畜禽養(yǎng)殖生產(chǎn)中血清抗體檢測技術(shù)的應(yīng)用

王守倫，高維煥

(1.河北省唐山市豐南區(qū)胥各莊動物防疫站，河北唐山 063300；2.河北省唐山市豐南區(qū)唐坊動物防疫站，河北唐山 063308)

畜禽養(yǎng)殖生產(chǎn)中出現(xiàn)疫病，不僅會損害養(yǎng)殖場的經(jīng)濟利益，還會對衛(wèi)生安全以及公眾健康造成影響，因此必須要做好疫病檢測。血清抗體檢測技術(shù)的應(yīng)用，能為疫病防控提供便利。

1 疫病預(yù)防

1.1 引種檢疫

血清學(xué)檢測是以抗原為基礎(chǔ)，和相關(guān)抗體中的特異性連接在一起，通過這種方法可以借助已知的抗原，對血清以及其余樣品進行檢測處理，以此來得知待檢血清以及其他樣品當(dāng)中是否擁有相應(yīng)的抗體。現(xiàn)階段，由于這種特異性結(jié)合的抗體檢測方法擁有良好的檢測效果，且檢測價格較低，檢測流程簡單，被廣泛應(yīng)用于血清抗體檢測當(dāng)中，并發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。但養(yǎng)殖戶在對養(yǎng)殖場進行疫苗預(yù)防時，必須要把新引進的畜禽安置在隔離區(qū)內(nèi)進行隔離，不能將其和原有禽畜安置在一起，同時還要按時對隔離區(qū)內(nèi)的禽畜進行健康檢疫，保證隔離區(qū)內(nèi)的禽畜健康安全。在這一期間檢測人員要做好血清抗體采集工作，并將采集到的血清樣本送入實驗室間檢測，從而獲得血清抗體檢測結(jié)果，然后根據(jù)檢測結(jié)果對其進行安置。

1.2 養(yǎng)殖場免疫程序制定

養(yǎng)殖戶在對養(yǎng)殖場制定免疫程序時，必須做好母源抗體的檢測工作，在實際檢測過程中，要結(jié)合當(dāng)前養(yǎng)殖場內(nèi)畜禽的免疫程序科學(xué)、合理制定，以此來提高免疫程序的科學(xué)性與合理性，提高免疫效果，確保畜禽能夠健康成長。為此養(yǎng)殖戶應(yīng)該在畜禽幼年時便進行第一針免疫，從而保障免疫程序的準(zhǔn)確性。但需要注意的是，在對畜禽進行免疫時，其免疫效果會通過母源抗體反映出來，為此養(yǎng)殖戶必須清楚母源抗體的消長規(guī)律以及母源抗體與免疫時間的關(guān)系，確定第一針免疫時間。

1.3 免疫程序修訂

檢測人員在操作中，需要具有較為完整的免疫程序，結(jié)合血清學(xué)檢測免疫后的抗體水平[1]。這種血清抗體檢測方式能夠?qū)ωi群免疫的抗體有個準(zhǔn)確的評估，只需要選擇適合的疫苗進行接種，便能最大程度上確保免疫方式的科學(xué)性以及有效性，使免疫程度方面的問題直觀展現(xiàn)出來，使養(yǎng)殖戶可以更好地對免疫程序進行完善優(yōu)化，以此來提高免疫效果。

只有當(dāng)畜禽群體抵抗力相對平穩(wěn)時，才能最大程度上降低疫病發(fā)生概率，確保畜禽健康，因此養(yǎng)殖戶應(yīng)該定期對畜禽開展抗體水平監(jiān)測，以此來掌握畜禽的抗體水平，這樣當(dāng)畜禽在生長過程中出現(xiàn)問題時，養(yǎng)殖戶便能及時發(fā)現(xiàn)，并采取對應(yīng)措施進行補救，以此來挽回經(jīng)濟損失。為此養(yǎng)殖戶可以通過對各批次豬群的免疫結(jié)果進行對比，掌握豬群健康狀況。尤其是很多病原在對豬群進行侵襲時，豬群并不會出現(xiàn)明顯癥狀，不過依然會存在發(fā)病的危險。正因為如此只有做好檢測工作，才能在豬群出現(xiàn)病原時，便于第一時間發(fā)現(xiàn)，并采取對應(yīng)措施進行預(yù)防。

2 疫病診斷

2.1 疫病發(fā)病原因分析

當(dāng)疫病出現(xiàn)后，準(zhǔn)確對疫病出現(xiàn)原因進行分析能夠為后續(xù)的治療以及防治提供重要依據(jù)。而開展血清抗體檢測能夠有效分析出疫病發(fā)病原因，為后續(xù)的疫病防治工作打下堅實的基礎(chǔ)。例如：若是豬群在發(fā)病前后的某種病原疫苗抗體水平相對較高，那么便可以將該病原排除在外，縮小排查范圍。如果豬群在發(fā)病前的抗體水平相對較低，并且在疫病發(fā)生后抗體水平不斷上升，那么便能夠判斷出是該病原導(dǎo)致的疫病出現(xiàn)，為后續(xù)疫病治療提高依據(jù)。

2.2 疫病診斷與處理

在實際研究過程中，應(yīng)該到當(dāng)?shù)氐酿B(yǎng)殖場開展血清抗體檢測。根據(jù)動物疫病的癥狀對其進行疫病診斷，并對新出現(xiàn)的病癥進行明確，在這期間，檢測人員應(yīng)該借助科學(xué)、合理的檢測技術(shù)對出現(xiàn)的疫病進行診斷，以此來展現(xiàn)出疫病防治的作用。但在對病原進行分離時，往往需要花費較多的時間，而且如果養(yǎng)殖場內(nèi)發(fā)生畜禽發(fā)病這一情況，會導(dǎo)致疫病擴散和蔓延，讓更多的畜禽感染上疫病，不僅讓疫病變得更加嚴(yán)重，還會損害養(yǎng)殖戶的經(jīng)濟利益。因此為了避免這種情況發(fā)生，當(dāng)疫病出現(xiàn)時，養(yǎng)殖戶應(yīng)該快速對疫病進行診斷，然后及時采取對應(yīng)措施進行治療，降低養(yǎng)殖戶的經(jīng)濟損失。

3 疫病凈化和根除

養(yǎng)殖戶要想讓養(yǎng)殖場符合疫病凈化標(biāo)準(zhǔn)，最為重要的一個指標(biāo)便是在長時間內(nèi)養(yǎng)殖場當(dāng)中沒有疫病發(fā)生以及沒有感染狀態(tài)[2]。但想要達成這一目標(biāo)，就必須要做好養(yǎng)殖場禽畜的疫病監(jiān)測工作，定期對其進行檢測，以此來掌握畜禽的身體情況，避免疫病的出現(xiàn)，使畜禽能夠健康生長。血清學(xué)對豬偽狂犬病的凈化效果最佳，只需借助IgE疫苗并搭配相應(yīng)的試劑便能夠?qū)Ω腥緞游镞M行野毒區(qū)分，最終產(chǎn)生疫苗抗體，完成對豬偽狂犬病凈化。

而且利用E2蛋白來制作豬瘟疫苗，可以讓豬群產(chǎn)生抗體，從而與野毒抗體進行區(qū)分。此外，通過血清抗體檢測，還可以對豬瘟野毒株與豬瘟兔化株進行區(qū)分，使養(yǎng)殖戶可以準(zhǔn)確進行疫病防治，降低疫病對養(yǎng)殖戶的經(jīng)濟損失。而血清抗體檢測對于豬瘟凈化的價值和作用在于，利用檢測找到野毒株在入侵到豬群當(dāng)中后豬體內(nèi)所產(chǎn)生的病原抗體，以此來推斷出感染的豬只。

4 以豐南區(qū)胥各莊生豬為例

4.1 檢測材料

4.1.1 樣品來源

結(jié)合豐南區(qū)胥各莊生豬養(yǎng)殖場規(guī)模以及我國農(nóng)業(yè)檢測對樣品數(shù)量的要求，分別對4個生豬養(yǎng)殖場進行樣品采集工作，對其進行血清抗體檢測。4個養(yǎng)殖場簡稱為A場、B場、C場、D場。最終檢測人員分別從4個養(yǎng)殖場中采集了19、16、12、20份樣品，總共為67份。

其中A養(yǎng)殖場在3月份免疫了FMDV-0、PRRSV以及CSFV；B養(yǎng)殖場在4月份對生豬免疫了PRRSV疫苗；C養(yǎng)殖場和D養(yǎng)殖場都在3月份對生豬免疫了CSFV以及PRRSV疫苗。4個養(yǎng)殖場都沒有對生豬進行ASFV疫苗免疫。

4.1.2 主要試劑和儀器

檢測實驗分別使用PRRSV與CSFV血清抗體以及ASFV與FMDV-0血清抗體，并采用愛德士以及金諾百特公司的ELISA檢測試劑盒對采集到的樣品進行檢測[3]。同時在實驗過程中還用到生物安全柜、酶標(biāo)儀以及冷凍離心機。

4.2 檢測方法

4.2.1 血清分離

為了更好地進行血清抗體檢測工作，檢測人員在對樣品進行采樣時，必須確保動物處于空腹?fàn)顟B(tài)，然后在其前腔靜脈處采血10 ml，以此來確保檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性與可靠性。同時在采集完樣品后，檢測人員應(yīng)該立即把樣品放入帶有冰袋的保溫箱當(dāng)中，并保證保溫箱內(nèi)的溫度大約在4℃，然后將其運送到實驗室當(dāng)中進行檢測工作。

但需要注意的是，在對樣品進行檢測前，應(yīng)該對樣品進行離心，分離樣品中的血清，1500 r/min離心10 min，這樣便可以把樣品當(dāng)中的血清分離，然后將其分別裝進不同的容器當(dāng)中，并保存到－80℃的冰箱內(nèi)進行保存?zhèn)溆?，為后續(xù)的檢測提供基礎(chǔ)。另外檢測人員在實驗室當(dāng)中進行的操作，都必須在生物安全柜內(nèi)開展，如此才能最大程度上保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性與可靠性，為后續(xù)的疫病防控提供數(shù)據(jù)支持。

4.2.2 抗體檢測

檢測人員在對血清抗體檢測前，應(yīng)該把需要檢測的血清放置在恒溫為60℃的金屬浴內(nèi)20min對需要檢測的血清進行病原滅活[4]。與此同時在對ASFV、PRRSV、FMDV-0以及CSFV這幾種血清抗體進行檢測時，必須要按照對應(yīng)的實際說明書開展，并通過酶標(biāo)儀來獲取檢測數(shù)值，然后根據(jù)試劑盒規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)對檢測結(jié)果進行判斷，從而確定檢測樣品是否合格。如果動物已經(jīng)做過相關(guān)疫苗的免疫，那么檢測結(jié)果為免疫抗體，如果沒有做過相關(guān)疫苗的免疫工作，則檢測結(jié)果為病毒感染抗體。

4.2.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計

檢測人員在完成血清抗體檢測工作后，還要對檢測結(jié)果進行統(tǒng)計，為此可以利用Excel軟件對結(jié)果為陽性的個數(shù)進行統(tǒng)計，并以此為基礎(chǔ)對各養(yǎng)殖場的陽性率以及總陽性率進行檢測。

4.3 檢測結(jié)果

4.3.1 生豬群體4種病毒血清抗體

4個養(yǎng)殖場的FMDV-0、PRRSV以及CSFV的陽性率分別為100%、74.6%以及28.4%，而ASFV的陽性率為0%。其中4個養(yǎng)殖場的CSFV與PRRSV陽性率符合相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，而FMDV-0的陽性率則不符合要求，同時通過檢測發(fā)現(xiàn)，4個養(yǎng)殖場的動物身上都不具備ASFV抗體，這代表4個養(yǎng)殖場動物都沒有感染ASFV。見表1。

表1 檢測結(jié)果

4.3.2 不同保種場4種病毒血清抗體分析

根據(jù)各養(yǎng)殖場的免疫情況對血清抗體進行分析，其中A養(yǎng)殖場分別對FMDV-0、PRRSV以及CSFV疫苗，并都取得了良好的免疫效果；而B養(yǎng)殖場因為只免疫了PRRSV這一種疫苗，并沒有進行FMDC-0以及CSFV疫苗的免疫工作，所以其抗體檢測結(jié)果和免疫情況相同，沒有發(fā)生變化。C養(yǎng)殖場與D養(yǎng)殖場由于只進行了CSFV以及PRRSV疫苗的免疫工作，沒有對FMDC-0疫苗進行免疫，因此C養(yǎng)殖場與D養(yǎng)殖場的抗體檢測結(jié)果和其免疫情況一樣，沒有出現(xiàn)較大變化。通過上述分析不難發(fā)現(xiàn)，4個生豬養(yǎng)殖場當(dāng)中，除了A養(yǎng)殖場以外，其余3個養(yǎng)殖場都缺乏對疫病免疫的重視，尤其是對國家強調(diào)的FMDV-0疫苗更是全都沒有進行接種，無法保證公共安全以及衛(wèi)生健康，不符合相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)。

4.4 討論

開展動物免疫抗體水平監(jiān)測是檢驗疫苗免疫效果及動物集體免疫狀況的重要手段，也是養(yǎng)殖場進行補充免疫和防疫措施落實的重要依據(jù)[5]。通過血清抗體檢測結(jié)果，能夠為相關(guān)部門制定畜禽疫病防控提供依據(jù)，確保防控規(guī)劃具有科學(xué)性與合理性。根據(jù)這次檢測結(jié)果不難發(fā)現(xiàn)，各養(yǎng)殖場都能按照相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)進行PRRSV疫苗的免疫工作，而且所有養(yǎng)殖場的免疫率均為100%。不過對其他疫病的防控免疫情況則較差，同時在對B、C、D 3個養(yǎng)殖場的檢測時都沒有在動物身上找到相應(yīng)抗體，這證明該養(yǎng)殖場沒有出現(xiàn)類似的感染，疫病防控效果良好。

通過對4個養(yǎng)殖場的檢測結(jié)果能夠得出結(jié)論，被國家強制要求的FMDV-0疫苗的免疫情況十分不理想，4個養(yǎng)殖場當(dāng)中僅有A養(yǎng)殖場實行了免疫，其余3個養(yǎng)殖場都沒有開展免疫工作。因此建議其余3個養(yǎng)殖場做好免疫工作，并根據(jù)自身養(yǎng)殖場的實際情況對免疫程序進行科學(xué)、合理調(diào)整，以此來提高免疫效果，確保養(yǎng)殖場免疫情況符合相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)。除此之外，養(yǎng)殖場還要定期進行檢測工作，提升群體免疫效果。

5 結(jié)論

綜上所述，要想加強血清抗體檢測技術(shù)在畜禽養(yǎng)殖生產(chǎn)中的應(yīng)用，還需綜合考慮各種應(yīng)用方法和實際情況，選取有利方案。在此基礎(chǔ)上，將各種應(yīng)用方法整合在一起，加強血清抗體檢測技術(shù)在畜禽養(yǎng)殖生產(chǎn)中的應(yīng)用，為后續(xù)疫病防控打下基礎(chǔ)。