154.3±3.0°,呈超疏水性,因此,通過圖案化處理形成的超疏水-超親水傳感界面能夠使待測液滴完全限制在超親水區(qū)域內(nèi);圖2(c)為2 μL不同濃度的紫色染料滴加到圖案化傳感界面的實(shí)物圖,從圖中可以看出,由于浸潤性差異,液滴完全位于超親水微孔中且沒有溢出,液滴之間不會(huì)互相干擾,這使得待測液滴能夠富集在檢測區(qū)域內(nèi),有利于后續(xù)樣本的分析檢測。

    2.2 檢測性能

    2.2.1 葡萄糖檢測

    葡萄糖氧化酶能夠催化葡萄糖氧化成葡萄糖酸,繼而產(chǎn)生紅棕色絡(luò)合物。圖3是葡萄糖溶液在濃度梯度為0 mmol/L、1.25 mmol/L、2.5 mmol/L、3.75 mmol/L、5 mmol/L的檢測柱狀圖,從圖中可以看出,隨著葡萄糖溶液濃度的增加,其對應(yīng)的R、G、B值有著明顯的變化趨勢,都隨著葡萄糖溶液濃度的增加而顯著降低。

    2.2.2 pH檢測

    紫色石蕊試劑是一種常用的酸堿指示劑,遇酸變紅,遇堿變藍(lán)。圖4是pH為6、6.5、7、7.5、8的檢測柱狀圖,從圖中可以看出,隨著pH值的變大,溶液由酸性變?yōu)閴A性,其對應(yīng)的R值逐漸減小,G、B值的整體趨勢呈先增大后減小。

    2.3 人體汗液檢測

    收集志愿者有氧運(yùn)動(dòng)半小時(shí)后的汗液,取1 μL滴加在基于微納米金屬有機(jī)框架的功能化微孔中,進(jìn)行實(shí)際人體汗液的葡萄糖與pH檢測,分別進(jìn)行6組檢測。

    圖5(a)是實(shí)際汗液的葡萄糖檢測柱狀圖,與圖3進(jìn)行比對,可以得出,該志愿者的汗液中幾乎沒有葡萄糖,健康狀況良好。

    由于出汗率的差異,人體汗液的pH值正常范圍一般為4.2~7.5。圖5(b)是實(shí)際汗液的pH檢測柱狀圖,與圖4進(jìn)行比對,可以得出,該志愿者的汗液pH值在6.5~7之間。

    上述檢測結(jié)果可以得出,本研究的基于微納米金屬有機(jī)框架的生物傳感界面可實(shí)現(xiàn)人體汗液的高靈敏、可靠檢測,具有一定的實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。

    3 結(jié)束語

    本研究制備了微納米金屬有機(jī)框架,對其進(jìn)行表面改性、圖案化處理以及功能化修飾,設(shè)計(jì)出了一種制備簡單、成本低、穩(wěn)定性好的汗液生物傳感界面。這種基于微納米金屬有機(jī)框架的汗液生物傳感界面實(shí)現(xiàn)了葡萄糖、pH的準(zhǔn)確比色分析,可用于實(shí)際人體汗液檢測。本研究的基于微納米金屬有機(jī)框架的汗液生物傳感界面,在多組分生物傳感和生物醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域具有巨大的潛在應(yīng)用前景。

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