固相萃取-超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢測嬰幼兒奶粉中的7種鏈格孢霉毒素

邢家溧, 張子庚, 鄭睿行*, 徐曉蓉, 毛玲燕, 承 海, 沈 堅

(1. 寧波市產(chǎn)品食品質(zhì)量檢驗研究院(寧波市纖維檢驗所), 浙江 寧波 315048; 2. 中國計量大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院, 浙江 杭州 310018)

鏈格孢霉菌廣泛存在于泥土和各種農(nóng)作物里,是污染谷物、油籽與果蔬的一種極為常見的條件致病菌和腐生絲狀真菌[1]。由于該菌能在潮濕、低溫的環(huán)境下生長繁殖,環(huán)境適應(yīng)能力較強,可以產(chǎn)生大量的次級代謝產(chǎn)物,這類代謝產(chǎn)物統(tǒng)稱鏈格孢霉毒素(Alternariatoxins,ATs),因此即使是冷藏運輸?shù)霓r(nóng)產(chǎn)品也可能受到ATs的污染[2]?，F(xiàn)今已有諸多研究表明ATs對人與動物均具有急慢性毒性以及三致效應(yīng)(致癌、致畸、致突變)等風(fēng)險存在,對人畜的健康造成了損害。研究表明約有70余種ATs具有明顯毒性,歐洲食品安全局(European Food Safety Authority, EFSA)在2011年對ATs的結(jié)構(gòu)進行了細致的描述[3],此外在Georg等[4]的研究中可知,鏈格孢霉毒素由于結(jié)構(gòu)的不同,大體上可分為6種不同的類型:(1)二苯并吡喃酮類及其衍生物,主要毒素包括交鏈孢烯(altenuene, ALT)、交鏈格孢酚單甲醚(alternariol monomethyl ether, AME)和鏈格孢酚(alternariol, AOH); (2)四氨基酸衍生物類,代表毒素為細交鏈格孢菌酮酸(tenuazonic acid, TeA)和異細交鏈孢菌酮酸(iso-TeA); (3)二萘嵌苯醌類及其衍生物,包括交鏈孢毒素Ⅰ(altertoxin Ⅰ, ATX-Ⅰ)、ATX-Ⅱ、ATX-Ⅲ等一類衍生物毒素,是少數(shù)鏈格孢霉的代謝物;(4)丙三羧酸酯類化合物,是一系列長鏈氨基多元醇,即互隔交鏈孢霉(Alternaria alternata，AAL)毒素,又可分為AAL-TA、AAL-TB、AAL-TC、AAL-TD和AAL-TE幾大類,其中AAL-TA的毒性最強;(5)包括騰毒素(tentoxin, Ten)在內(nèi)的環(huán)形四肽結(jié)構(gòu);(6)其他結(jié)構(gòu):細格菌素(altenusin, ALS)等。近年來,與ATs相關(guān)的食品安全事件時常發(fā)生[5],嬰幼兒是受全社會關(guān)注的一種特殊群體,而嬰幼兒奶粉是有益于嬰幼兒生長發(fā)育的首選食品。植物油在嬰幼兒奶粉中占比很高,又因其易被鏈格孢霉菌污染,因此對嬰幼兒的健康產(chǎn)生了威脅[6]。目前已報道的關(guān)于ATs檢測的主要基質(zhì)為柑橘[7]、番茄[8]、蘋果[9]、麥芯粉[10]、啤酒[11]、豌豆[12]、向日葵籽[13]等,且同時檢測的ATs種類也不超過6種,關(guān)于嬰幼兒奶粉中ATs的檢測方法相對較少,因此建立嬰幼兒奶粉中典型ATs的檢測方法具有重要的意義。

目前我國有關(guān)ATs的標準只有1項行業(yè)標準[14],并且該標準僅涉及4種ATs,應(yīng)用范圍只限于部分果蔬,尚不涵蓋嬰幼兒奶粉中ATs的檢測。現(xiàn)有研究涉及的ATs的檢測技術(shù)主要有薄層色譜法[15]、酶聯(lián)免疫吸附法[16]、氣相色譜(GC)[17]以及氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(GC-MS/MS)[18]、液相色譜(LC)[19]和液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(LC-MS/MS)[20]等。薄層色譜法靈敏度較低,實驗操作繁瑣且重復(fù)性較差;GC和GC-MS/MS經(jīng)常用于分離和檢測易揮發(fā)和熱穩(wěn)定的毒素[21],因為ATs相對來說較為穩(wěn)定且揮發(fā)性較差,所以GC和GC-MS/MS在ATs檢測方面的應(yīng)用受到了限制;LC-MS/MS適用性非常廣泛,因為其同時具備質(zhì)譜的高靈敏度與LC的高分離性,能夠?qū)Ts準確地定量定性,可以補充LC技術(shù)的不足[22]。考慮到奶粉基質(zhì)組成十分復(fù)雜,不利于提取,所以選取固相萃取前處理技術(shù)凈化ATs,可以更有效地將干擾組分和分析物分離[23]。基于此,本研究擬開發(fā)一種固相萃取結(jié)合超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)(UPLC-MS/MS)同時準確檢測嬰幼兒奶粉中7種ATs的分析方法。

1 實驗部分

1.1 材料與試劑

從國內(nèi)各大企業(yè)和當(dāng)?shù)厥袌鍪占?0份嬰幼兒奶粉樣本,其中一段(0～6月齡)、二段(6～12月齡)、三段(12～36月齡)各20份,密封,-20 ℃保存使用。

ATs標準品:AOH、AME、ALT、Ten、TeA、ALS、ATX-Ⅰ,購自上海安譜實驗科技股份有限公司,純度均大于98%;甲醇、乙腈、甲酸均為色譜純,購自德國Merck公司。

1.2 儀器與設(shè)備

ACQUITY UPLC I-CLASS超高效液相色譜-Waters XeVO TQ-XS串聯(lián)質(zhì)譜儀,配有電噴霧離子源(美國Waters公司); TGL-20M高速臺式冷凍離心機(上海盧湘儀離心機儀器有限公司); Vortex 3自動漩渦混合器(德國IKA公司); Milli-Q型超純水機,電阻率為18.2 MΩ·cm(美國Millipore公司); KS-300EI超聲波清洗機(寧波科生設(shè)備有限公司); SW22振蕩水浴鍋(德國Julabo公司); AH-30全自動均質(zhì)器(?？苾x器有限公司); 0.22 μm有機濾膜(北京捷盛依科科技有限公司); ME204E電子天平(實際分度值為0.000 1 g)和FE28 pH酸度計(上海梅特勒-托利多儀器有限公司); N-EVAP112氮吹儀(上海慶開實驗設(shè)備有限公司); HLB小柱6 mL(上海安譜實驗科技股份有限公司)。

1.3 UPLC-MS/MS條件

色譜條件:BEH C18色譜柱(50 mm×2.1 mm, 1.7 μm),柱溫為40 ℃;流動相體系為(A)0.1%(v/v)甲酸水溶液和(B)乙腈;梯度洗脫程序:0～5.0 min, 10%B～95%B; 5.0～7.0 min, 95%B; 7.0～7.5 min, 95%～10%B; 7.5～10.0 min, 10%B。流速:0.4 mL/min;進樣量:3 μL。

質(zhì)譜條件:采用多反應(yīng)監(jiān)測(MRM)模式對7種ATs進行分析;數(shù)據(jù)采集和處理采用MassLynxTM4.2軟件完成;離子源參數(shù)為:正負離子開關(guān)掃描;毛細管電壓1.08 kV;射頻透鏡1(RF lens 1)和RF lens 2的電壓均為15.0 V;離子源溫度150 ℃;脫溶劑溫度600 ℃;脫溶劑氣體流量1 000 L/h;錐孔反吹氣流量150 L/h,其他質(zhì)譜參數(shù)見表1。

1.4 標準溶液的制備

標準儲備液:分別準確稱量TeA、AME、AOH、Ten、ALT、ALS和ATX-Ⅰ標準品0.001 g溶于10 mL乙腈中,配制成100 mg/L的標準混合液,取100 mg/L的標準混合液100 μL用乙腈溶解并定容至10 mL,得到1 mg/L的混合標準儲備液,密封后置于-20 ℃保存。

標準工作液:用乙腈-水(1∶1, v/v)溶液將標準儲備液逐級稀釋配制成0.5、1、2、5、10、20、50、100、200 μg/L的7種ATs的混合標準溶液。

基質(zhì)標準工作液:用空白基質(zhì)溶液逐級稀釋1 mg/L的混合標準儲備液,制備成0.5、1、2、5、10、20、50、100與200 μg/L的基質(zhì)標準工作液。

1.5 鏈格孢霉毒素的提取

分別稱取奶粉1 g(精確到0.01 g)于50 mL尖底具塞離心管內(nèi),加入標準儲備液50 μL,配制成待測奶粉樣品。加入15 mL乙腈-水(84∶16, v/v)溶液,加入0.3 mL甲酸,水平搖勻30 min,在9 500 r/min下離心10 min,取上清液,沉淀重復(fù)提取3次。最后一次提取時加入15 mL乙腈-甲醇-水(45∶10∶45, v/v/v)和0.3 mL甲酸,水平搖勻30 min, 9 500 r/min下離心10 min,多次提取的上清液混合后于40 ℃氮吹,之后重懸于12 mL一級水(pH 5.5)中。

1.6 鏈格孢霉毒素的富集

用HLB固相萃取小柱萃取,依次用6 mL甲醇和6 mL一級水(pH 5.5)活化,之后將待測液加入小柱中,調(diào)整固相萃取儀,確保水樣以1 mL/min的速度流過柱子,在上樣結(jié)束之前要確保整個過程小柱都不能干,用12 mL一級水淋洗小柱,淋洗結(jié)束后繼續(xù)負壓抽濾5 min左右,最后用10 mL甲醇洗脫,振蕩混勻1 min,取1 mL混勻液過0.22 μm有機濾膜,待測。

2 結(jié)果與討論

2.1 儀器條件的優(yōu)化

2.1.1色譜條件的優(yōu)化

在實際測定過程中,色譜柱的選擇對目標物的分離、識別與檢測十分重要,因為BEH C18具有較低的次級相互作用,pH承受能力強,柱效更高,峰形更好[24],因此采用BEH C18(50 mm×2.1 mm, 1.7 μm)分離7種ATs。

水-甲醇和水-乙腈都是UPLC-MS/MS常用的流動相體系[25],而且甲酸和甲酸銨的引入一般可以增強靶向響應(yīng)并改善靶峰[26]。在我們之前的研究中,甲酸、乙腈被用作萃取劑,為了保持一致性,本實驗采用了3種流動相體系:水-乙腈、0.1%甲酸水溶液-乙腈、0.1%甲酸水溶液(含0.01 mol/L甲酸銨)-乙腈進行了比較。結(jié)果表明,甲酸的引入增強了7種靶向ATs的反應(yīng);而甲酸銨的引入使靶向TeA的反應(yīng)減弱,并出現(xiàn)峰形拖尾,因此,選擇0.1%甲酸水溶液-乙腈作為流動相體系。

由于7種ATs極性的不同,而且極性相差較大,如ALT的極性特別強,AME的極性相對很弱[20],為了兼顧7種毒素可以同時出現(xiàn)良好的峰形,流動相需要有較大的梯度變化,本實驗通過不斷調(diào)整,選取最佳的洗脫順序,可以同時獲得不同ATs的靈敏度和穩(wěn)定性。因為ESI掃描檢測需要流動相流速較低,所以設(shè)置流速為0.4 mL/min。7種ATs幾乎都在40 ℃左右穩(wěn)定[27],不會發(fā)生反應(yīng),因此,最終選取柱溫為40 ℃。

結(jié)果顯示,優(yōu)化條件下各種ATs分離效果明顯,峰形較好(見圖1)。

圖 1 優(yōu)化條件下(a)6種鏈格孢霉毒素的正離子圖和 (b)ATX-Ⅰ的負離子圖Fig. 1 (a) Positive ion chromatogram of six ATs and (b) negative ion chromatogram of ATX-Ⅰ under the optimized conditions 1. ALT; 2. ALS; 3. TeA; 4. AOH; 5. Ten; 6. AME; 7. ATX-Ⅰ.

2.1.2質(zhì)譜條件的優(yōu)化

因為多反應(yīng)監(jiān)測模式可以相當(dāng)大程度地排除外界干擾,提高信噪比,有助于對目標化合物的定量分析,所以本研究選取多反應(yīng)監(jiān)測掃描,并對7種ATs在ESI+和ESI-模式掃描時進行優(yōu)化,結(jié)果發(fā)現(xiàn)ATX-Ⅰ在ESI-模式掃描時響應(yīng)值較高,其他ATs在ESI+模式掃描時響應(yīng)值高,因此選取正負離子交替掃描。錐孔電壓、碰撞電壓、離子源溫度、脫溶劑氣體溫度、碰撞氣體流量和每種毒素的定性、定量離子通過流動注射泵的連續(xù)進樣進行測定,優(yōu)化質(zhì)譜條件,達到每種靶物質(zhì)的最佳電離效率。分別用ESI+和ESI-模式對毒素進行掃描,尋找響應(yīng)值較高的母體離子。進一步改變碰撞電壓,進行二次質(zhì)譜掃描,尋找信號強、穩(wěn)定性好的子離子。

圖 2 (a)提取劑比例和(b)提取方式對嬰幼兒奶粉中7種 鏈格孢霉毒素回收率的影響(n=5)Fig. 2 Effects of (a) extractant ratio and (b) extraction method on the recoveries of the seven ATs in infant milk powder (n=5)

2.2 提取溶劑比例的優(yōu)化

由于嬰幼兒奶粉結(jié)構(gòu)復(fù)雜,相對來說難以處理,多次提取有利于增加ATs的回收率[28]。而且TeA的酸性和極性較強,因此將提取劑酸化有利于提高TeA的提取率[29,30]。本研究根據(jù)相關(guān)文獻[31]報道考察了前兩次提取劑,即乙腈-水(100∶0, 50∶50, 84∶16, v/v)溶液以及第三次提取中乙腈-甲醇-水(50∶25∶25, 45∶10∶45, v/v/v)溶液(加入甲醇是因為其有利于苯醌類ATs的提取[32])。實驗結(jié)果如圖2a所示,當(dāng)采用乙腈-水(50∶50, v/v)時,提取液過于混濁,離心不成形,回收率過低;采用純乙腈提取時,AOH和ALS的回收率相對較低,兩種毒素的回收率僅在50%左右,由此可知,水的體積比例不可過高或過低,適量水的加入會提高萃取效果;當(dāng)采用乙腈-水(84∶16, v/v)+乙腈-甲醇-水(45∶10∶45, v/v/v)時,提取效果更好,回收率為80.2%～96.1%,可以看出甲醇比例高出一定范圍可能會影響ATs的回收。因此,選取乙腈-水(84∶16, v/v)+乙腈-甲醇-水(45∶10∶45, v/v/v)進行提取。

2.3 提取方式的優(yōu)化

分別比較了均質(zhì)(12 000 r/min, 5 min)、渦旋振蕩(300 r/min, 30 min)、超聲波(40 ℃, 300 W, 30 min)和水平搖勻(40 ℃, 30 min)4種提取方式對7種ATs回收率的影響。如圖2b所示,使用均質(zhì)提取時,TeA的回收率過低,僅為50.4%,這可能是因為嬰幼兒奶粉成糊狀,容易粘在均質(zhì)器頭上,造成基質(zhì)損失過大,進而影響對ATs的提取;渦旋振蕩提取時,回收率在62.5%～91.2%之間;超聲波提取時,超聲時間短會導(dǎo)致提取ATs不充分,而超聲時間長又會導(dǎo)致奶粉樣品沉積在離心管底部,致使提取劑和樣品接觸不充分,造成個別毒素回收率較低,7種毒素的回收率范圍為63.1%～90.6%;而水平搖勻回收率好于其他3種提取方式,在79.1%～93.2%之間。Marina等[31]同樣采取水平搖勻的方法提取嬰幼兒食品中的ATs,提取效果較好,檢出限為0.05～1.25 μg/kg,加標回收率為83%～108%。這可能是因為在水平搖勻過程中,基質(zhì)中的ATs不易被破壞。

2.4 固相萃取條件的優(yōu)化

優(yōu)化固相萃取條件時,用標準溶液分別對固相萃取小柱和洗脫液條件進行優(yōu)化,最后采用實際的基質(zhì)樣品萃取液進行確證。取一定體積的ATs混合標準儲備液,用乙腈稀釋成50 μg/L的混合標準溶液,用于對條件的優(yōu)化;在確證的基質(zhì)樣品中加入50 ng的ATs混合標準,保持一致,對以下固相萃取條件進行系統(tǒng)優(yōu)化[33]。

圖 3 不同固相萃取小柱對7種鏈格孢霉毒素 回收率的影響(n=5)Fig. 3 Effect of different SPE columns on the recoveries of the seven ATs (n=5)

2.4.1固相萃取小柱的選擇

對比了HLB小柱、C18小柱和PSA小柱的凈化效果,如圖3所示,PSA小柱對TeA凈化效果差,回收率僅為43.6%,推測原因是PSA填料可以去除有機酸[34]; HLB小柱效果略好于C18小柱,回收率在73.1%～92.8%之間,且HLB小柱適用性強,在上樣過程中,小柱干涸不影響分離效果,易于操作[35,36]。因此選取HLB小柱進行凈化。

2.4.2洗脫液種類及用量的選擇

根據(jù)文獻[33]得知,甲醇、乙腈、甲醇+乙腈洗脫小柱均在文獻中被提及。由此本研究分別選用10 mL甲醇、10 mL乙腈、5 mL甲醇+5 mL乙腈作為洗脫液(如圖4a),結(jié)果表明,測定后未發(fā)現(xiàn)明顯差異。但考慮到使用甲醇時ATs的回收率為76.8%～93.2%,效果略好于其他兩種洗脫液,所以選取甲醇洗脫HLB小柱。考慮到洗脫液的用量可能不足以將ATs完全洗脫出來,本研究分別選取了6、8、10和12 mL的甲醇洗脫液進行比較,結(jié)果如圖4b所示,當(dāng)甲醇添加量為6～10 mL時,7種ATs的回收率均呈現(xiàn)上升趨勢;當(dāng)甲醇添加量為10 mL時,7種ATs的回收率最好,在80.6%～92.2%之間;當(dāng)甲醇添加量為12 mL時,7種ATs的回收率變化不大,說明甲醇洗脫幾乎已達到飽和。綜上所述,選取10 mL甲醇為洗脫液。

圖 4 (a)洗脫液種類和(b)甲醇用量對嬰幼兒奶粉中7種 鏈格孢霉毒素回收率的影響(n=5)Fig. 4 Effects of (a) eluent type and (b) methanol dosage on the recoveries of the seven ATs in infant milk powder (n=5)

圖 5 水的pH值對7種鏈格孢霉毒素回收率的影響(n=5)Fig. 5 Effect of water pH on the recoveries of the seven ATs (n=5)

2.4.3提取后水的pH的優(yōu)化

因為ATs需要酸化提取才會更加完全,但過度酸化會抑制回收率[8],所以本研究在3次萃取之后,針對氮吹復(fù)溶的樣品水溶液的pH(4、4.5、5、5.5、6)進行了考察,如圖5所示,結(jié)果發(fā)現(xiàn)提取效果差異不是特別明顯,但是pH 5.5時,ATs的回收率穩(wěn)定性相對較高,所以選取pH 5.5的水進行復(fù)溶,回收率為78.9%～92.3%。同時為了與其保持一致,利于上樣時樣品更好的萃取保留,同樣選擇pH 5.5的水進行活化。

圖 6 是否復(fù)溶對奶粉中7種鏈格孢霉毒素回收率的影響(n=5)Fig. 6 Effect of redissolution on the recoveries of the seven ATs in milk powder (n=5)

2.4.4濃縮條件的選擇

實驗發(fā)現(xiàn),若洗脫之后在40 ℃氮吹后再次使用1 mL甲醇復(fù)溶,如圖6所示,AOH、AME回收率過低,僅為20%左右,可能這2種毒素在奶粉基質(zhì)中經(jīng)固相萃取后再氮吹復(fù)溶會導(dǎo)致毒素流失,影響回收率;而不復(fù)溶時7種ATs的回收率為77.4%～91.1%,即除AOH、AME外,其他毒素復(fù)溶與否無顯著性差異。因此選擇在經(jīng)10 mL甲醇洗脫之后不濃縮,即振蕩混勻后直接吸取1 mL洗脫液過0.22 μm濾膜后測定。

2.5 方法評價

2.5.1基質(zhì)效應(yīng)(ME)

在UPLC-MS/MS分析中,洗脫化合物對電噴霧界面電離效率的影響表現(xiàn)為造成離子增強或抑制[37]。據(jù)報道,基質(zhì)效應(yīng)在UPLC-MS/MS方法分析ATs時很常見[38],通常通過比較標準溶液和相同濃度的陰性加標樣品的響應(yīng)來研究。本實驗為了檢測空白樣品基質(zhì)對目標化合物的響應(yīng)值是否增強或抑制,分別用溶劑和基質(zhì)空白液配制7種ATs的標準混合液,質(zhì)量濃度為50 μg/L,并進一步對實驗結(jié)果進行比較。

根據(jù)測定的7種ATs的回收率值,將ME值分為3組(低于80%、80%～120%和高于120%)。ME值在80%～120%之間為低基質(zhì)效應(yīng),可以忽略。當(dāng)ME值超過120%時,說明存在基質(zhì)增強作用[39]。同時,ME值低于80%說明存在基質(zhì)抑制作用。ME的計算公式如下[40]:

其中:A1為毒素標準品在特定濃度的純?nèi)軇?初流動相)中的平均峰面積;A2為基質(zhì)空白溶液中相同濃度每種毒素標準品的平均峰面積。

表 2 鏈格孢霉毒素在嬰幼兒奶粉樣品基質(zhì)中的基質(zhì)效應(yīng)Table 2 Matrix effects (MEs) of the ATs in infant milk powder sample matrixes

如表2所示,TeA的ME值在80%～100%之間,說明TeA的基質(zhì)作用較小;Ten和AOH的ME值低于80%,表現(xiàn)出基質(zhì)抑制效應(yīng)。相反AME、ALT、ALS和ATX-Ⅰ的ME值高于120%,表現(xiàn)出基質(zhì)增強效應(yīng)。根據(jù)表2所呈現(xiàn)的實驗結(jié)果,本研究采用基質(zhì)匹配的方法對基質(zhì)效應(yīng)進行補償,最大程度上抵消基質(zhì)效應(yīng)的影響。

2.5.2線性范圍與檢出限

在線性關(guān)系研究中,所有標準工作溶液均在1.3節(jié)色譜-質(zhì)譜條件下測定。以x代表質(zhì)量濃度、y代表峰面積進行線性回歸分析,用基質(zhì)空白標準工作溶液做校準曲線。結(jié)果如表3所示,每種毒素在0.5～200 μg/L內(nèi)都有良好的線性關(guān)系,判定系數(shù)(R2)均大于0.990。以各目標化合物信噪比(S/N)分別為3和10計算檢出限(LOD)和定量限(LOQ), 7種ATs的LOD為0.15～0.64 μg/kg,LOQ為0.54～2.24 μg/kg。

表 3 嬰幼兒奶粉中7種鏈格孢霉毒素的線性范圍、線性方程、R2和檢出限和定量限Table 3 Linear ranges, linear equations, coefficients of determination (R2), LODs, and LOQs of the seven ATs in infant milk powder

表 4 嬰幼兒奶粉中7種鏈格孢霉毒素的添加回收率和 精密度(n=5)Table 4 Recoveries and precisions of the seven Alternaria toxins spiked in infant milk powder (n=5)

2.5.3樣品回收率和精密度結(jié)果分析

按1.5節(jié)和1.6節(jié)的操作制備嬰幼兒奶粉樣品,參照GB/T 27404-2008[41],分別以1倍、2倍和10倍定量限進行三水平加標試驗,在一天內(nèi)每個添加濃度重復(fù)進樣5次,測定樣品的回收率與精密度。結(jié)果如表4所示,7種ATs的平均回收率為79.1%～114.3%, RSD≤8.87%。

2.5.4實際樣品的測定

按照上述方法對實際嬰幼兒奶粉樣品(一段、二段、三段各20個樣品)進行檢測,結(jié)果表明,未在一段(0～6月齡)和二段(6～12月齡)奶粉中檢測出真菌毒素;三段奶粉中只有1個樣品檢測出Ten,濃度為4.97 μg/kg。這是因為奶粉中易受污染的植物油占比較小,所以奶粉受ATs的污染程度相對果蔬類產(chǎn)品和小麥類產(chǎn)品較小。而隨著嬰兒年齡的增長,其奶粉選用原料種類較多,被ATs污染的幾率也隨之升高。

3 結(jié)論

本文采用固相萃取技術(shù)富集嬰幼兒奶粉中7種ATs,并結(jié)合UPLC-MS/MS,定性定量測定嬰幼兒奶粉中的ATs,建立了一種高效檢測7種ATs的檢測方法。該方法操作簡便,高效靈敏,快速準確,其檢出限、線性關(guān)系、回收率和重現(xiàn)性等方法學(xué)指標均能滿足ATs的測定,可適用于實際樣品檢測。本研究開發(fā)的方法為檢測更多種類的ATs提供了技術(shù)支持,同時還為嬰幼兒奶粉中典型鏈格孢霉毒素安全限量標準的制訂提供理論依據(jù),此外,本研究對于評估嬰幼兒奶粉的食品安全風(fēng)險、保護嬰幼兒健康也具有十分重要的理論和現(xiàn)實意義。