生魚諾卡氏菌病和舒伯特氣單胞菌病的鑒別與防控

鄭杰民

(廈門海洋職業(yè)技術(shù)學(xué)院，福建 廈門 361008)

生魚是輻鰭魚綱、鱸形目、鱧科、鱧屬魚的統(tǒng)稱，以烏鱧(Channa argus)與斑鱧(Channa maculata)人工雜交而成的雜交鱧，因具有生長(zhǎng)快和抗病力雙重優(yōu)勢(shì)，已成為生魚高密度養(yǎng)殖放養(yǎng)比例最高的品種。制約生魚高密度養(yǎng)殖盈利的關(guān)鍵因素中，病害及其造成的損失排在第1位，其中危害最為嚴(yán)重的是以內(nèi)臟“白點(diǎn)”為臨床癥狀的諾卡氏菌病和舒伯特氣單胞菌病。前者的病原主要為鰤?mèng)~諾卡氏菌(Nocardia seriolae)，后者的病原為舒伯特氣單胞菌(Aeromonas schubertii)。兩者臨床癥狀上均為內(nèi)臟出現(xiàn)“白點(diǎn)”，在診斷上極易混淆，生產(chǎn)上常因?yàn)榧膊≡\斷不準(zhǔn)確而延誤治療時(shí)機(jī)，造成較大經(jīng)濟(jì)損失。因此，本文從病原屬性、病理特征、鑒別診斷和防控技術(shù)四個(gè)方面，比較生魚諾卡氏菌病和舒伯特氣單胞菌病的差異，以期推動(dòng)生魚養(yǎng)殖業(yè)健康發(fā)展。

一、病原屬性

1.病原形態(tài)與分布

(1)鰤?mèng)~諾卡氏菌：鰤?mèng)~諾卡氏菌為革蘭氏陽(yáng)性長(zhǎng)桿菌，具有弱抗酸性，沒有運(yùn)動(dòng)能力，以腐生為主，廣泛分布于土壤、活性污泥、海水、腐爛的植被及動(dòng)物的排泄物中(張媛等，2012)。該菌生長(zhǎng)緩慢，28℃下需5～14天培養(yǎng)皿上才形成白色或淡黃色菌落。菌落呈沙?；蚧ò?duì)?，粗糙易碎，邊緣不?guī)則，表面有時(shí)凸起形成皺褶，在綿羊血平板上不溶血。

(2)舒伯特氣單胞菌：舒伯特氣單胞菌為革蘭氏陰性短桿菌，屬于氣單胞菌科(Aeromonadaceae)、氣單胞菌屬(Aeromanas)。該菌單極鞭毛，運(yùn)動(dòng)極為活潑，廣泛分布于土壤、淡水、水中沉積物及動(dòng)物排泄物中。該菌生長(zhǎng)速度快，14～24 小時(shí)即可在培養(yǎng)皿上形成中央隆起、圓形、濕潤(rùn)、表面光滑、邊緣整齊、灰白色的菌落，在綿羊血平板上呈β－溶血。

(3)關(guān)鍵異同點(diǎn)：鰤?mèng)~諾卡氏菌和舒伯特氣單胞菌均可在胰蛋白胨大豆瓊脂培養(yǎng)基、血瓊脂平板、營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、腦心浸液瓊脂培養(yǎng)基等生長(zhǎng)，但在培養(yǎng)基接種至形成單個(gè)菌落所需時(shí)間不同，鰤?mèng)~諾卡氏菌耗時(shí)一般5～7 天，而舒伯特氣單胞菌耗時(shí)一般僅14～20 小時(shí)(Kariya T 等，2009；莫金鳳等，2016)。挑取菌落革蘭氏染色鏡檢，呈革蘭氏染色陽(yáng)性的鰤?mèng)~諾卡氏菌多呈桿狀分枝，菌體長(zhǎng)度最大超過100微米，而呈革蘭氏染色陰性的舒伯特氣單胞菌多呈短桿狀，菌體長(zhǎng)度多為1～3微米，詳見表1。

表1 鰤?mèng)~諾卡氏菌和舒伯特氣單胞菌病原屬性差異

2.病原生理生化特性

(1)鰤?mèng)~諾卡氏菌：該菌具有弱抗酸性，專性需氧，可分解七葉苷和尿素，可利用檸檬酸鹽，不能還原硝酸鹽，不能分解腺嘌呤、黃嘌呤、干酪素、酪氨酸。該菌可在20℃及30℃下生長(zhǎng)，于50℃放置8小時(shí)后仍可存活，35℃及45℃的培養(yǎng)溫度均不能生長(zhǎng)，并且不能在含有4%氯化鈉的葡萄糖酵母浸膏培養(yǎng)基上生長(zhǎng)(Kudo T 等，1988；Isik K等，1999)。

(2)舒伯特氣單胞菌：該菌兼性厭氧，氧化酶、精氨酸雙水解酶和賴氨酸脫羧酶均為陽(yáng)性，鳥氨酸脫羧酶、吲哚、VP 陰性，不能發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)氣，不分解阿拉伯糖、乳糖、蔗糖、肌醇、甘露醇、水楊苷和七葉苷。該菌魚源菌株在5～50℃的溫度范圍均可生長(zhǎng)，最適生長(zhǎng)溫度為30℃(Chen Y F 等，2012；莫金鳳等，2016)。舒伯特氣單胞菌可以耐受的pH為3～11，鹽度為0～5.5。

(3)關(guān)鍵異同點(diǎn)：鰤?mèng)~諾卡氏菌和舒伯特氣單胞菌生長(zhǎng)特性差異比較詳見表2。

表2 鰤?mèng)~諾卡氏菌和舒伯特氣單胞菌生長(zhǎng)特性

二、病理特征

1.臨床癥狀

生魚感染鰤?mèng)~諾卡氏菌初期體表無明顯癥狀，攝食無明顯異常；隨著病情加重，發(fā)病魚食欲下降，游邊且活力減退，有些伴有眼球外突的癥狀；在發(fā)病后期，生魚出現(xiàn)鰓絲局部灶性壞死，鰭條充血、體表散在性的化膿性潰瘍?cè)睿亻T紅腫和偶見腹水性腹部膨大等現(xiàn)象。

生魚感染舒伯特氣單胞菌初期體表無癥狀或出現(xiàn)少量紅點(diǎn)，然而，在2～3 天發(fā)病生魚內(nèi)臟會(huì)出現(xiàn)肉芽腫，且肉芽腫中可檢測(cè)到大量活細(xì)菌(常藕琴等，2013)。

2.血液學(xué)指標(biāo)

鰤?mèng)~諾卡氏菌感染會(huì)引起烏鱧血液指標(biāo)明顯變化，主要為血細(xì)胞數(shù)呈先升高、后降低的趨勢(shì)，而血細(xì)胞脆性在各實(shí)驗(yàn)時(shí)間點(diǎn)均高于對(duì)照組；血清堿性磷酸酶呈先降低、后升高趨勢(shì)，血清溶菌酶、血清總蛋白和血清尿素氮等均呈先降低、后增高、再降低的趨勢(shì)，血清乳酸脫氫酶活力顯著增加(孫東雨等，2012)。

生魚感染舒伯特氣單胞菌也會(huì)引發(fā)血液指標(biāo)變化，但未見相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道。

3.病理特征

典型的肉芽腫結(jié)構(gòu)可分為3層，即中央為壞死的無結(jié)構(gòu)細(xì)胞碎片和病原菌形成的干酪樣壞死，周圍圍繞胞體較大、邊界不清的類上皮細(xì)胞或多核巨細(xì)胞層，最外層為成纖維細(xì)胞和纖維細(xì)胞組成的包膜層(常藕琴等，2008)。生魚感染鰤?mèng)~諾卡氏菌的中后期(感染10～15 天)，魚體內(nèi)臟表現(xiàn)出明顯的組織病理變化，在肝、脾和腎組織形成肉芽腫病理癥狀，并伴有脂肪變性、炎性細(xì)胞浸潤(rùn)等現(xiàn)象(安樹偉等，2012)。生魚感染舒伯特氣單胞菌中后期(感染2～3 天)，發(fā)病魚肝臟、脾臟、腎臟等器官形成平滑、柔軟、邊緣界限清晰的點(diǎn)狀壞死灶，大小為0.5～2.2 毫米。具體差異見表3。

表3 生魚感染鰤?mèng)~諾卡氏菌和舒伯特氣單胞菌的癥狀

三、診斷技術(shù)

1.臨床診斷

(1)根據(jù)諾卡氏菌和舒伯特氣單胞菌的流行期做出初步判斷。一般情況下，諾卡氏菌病高發(fā)于1齡生魚當(dāng)年的10－12月和2齡生魚當(dāng)年的所有階段，舒伯特氣單胞菌病高發(fā)于1 齡生魚當(dāng)年的6－8月和2齡生魚當(dāng)年的4－5月。

(2)根據(jù)病程的長(zhǎng)短和死亡的程度來判斷。生魚諾卡氏菌病的病程比較緩慢，從感染到出現(xiàn)臨床癥狀一般需要10～15 天，表現(xiàn)為緩慢死亡的特征；而舒伯特氣單胞菌感染后則表現(xiàn)為急性發(fā)病，從感染到出現(xiàn)死亡一般僅需要2～3 天，表現(xiàn)為急性傳染性死亡。

(3)根據(jù)魚體臨床癥狀和解剖癥狀進(jìn)行初診。一般情況下，生魚諾卡氏菌病的內(nèi)臟結(jié)節(jié)質(zhì)地較硬，用玻片按壓不易鋪平；而生魚舒伯特氣單胞菌病的內(nèi)臟結(jié)節(jié)質(zhì)地較軟，正面按壓易鋪平。

(4)取病變部位的結(jié)節(jié)涂片，革蘭氏染色后鏡檢，若發(fā)生諾卡氏菌病可觀察到革蘭氏陽(yáng)性的分枝桿菌，較易與其他菌區(qū)分比較；發(fā)生諾卡氏菌病病變部位的結(jié)節(jié)中?？捎^察到革蘭氏陽(yáng)性的短桿菌，不易與氣單胞菌屬的其他菌區(qū)分比較。

2.實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)

利用PCR、熒光PCR 等技術(shù)手段，通過特異性引物對(duì)目標(biāo)片段擴(kuò)增，較短時(shí)間即可對(duì)病原的種屬做出鑒定。

針對(duì)鰤?mèng)~諾卡氏菌和舒伯特氣單胞菌的快速診斷試紙，例如膠體金快速檢測(cè)試紙條符合使用便利的優(yōu)點(diǎn)，在市場(chǎng)上也有較大的需求，市場(chǎng)空間取決于膠體金快速檢測(cè)試紙的準(zhǔn)確性和使用成本雙重因素。

四、防控技術(shù)

1.優(yōu)化養(yǎng)殖管理，降低發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)

生魚養(yǎng)殖畝產(chǎn)超5 000 千克，畝均投喂飼料約6噸，一方面，氮源通過生態(tài)路徑轉(zhuǎn)化為氨氮和亞硝酸鹽，且由于持續(xù)累積引發(fā)氨氮和亞硝酸鹽持續(xù)超標(biāo)，間接地導(dǎo)致魚體出現(xiàn)氨氮和亞硝酸鹽中毒，體質(zhì)隨之下降；另一方面，魚體排出的糞便到達(dá)底部，引發(fā)底部氧債和氧化還原電位急速下降，會(huì)引發(fā)生魚的低氧脅迫問題，體質(zhì)也隨之下降。因投喂引發(fā)水質(zhì)和底質(zhì)問題，對(duì)生魚誘發(fā)諾卡氏菌病和舒伯特氣單胞菌病存在一定的關(guān)聯(lián)性。因此，通過養(yǎng)殖管理的優(yōu)化，例如更換新水，使用抗應(yīng)激類產(chǎn)品、微生態(tài)制劑、環(huán)境改良劑，增加單位養(yǎng)殖水面的增氧設(shè)備，全方位降低生魚諾卡氏菌病和舒伯特氣單胞菌病的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。

2.藥物手段治療

一般情況下，通過藥敏試驗(yàn)篩選高敏合規(guī)抗生素用于治療水產(chǎn)動(dòng)物疾病，有利于精準(zhǔn)用藥和對(duì)癥治療，然而鰤?mèng)~諾卡氏菌有不易培養(yǎng)和在培養(yǎng)基生長(zhǎng)緩慢的特點(diǎn)，現(xiàn)實(shí)操作中很難通過對(duì)鰤?mèng)~諾卡氏菌做藥敏試驗(yàn)來獲得對(duì)高敏抗生素的篩選；相反，舒伯特氣單胞菌通過藥敏試驗(yàn)則可篩選到較可靠的敏感合規(guī)的抗生素。因此，在藥物篩選上，生產(chǎn)上治療諾卡氏菌病多是結(jié)合以往治療有效的方案和經(jīng)驗(yàn)進(jìn)行用藥，而治療舒伯特氣單胞菌病則可以根據(jù)藥敏試驗(yàn)篩選的抗生素進(jìn)行用藥。需要注意的是，無論用于治療諾卡氏菌病，還是用于治療舒伯特氣單胞菌病，抗生素單用或聯(lián)用時(shí)，都必須達(dá)到有效治療劑量，確保用藥治療期間魚體內(nèi)達(dá)到抗菌作用的血藥濃度。因此，以魚群存塘總量來測(cè)算單次用藥劑量，用藥時(shí)則要確保這些劑量能在其中一餐拌飼投喂，如果將單次用藥劑量分成單日兩餐投喂，可能會(huì)因魚體內(nèi)達(dá)不到有效的血藥濃度而影響治療效果。