GATA-6、Dkk-1及bFGF在垂體腺瘤中的表達(dá)及與預(yù)后的相關(guān)性

劉 盛，張維波，向 斌，熊江波

垂體腺瘤是常見(jiàn)的中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤，發(fā)病率僅次于神經(jīng)表皮性腫瘤和腦膜瘤[1-2]。病理診斷一直是垂體腺瘤診斷金標(biāo)準(zhǔn)，而隨著對(duì)腫瘤發(fā)生機(jī)制研究的不斷深入，癌基因、抑癌基因等與垂體腺瘤患者病情發(fā)展及預(yù)后的相關(guān)性頗受關(guān)注[3]。GATA結(jié)合蛋白-6(GATA-6)是GATA家族成員之一，Dickkopf相關(guān)蛋白-1(Dkk-1)是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的Wnt信號(hào)通路的抑制分子，隨著二者在腫瘤發(fā)展中的作用得到驗(yàn)證，現(xiàn)已成為腫瘤分子生物學(xué)研究的熱點(diǎn)[4-5]。堿性成纖維生長(zhǎng)因子(bFGF)在腫瘤發(fā)生中起重要作用[6]。雖然目前已在多種腫瘤中檢測(cè)到GATA-6、Dkk-1及bFGF的異常表達(dá)，但有關(guān)三者與垂體腺瘤的相關(guān)性研究較少。故本研究分析GATA-6、Dkk-1及bFGF在垂體腺瘤患者中的表達(dá)情況，并探究三者與患者預(yù)后的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2015年2月—2018年3月本院收治的經(jīng)手術(shù)治療的垂體腺瘤103例。納入標(biāo)準(zhǔn)：①病理診斷確診垂體腺瘤[7]；②未合并其他部位及組織器官的原發(fā)性或繼發(fā)性良惡性腫瘤；③首次發(fā)??；④所有對(duì)象對(duì)本研究知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并血液系統(tǒng)、自身免疫性疾病者；②拒絕接受病理檢查者；③切取病理組織前4周接受化學(xué)、放射、靶向及免疫調(diào)節(jié)治療者；④合并嚴(yán)重系統(tǒng)疾病及臟器功能不全者；⑤合并精神疾病或意識(shí)障礙者。103例中男58例，女45例；年齡45～80(64.19±3.15)歲；臨床表現(xiàn)：頭痛89例，閉經(jīng)泌乳綜合征43例，尿崩癥39例，指端肥大癥21例；術(shù)前均行CT和MRI檢查；垂體微腺瘤45例，垂體大腺瘤39例，垂體巨大腺瘤19例；侵襲性垂體腺瘤54例；垂體泌乳素腺瘤30例，生長(zhǎng)激素腺瘤26例，促腎上腺皮質(zhì)激素腺瘤23例，非功能性腺瘤24例；行經(jīng)鼻蝶手術(shù)35例，經(jīng)額/眉弓入路腫瘤切除術(shù)30例，聯(lián)合入路腫瘤切除術(shù)28例，分期手術(shù)10例。收集所有患者手術(shù)瘤組織及少量瘤旁正常組織。本研究已通過(guò)本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)同意。

1.2研究方法

1.2.1GATA-6、Dkk-1及bFGF檢測(cè)：手術(shù)切除標(biāo)本脫蠟、水化處理后，0.3%過(guò)氧化氫溶液孵育10 min，枸櫞酸鹽緩沖液浸泡，5及6 ℃微波處理2次，修復(fù)抗原；自來(lái)水沖洗5 min，磷酸鹽緩沖液洗2 min，共3次；山羊血清封閉后棄封閉液，不洗，陰性對(duì)照片加PBS液。實(shí)驗(yàn)片加適量一抗4 ℃保濕、過(guò)夜，PBS液洗5 min共3次，滴加二抗，室溫孵育30 min。PBS液洗2 min共3次，然后DAB顯色，自來(lái)水沖洗后，復(fù)染、脫水、透明、封片。

1.2.2結(jié)果判定：隨機(jī)選取高倍視野下10張圖片，根據(jù)染色深淺和視野中陽(yáng)性細(xì)胞比例評(píng)分：0分為無(wú)著色；1分為淺黃色，陽(yáng)性細(xì)胞比例<25%；2分為棕黃色，陽(yáng)性細(xì)胞比例25%～50%；3分為棕褐色，陽(yáng)性細(xì)胞比例≥50%。免疫反應(yīng)評(píng)分為二者評(píng)分相乘：陰性為0～1分，弱陽(yáng)性為2～4分，中等陽(yáng)性為5～8分，強(qiáng)陽(yáng)性為9～12分，其中將弱陽(yáng)性、中等陽(yáng)性及強(qiáng)陽(yáng)性定義為陽(yáng)性[8-9]。

1.3隨訪方法 隨訪時(shí)間截至2020年3月，隨訪方式主要為來(lái)院復(fù)查。總生存時(shí)間為垂體腺瘤患者從手術(shù)至死亡的時(shí)間[10]。

1.4觀察指標(biāo) 觀察比較103例垂體腺瘤瘤組織及瘤旁正常組織GATA-6、Dkk-1及bFGF表達(dá)情況；記錄103例預(yù)后情況，比較不同預(yù)后患者相關(guān)資料差異，分析GATA-6、Dkk-1及bFGF表達(dá)與患者預(yù)后的相關(guān)性。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 22.0軟件分析數(shù)據(jù)。計(jì)數(shù)資料以率(%)表示，比較采用χ2檢驗(yàn)；垂體腺瘤患者預(yù)后的影響因素采用多因素Logistic回歸分析。α=0.05為檢驗(yàn)水準(zhǔn)。

2 結(jié)果

2.1GATA-6、Dkk-1及bFGF陽(yáng)性表達(dá)率比較 103例瘤組織GATA-6及bFGF陽(yáng)性表達(dá)率高于瘤旁正常組織，Dkk-1陽(yáng)性表達(dá)率低于瘤旁正常組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。見(jiàn)表1。

表1 垂體腺瘤103例瘤組織和瘤旁正常組織GATA-6、Dkk-1及bFGF表達(dá)情況比較[例(%)]

2.2影響垂體腺瘤患者預(yù)后的單因素分析 根據(jù)隨訪資料，103例生存75例(生存組)，死亡28例(死亡組)，生存率為72.82%。分析103例臨床資料顯示，瘤卒中、侵犯海綿竇、侵襲性腫瘤及GATA-6、Dkk-1、bFGF表達(dá)2組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，P<0.01)，年齡、性別、腫瘤直徑、囊變、壓迫視神經(jīng)情況2組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表2。

表2 影響垂體腺瘤103例預(yù)后的單因素分析(例)

2.3影響垂體腺瘤患者預(yù)后的多因素Logistic回歸分析 將“2.2”項(xiàng)下有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的因素納入多因素Logistic回歸分析并賦值(表3)，經(jīng)多因素Logistic回歸分析顯示，瘤卒中及GATA-6陽(yáng)性、Dkk-1陰性、bFGF陽(yáng)性表達(dá)是垂體腺瘤患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(P<0.01)，見(jiàn)表4。

表3 影響垂體腺瘤患者預(yù)后多因素Logistic回歸分析賦值表

表4 影響垂體腺瘤患者預(yù)后的多因素Logistic回歸分析

3 討論

隨著影像學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，垂體腺瘤檢出率逐漸升高，現(xiàn)已成為威脅人類(lèi)健康的重要腫瘤性疾病[11]。近年來(lái)，分子標(biāo)志物在預(yù)測(cè)垂體腺瘤患者預(yù)后中的作用逐漸引起了學(xué)者們的廣泛關(guān)注。

抑癌基因Dkk-1屬于Dickkopfs家族，擁有255～350個(gè)氨基酸殘基，同時(shí)含有2個(gè)富含半胱氨酸的保守區(qū)域[12]。研究表示，Dkk-1對(duì)于Wnt信號(hào)通路傳導(dǎo)有終止作用，在一定程度上控制此通路下游腫瘤增殖因子、轉(zhuǎn)移抑制因子、凋亡控制基因、細(xì)胞周期蛋白表達(dá)[13-14]。陸志斌等[15]采用改良雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)正常人群及食管癌患者(Ⅰ+Ⅱ期)外周血Dkk-1含量，結(jié)果顯示食管癌患者外周血Dkk-1含量異于正常人群，且食管癌患者外周血Dkk-1含量與腫瘤分期明顯相關(guān)，認(rèn)為外周血Dkk-1檢測(cè)有利于Ⅰ～Ⅱ期食管癌的診斷與治療。本研究結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)了Dkk-1作為抑癌基因可通過(guò)抑制瘤細(xì)胞生長(zhǎng)與誘導(dǎo)瘤細(xì)胞凋亡在垂體腺瘤發(fā)生與進(jìn)展中起關(guān)鍵作用。

人類(lèi)GATA-6基因位于染色體18q11.1～q11.2，可調(diào)控595個(gè)氨基酸。此基因主要在來(lái)源于中胚層和內(nèi)胚層的各種組織中表達(dá)，可在胚胎期心、肺發(fā)育過(guò)程中通過(guò)調(diào)節(jié)Wnt信號(hào)通路發(fā)揮作用。有研究發(fā)現(xiàn)，GATA-6通過(guò)抑制15-脂氧合酶-1的表達(dá)調(diào)節(jié)結(jié)直腸癌細(xì)胞的增殖，且其異常表達(dá)與卵巢癌的分化關(guān)系密切[16-17]。因此推測(cè)GATA-6可通過(guò)Wnt信號(hào)通路在腫瘤發(fā)生、發(fā)展中起一定作用。本研究采用免疫組織化學(xué)染色法檢測(cè)垂體腺瘤組織中GATA-6的表達(dá)情況，并分析其與患者預(yù)后的相關(guān)性，結(jié)果顯示GATA-6在垂體腺瘤瘤組織中的陽(yáng)性表達(dá)率高于瘤旁正常組織，表明GATA-6可作為癌基因誘導(dǎo)垂體腺瘤組織生長(zhǎng)。

血管生成與垂體腺瘤的發(fā)生、發(fā)展關(guān)系密切，因此作為腫瘤血管形成因子的bFGF或許可能作為評(píng)估惡性腫瘤進(jìn)展的有效指標(biāo)[18]。既往文獻(xiàn)報(bào)道，bFGF可促進(jìn)表皮及內(nèi)皮細(xì)胞再生，加速二者分裂，誘導(dǎo)其脫離基膜，刺激內(nèi)皮細(xì)胞向腫瘤組織趨化并形成管狀結(jié)構(gòu)[19]；同時(shí)也可促進(jìn)垂體腺瘤轉(zhuǎn)化基因表達(dá)，刺激細(xì)胞增殖和分化[20]；可提高組織中血纖維蛋白溶解酶原激活因子活性，并誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生蛋白酶，導(dǎo)致新血管生成。本研究結(jié)果提示，GATA-6陽(yáng)性、Dkk-1陰性及bFGF陽(yáng)性表達(dá)是垂體腺瘤患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，提示GATA-6、Dkk-1及bFGF表達(dá)在垂體腺瘤發(fā)生、發(fā)展中具有協(xié)同作用，對(duì)垂體腺瘤生物學(xué)行為的評(píng)估具有十分重要的意義。

此外，本研究還發(fā)現(xiàn)瘤卒中亦是垂體腺瘤患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。垂體腺瘤卒中是指垂體腺瘤在生長(zhǎng)過(guò)程中突發(fā)瘤內(nèi)出血或梗死所引起的一組綜合征，臨床上表現(xiàn)為在原有垂體腺瘤癥狀基礎(chǔ)上，出現(xiàn)突發(fā)頭痛、視力下降、眼肌麻痹和意識(shí)改變等癥狀，嚴(yán)重者可迅速昏迷甚至死亡。因此為提高垂體腺瘤患者生存率，預(yù)防瘤卒中有重要意義。

綜上，GATA-6、bFGF在垂體腺瘤中高表達(dá)，Dkk-1在垂體腺瘤中低表達(dá)，GATA-6、Dkk-1及bFGF的異常表達(dá)是垂體腺瘤患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，臨床可對(duì)高危人群采取相應(yīng)干預(yù)手段，以延長(zhǎng)患者生存期。