基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的扶正調(diào)理液作用機(jī)制及其對(duì)S180荷瘤小鼠的影響

曹銘晨，彭小菊*， 黃先菊，柯才華 ，汪川，辛兆洋，于振英，潘冬琦，崔萌納

(1.青島大學(xué)附屬醫(yī)院，山東 青島266000；2.中南民族大學(xué)，湖北 武漢 430074)

惡性腫瘤已成為當(dāng)前嚴(yán)重威脅人類健康的主要疾病，我國的腫瘤發(fā)病率呈逐年上升趨勢[1]。目前臨床腫瘤治療的主要手段包括手術(shù)治療、放療和化療，患者放、化療后極易出現(xiàn)食欲下降、免疫功能減退、骨髓抑制等一系列不良反應(yīng)，進(jìn)而誘發(fā)焦慮、抑郁等負(fù)面心理狀態(tài)，降低生存質(zhì)量[1-3]。中藥治療惡性腫瘤既古老又年輕，已成為當(dāng)前腫瘤治療的重要方法之一?；跀?shù)據(jù)挖掘技術(shù)提出的治療惡性腫瘤中藥復(fù)方主要包括扶正固本類、清熱解毒類、活血化瘀類、軟堅(jiān)散結(jié)類、化痰利濕類等[1]，但大多以攻伐為主，雖然也有扶正兼以攻伐，也需隨證配伍活血化瘀、理氣、軟堅(jiān)散結(jié)、清熱解毒、瀉下攻積等峻猛之藥[4]，若辯證準(zhǔn)確，應(yīng)用這些復(fù)方也能獲得較好的臨床療效。而扶正調(diào)理液有別于其他抗腫瘤中藥復(fù)方的主要特點(diǎn)是不用虎狼猛藥，但調(diào)和氣血陰陽、臟腑功能，調(diào)整機(jī)體平衡。該配方源于青島市科技局立項(xiàng)課題中“增齡I 號(hào)”[5]，由靈芝、黃芪、炒白術(shù)、茯苓、生地黃、黃精、制何首烏、玉竹、枸杞、淫羊藿、炒萊菔子、生蒲黃、木香、蒲公英、三七組成。方中以靈芝、黃芪共為君藥，補(bǔ)氣健脾寧心；炒白術(shù)、茯苓、生地黃、黃精、制何首烏、玉竹、枸杞、淫羊藿共為臣藥，補(bǔ)益氣血陰陽、五臟六腑；佐以三七、蒲黃、木香、萊菔子活血理氣、通達(dá)血脈及胃腸；最后在諸多補(bǔ)益之藥中配伍清熱解毒、利尿行水的蒲公英，使氣機(jī)條達(dá)、經(jīng)血通暢、二便得利、毒邪可祛，諸藥共奏扶正補(bǔ)虛、理氣活血、解郁祛邪、調(diào)理陰陽之功。本方經(jīng)彭小菊主任大量臨床應(yīng)用于亞健康人群和惡性腫瘤病人，目前已獲國家發(fā)明專利[6]。臨床觀察發(fā)現(xiàn)，扶正調(diào)理液能夠顯著改善中老年冠心病患者心絞痛癥狀,降低膽固醇、三酰甘油、SOD(超氧化物歧化物)和MDA(丙二醛)值，有較好的降脂、抗衰老、抗氧化作用[5]。扶正調(diào)理液通過提高腫瘤及亞健康患者的睡眠質(zhì)量、減輕疲勞，改善焦慮、抑郁等負(fù)面心理狀態(tài)[2]，達(dá)到升高腫瘤化療患者的白細(xì)胞總數(shù)及中性粒細(xì)胞數(shù)量[3]，提高機(jī)體免疫功能，減輕放、化療不良反應(yīng)以提高耐受性和依從性的目的，改善惡性腫瘤患者的生活質(zhì)量。近年來運(yùn)用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的方法探討單味或復(fù)方中藥抗腫瘤作用機(jī)理的研究較多[7-9]，但通過運(yùn)用中藥復(fù)方改善腫瘤患者體質(zhì)，或降低西醫(yī)治療的不良反應(yīng)來提高腫瘤患者生存質(zhì)量的分子作用機(jī)制證據(jù)尚顯不足。 本文基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法初步預(yù)測扶正調(diào)理液的分子作用機(jī)制，通過S180荷瘤小鼠模型驗(yàn)證扶正調(diào)理液對(duì)腫瘤生長及免疫器官的影響，以期為臨床應(yīng)用提供科學(xué)的理論依據(jù)。

1 研究工具、儀器與材料

1.1 研究工具

基于BATMAN-TCM在線分析平臺(tái)(http://bionet.ncpsb.org/batman-tcm/)[10]獲取扶正調(diào)理液活性成分并預(yù)測可能的相互關(guān)系靶點(diǎn)的基因信息；應(yīng)用Cytoscape 3.5.1軟件[11]構(gòu)建化合物-疾病-靶點(diǎn)相互作用網(wǎng)絡(luò)；基于DAVID數(shù)據(jù)庫(The Database for Annotation, Visualization and Integrated Discovery)(https://david.ncifcrf.gov/)[12]、京都基因與基因組百科全書(Kyoto encyclopedia of genes and genomes，KEGG)(https://www.kegg.jp/)[13]、STRING數(shù)據(jù)庫(https://www.string-db.org/)[14]、生物分子通路數(shù)據(jù)庫(Reactome)(http://www.reactome.org)[15]、R語言包3.5.1(R version 3.5.1)[16]進(jìn)行通路富集分析。

1.2 儀器與材料

1.2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及瘤株

昆明種雄性小鼠，體質(zhì)量18～22 g，由湖北省疾病預(yù)防控制中心提供；S180腹水瘤細(xì)胞購自中國上海典型培養(yǎng)物保藏中心，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)經(jīng)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器

SW-CJ-2F超凈臺(tái)(蘇州凈化設(shè)備有限公司),MLS-3781L高壓滅菌鍋(日本三洋公司),Mettlerae240十萬分之一天平(梅特勒-托利多儀器上海有限公司),Thermo 21R離心機(jī)(美國Thermo公司),Advantage A5超凈純水器(美國密理博公司),DW-86L388A超低溫冰箱(中國海爾公司)。

1.2.3 實(shí)驗(yàn)藥物

順鉑粉針劑(規(guī)格：10 mg/瓶，批號(hào)：041115，齊魯制藥有限公司)；扶正調(diào)理液飲片購于青島大學(xué)附屬醫(yī)院藥劑科，經(jīng)煎煮后濃縮至藥材質(zhì)量濃度0.5 g/mL。每次給藥前現(xiàn)取混勻后使用，藥物儲(chǔ)存在4 ℃條件下。

2 方法與結(jié)果

2.1 基于BATMAN-TCM構(gòu)建扶正調(diào)理液靶點(diǎn)的作用網(wǎng)絡(luò)

BATMAN-TCM是一款中藥成分分子機(jī)制的生物信息學(xué)分析工具，采用基于相似度的目標(biāo)靶點(diǎn)預(yù)測方法，根據(jù)潛在的藥物-靶標(biāo)相互作用與已知藥物-靶標(biāo)相互作用的相似性排序[10]，模型預(yù)測性能可信度較高。預(yù)測相關(guān)參數(shù)設(shè)置Select input type：Herb or Herb list；Herb or Herb list (Pinyin/Latin/English name one herb per line)：LING ZHI, HUANG QI,CHAO BAI ZHU,FU LING,SHENG DI HUAG,HUANG JING,ZHI HE SHOU WU,YU ZHU,GOU QI,YIN YANG HUO,LAI FU ZI,PU HUANG,MU XIANG,PU GONG YING,SAN QI；Input parameter Score cutoff：20；P-value after Benjamini-Hochberg multiple testing correction (AdjustedP-value)：0.05。預(yù)測扶正調(diào)理液活性成分相關(guān)的target name、gene、fit score等參數(shù)，篩選BATMAN-TCM相似度評(píng)分>48的關(guān)鍵靶點(diǎn)共400個(gè)，涉及活性化合物358個(gè)。根據(jù)已知和預(yù)測的候選目標(biāo)蛋白，選擇靶點(diǎn)連接數(shù)>12，繪制包含相關(guān)生物途徑和TTD(治療靶點(diǎn)數(shù)據(jù)庫)疾病表型的化合物-靶點(diǎn)-通路-疾病作用網(wǎng)絡(luò)圖(圖1，P<0.05)，BATMAN-TCM在線分析提示該相互作用網(wǎng)絡(luò)中關(guān)鍵靶點(diǎn)包括雌激素受體1(ESR1)、κ型阿片受體(OPRK1)、糖皮質(zhì)激素受體 (NR3C1)、鹽皮質(zhì)激素受體(NR3C2)、腺苷A1 受體 (ADORA1) 等，涉及的關(guān)鍵疾病包括癌癥(非特異性)、疼痛、乳腺癌、心血管疾病、炎癥反應(yīng)、前列腺癌、高血壓、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、阿爾茨海默氏病、抑郁、動(dòng)脈粥樣硬化等，體現(xiàn)中醫(yī)藥整體觀念及中藥組方配伍的多成分-多靶點(diǎn)-多通路調(diào)控疾病的作用特點(diǎn)。

圖1 扶正調(diào)理液多成分-多靶點(diǎn)-多通路調(diào)控疾病的網(wǎng)絡(luò)Fig.1 Multi component-multi target-multi pathway regulation network of Fuzheng Tiaoli Decoction

2.2 構(gòu)建關(guān)鍵靶點(diǎn)的蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)

STRING數(shù)據(jù)庫基于目前已知和預(yù)測的蛋白質(zhì)之間直接、間接相互作用信息，通過計(jì)算每個(gè)蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用(protein-protein interaction，PPI)程度的P值，P值高則PPI的置信度高。上傳BATMAN-TCM平臺(tái)相似度評(píng)分>48的400個(gè)扶正調(diào)理液關(guān)鍵靶點(diǎn)基因ID至STRING在線數(shù)據(jù)庫，獲取PPI信息，選取P>0.95的置信度的蛋白關(guān)系，構(gòu)建扶正調(diào)理液關(guān)鍵靶點(diǎn)蛋白在系統(tǒng)水平上的PPI網(wǎng)絡(luò)(圖2)。

圖2 扶正調(diào)理液靶點(diǎn)PPI網(wǎng)絡(luò)Fig.2 The PPI network of key targets of Fuzheng Tiaoli Decoction

網(wǎng)絡(luò)拓?fù)鋵W(xué)分析結(jié)果顯示，該網(wǎng)絡(luò)的平均介數(shù)=0.318，平均度值=1.62，PPI富集P< 1.0×10-16。基于INTERPRO Protein Domains and Features(https://www.ebi.ac.uk/interpro/)、SMART Protein Domains(http://smart.embl-heidelberg.de/)、PFAM Protein Domains(http://pfam.xfam.org/)數(shù)據(jù)庫對(duì)PPI網(wǎng)絡(luò)靶點(diǎn)進(jìn)行生物學(xué)聚類分析，根據(jù)錯(cuò)誤發(fā)現(xiàn)率(false discovery rate)提示關(guān)鍵靶點(diǎn)主要涉及神經(jīng)遞質(zhì)門控離子通道、離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白、3′5′-環(huán)核苷酸磷酸二酯酶、蛇形7TM GPCR化學(xué)受體、具有保守的“ HD”基序的金屬依賴性磷酸水解酶、連接的離子通道L-谷氨酸和甘氨酸結(jié)合位點(diǎn)、脯氨酰4-羥化酶α亞基同源物等。

2.3 GO富集分析

基于DAVID V6.8數(shù)據(jù)庫，采用改進(jìn)的Fisher精確檢驗(yàn)算法進(jìn)行基因本體(gene ontology, GO)富集分析，探索扶正調(diào)理液靶點(diǎn)基因在基因功能中的作用，應(yīng)用R軟件根據(jù)P值(P<0.005)繪制GO富集分析結(jié)果點(diǎn)狀圖(圖3)，其中細(xì)胞成分包括細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞溶質(zhì)、細(xì)胞質(zhì)膜、線粒體等；分子功能包括氧化還原酶活性、跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白活性、裂解酶活性、酶結(jié)合等；生物過程包括小分子代謝過程、細(xì)胞氨基酸代謝過程、細(xì)胞間信號(hào)、穩(wěn)態(tài)過程、脂質(zhì)代謝過程等。

圖3 GO通路富集分析點(diǎn)狀圖Fig.3 The scatter chart of GO pathway enrichment analysis

2.4 Reactome生化反應(yīng)通路富集分析

Reactome是基于PSIQUIC Web服務(wù)將來自反應(yīng)組功能相互作用網(wǎng)絡(luò)和外部相互作用的生物信息學(xué)數(shù)據(jù)庫(如IntAct(https://www.ebi.ac.uk/intact/)，BioGRID(https://thebiogrid.org/)，ChEMBL(https://www.ebi.ac.uk/chembl/)，iRefIndex(http://irefindex.uio.no/)，MINT(https://mint.bio.uniroma2.it/)和STRING)的分子相互作用數(shù)據(jù)對(duì)數(shù)據(jù)集進(jìn)行富集分析，結(jié)果偏重于生化反應(yīng)通路信息。根據(jù)錯(cuò)誤發(fā)現(xiàn)率由低至高繪制Reactome途徑-基因圈圖(圖4)，結(jié)果提示扶正調(diào)理液主要涉及神經(jīng)元系統(tǒng)、跨化學(xué)突觸的傳遞、神經(jīng)遞質(zhì)受體和突觸后信號(hào)傳遞、代謝、胺配體-結(jié)合受體、心臟傳導(dǎo)、G蛋白偶聯(lián)受體(GPCR)下游信號(hào)、通過GPCR發(fā)出信號(hào)等通路。

圖4 Reactome生化反應(yīng)通路富集分析結(jié)果Fig.4 Reactome biochemical reaction pathway enrichment analysis results

2.5 KEGG 通路富集分析

應(yīng)用DAVID V6.8數(shù)據(jù)庫對(duì)扶正調(diào)理液靶點(diǎn)進(jìn)行KEGG生物通路富集分析，靶點(diǎn)基因列表導(dǎo)入DAVID數(shù)據(jù)庫，勾選OFFICIAL_GENE_SYMBOL、Gene list、Submit list，選擇基因功能分類工具，修改背景為人類，選擇Pathway，篩選P<0.01的通路為可靠通路進(jìn)行注釋分析。應(yīng)用R語言根據(jù)P值(P<0.05)對(duì)主要代謝通路繪圖分析(圖5)。結(jié)果主要涉及神經(jīng)活動(dòng)配體-受體相互作用，精氨酸和脯氨酸代謝，鈣信號(hào)通路，血清素能突觸，嘌呤代謝，味覺轉(zhuǎn)導(dǎo)，酪氨酸代謝，丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代謝，氨?；?TRNA的生物合成，CGMP-PKG信號(hào)通路，多巴胺能突觸，GABA能突觸，膽堿能突觸，氨基酸生物合成，碳代謝，唾液分泌，甘氨酸、絲氨酸和蘇氨酸的代謝，胃酸分泌，TRP通道的炎癥介質(zhì)調(diào)節(jié)，類固醇激素的合成，長期抑郁等途徑。

圖5 KEGG通路富集分析點(diǎn)狀圖Fig.5 The scatter chart of KEGG pathway enrichment analysis

2.6 扶正調(diào)理液對(duì)S180荷瘤小鼠飲食、腫瘤生長及免疫器官的影響

小鼠給藥30 d后停止給藥，稱取體質(zhì)量。在末次給藥24 h后，將小鼠頸椎脫臼處死，迅速解剖剝?nèi)×鰤K、脾臟和胸腺并剝離被膜，分別記錄各臟器質(zhì)量，計(jì)算臟器指數(shù)。抑瘤率、脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)按下式計(jì)算：

抑瘤率=(模型組平均瘤質(zhì)量-給藥組平均瘤質(zhì)量)/模型組平均瘤質(zhì)量×100%

脾臟指數(shù)=脾臟質(zhì)量(g)/小鼠體質(zhì)量(g)

胸腺指數(shù)=胸腺質(zhì)量(g)/小鼠體質(zhì)量(g)

所有樣本重復(fù)測定3次，數(shù)據(jù)分析應(yīng)用統(tǒng)計(jì)分析軟件SPSS 19.0，數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(X±SD)表示，多組間計(jì)量資料比較采用 One-way ANOVA單因素方差分析，P<0.05 為存在顯著性差異，P<0.01為極顯著性差異。

2.6.1 扶正調(diào)理液對(duì)小鼠進(jìn)食量和體質(zhì)量的影響

結(jié)果顯示扶正調(diào)理液低、高劑量組小鼠的精神狀態(tài)和被毛的光澤度優(yōu)于陽性組及陰性組。結(jié)果如圖6～7所示。低、高劑量組小鼠的單位質(zhì)量進(jìn)食量顯著高于陽性組及陰性組(P<0.05)；陰性組、陽性組和低劑量組的28 d體質(zhì)量增長率分別為20.13%、12.12%和13.84%、而高劑量組小鼠的28 d體質(zhì)量增長率為28.52%，顯著高于其他各組(P<0.05)。

圖6 小鼠單位質(zhì)量進(jìn)食量變化趨勢Fig. 6 Graph showing the changing trends in food intake per unit mass of mice

圖7 扶正調(diào)理液對(duì)小鼠體質(zhì)量增長率的影響Fig.7 The effect of Fuzheng Tiaoli decoction on the growth rate of mice body mass

2.6.2 小鼠腫瘤質(zhì)量及腫瘤抑制率比較

結(jié)果如圖8所示，陰性組平均瘤質(zhì)量(1.65±0.24)g(圖中抑瘤率根據(jù)陰性組腫瘤質(zhì)量計(jì)算)；陽性組平均瘤質(zhì)量(0.86±0.11)g，腫瘤抑制率47.89%；扶正調(diào)理液低劑量組平均質(zhì)量(1.51±0.27)g，腫瘤抑制率僅為8.73%；而高劑量組平均瘤質(zhì)量(1.33±0.16)g，腫瘤抑制率19.54%，各組間比較存在顯著性差異(P<0.01)。

圖8 S180荷瘤小鼠腫瘤抑制率Fig.8 Tumor inhibition ratein S180 tumor-bearing mice

2.6.3 小鼠臟器指數(shù)的比較

結(jié)果如圖9所示，陰性組、陽性組、扶正調(diào)理液低劑量組和高劑量組的胸腺指數(shù)分別為0.003 24±0.000 23、0.003 67±0.000 31、0.003 47±0.000 26和0.003 43±0.000 31，低劑量組和高劑量組的胸腺指數(shù)不存在顯著性差異(P>0.05)，低于陽性組但顯著高于陰性組(P<0.05)，提示扶正調(diào)理液可以顯著增加S180荷瘤小鼠的胸腺質(zhì)量，改善胸腺萎縮程度。脾臟指數(shù)分別為0.079 3±0.008 4、0.079 8±0.007 1、0.070 3±0.006 5和0.058 3±0.051 9，陰性組和陽性組脾臟指數(shù)不存在顯著性差異(P>0.05)，高劑量組顯著低于陽性組(P<0.01)，提示扶正調(diào)理液可以顯著改善S180荷瘤小鼠的脾臟腫大的狀態(tài)。

注：*P<0.05， **P<0.01，與陰性組相比。圖9 扶正調(diào)理液對(duì)S180荷瘤小鼠胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)的影響Fig. 9 The effect of Fuzheng Tiaoli Decoction on thymus and spleen indices of S180 tumor-bearing mice

3 討論與結(jié)論

惡性腫瘤患者普遍存在較高程度的營養(yǎng)不良問題，營養(yǎng)風(fēng)險(xiǎn)會(huì)對(duì)腫瘤預(yù)后及臨床結(jié)局產(chǎn)生一定的負(fù)面影響[17]；同時(shí)，這些患者普遍有焦慮、失眠、郁悶、煩躁等不良情緒。臨床應(yīng)用扶正調(diào)理液時(shí)發(fā)現(xiàn)其顯著改善腫瘤及亞健康患者的睡眠質(zhì)量，減輕疲勞，改善焦慮、抑郁等負(fù)面心理狀態(tài)[3]，顯著升高惡性腫瘤化療患者的白細(xì)胞總數(shù)及中性粒細(xì)胞數(shù)量[4]。 經(jīng)本文研究，Reactome富集分析結(jié)果提示扶正調(diào)理液主要涉及神經(jīng)元系統(tǒng)、跨化學(xué)突觸的傳遞、神經(jīng)遞質(zhì)受體和突觸后信號(hào)傳遞、代謝、GPCR信號(hào)通路等。KEGG通路富集分析結(jié)果涉及更為豐富的生物學(xué)通路，與Reactome富集分析結(jié)果有異曲同工之妙，相關(guān)通路也主要與神經(jīng)系統(tǒng)和代謝途徑相關(guān)：如與精神狀態(tài)相關(guān)通路包括神經(jīng)活動(dòng)配體-受體相互作用、鈣信號(hào)通路、GABA能突觸、膽堿能突觸、多巴胺能突觸、長期抑郁等，其中大多數(shù)通路屬于GPCR相關(guān)通路；與進(jìn)食相關(guān)的通路包括血清素能突觸、味覺轉(zhuǎn)導(dǎo)、唾液分泌、胃酸分泌等；與營養(yǎng)代謝相關(guān)的通路包括各類氨基酸和生物合成及代謝過程、氨?；?TRNA的生物合成、碳代謝、嘌呤代謝等。

扶正調(diào)理液顯著增加了S180荷瘤小鼠的單位質(zhì)量進(jìn)食量和營養(yǎng)狀況，高劑量組小鼠的精神狀態(tài)和被毛光澤度優(yōu)于陽性組及陰性組，高劑量組28 d體質(zhì)量增長率為28.52%，顯著高于其他組(P<0.05)。臨床觀察和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果均顯示，扶正調(diào)理液具有改善焦慮、抑郁等負(fù)面心理狀態(tài)和改善睡眠質(zhì)量等作用，這可能與關(guān)鍵靶點(diǎn)OPRK1、NR3C1、NR3C2、ADORA1密切相關(guān)。KEGG、Reactome通路富集分析結(jié)果提示扶正調(diào)理液相關(guān)通路與神經(jīng)系統(tǒng)密切相關(guān)，關(guān)鍵靶點(diǎn)如OPRK1、NR3C1、NR3C2主要涉及強(qiáng)啡肽能系統(tǒng)和皮質(zhì)醇系統(tǒng)。強(qiáng)啡肽能系統(tǒng)參與神經(jīng)性疼痛的傳遞，強(qiáng)啡肽根據(jù)其阿片樣物質(zhì)或非阿片樣物質(zhì)的作用發(fā)揮抗傷害感受的作用，通過腦皮質(zhì)回路影響疼痛的負(fù)性情感[18]。OPRK1及其內(nèi)源性配體強(qiáng)啡肽可介導(dǎo)行為對(duì)厭惡或壓力性經(jīng)歷的反應(yīng)[19]，接觸應(yīng)激通過增加邊緣區(qū)域的強(qiáng)啡肽水平[20]，激活OPRK1引起嚙齒動(dòng)物煩躁不安和抑郁樣行為[21-22]。近年來研究發(fā)現(xiàn)皮質(zhì)醇對(duì)壓力的影響可能取決于與壓力途徑相關(guān)基因的表達(dá)水平，其中主要涉及NR3C1、NR3C2基因表達(dá)與精神狀態(tài)和精神壓力轉(zhuǎn)化相關(guān)疾病密切相關(guān)，涉及了精神分裂癥、抑郁癥、狂躁癥、精神障礙等多種神經(jīng)系統(tǒng)疾病[23-25]，提示扶正調(diào)理液影響皮質(zhì)醇系統(tǒng)相關(guān)基因的表達(dá)可能是其發(fā)揮改善精神系統(tǒng)癥狀的重要途徑之一。此外，NR3C1、NR3C2也與多種腫瘤的進(jìn)展密切相關(guān)，如NR3C1與前列腺癌、結(jié)直腸癌、大腸癌等的進(jìn)展密切相關(guān)[26-28]，NR3C2的表達(dá)介導(dǎo)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤、口腔鱗狀細(xì)胞癌、結(jié)直腸癌等惡性腫瘤的進(jìn)展[29-31]。

GO富集分析結(jié)果提示細(xì)胞成分方面涉及細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞溶質(zhì)、細(xì)胞質(zhì)膜、線粒體等生物途徑。腫瘤的發(fā)生和轉(zhuǎn)移與腫瘤所處的微環(huán)境密切相關(guān)，腫瘤微環(huán)境不僅包括癌細(xì)胞本身，還包括周圍的基質(zhì)細(xì)胞、免疫細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、生長因子以及特殊的生理生化條件，腫瘤微環(huán)境與腫瘤細(xì)胞相互作用共同介導(dǎo)了腫瘤的免疫耐受[32]。腺苷受體在腫瘤的免疫耐受過程中起到了非常重要的作用，腺苷受體通過P1型嘌呤受體(ADOA1R、ADOA2AR、ADOA2BR、ADOA3R)介導(dǎo)抗炎癥效應(yīng)[33]。腺苷受體也屬于G蛋白偶聯(lián)受體家族，廣泛表達(dá)于包括免疫細(xì)胞在內(nèi)的多種細(xì)胞。腺苷受體通過其受體抑制NK細(xì)胞、DC細(xì)胞、CTL等功能的發(fā)揮，同時(shí)增強(qiáng)免疫抑制細(xì)胞的活性，參與腫瘤微環(huán)境免疫耐受的形成[32]。腺苷受體作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞及基質(zhì)細(xì)胞，促進(jìn)腫瘤微環(huán)境新生血管的形成，為腫瘤的轉(zhuǎn)移提供必要條件，使其成為抗腫瘤藥物研究的重要靶點(diǎn)之一[32]。已有研究表明，ADORA1抑制介導(dǎo)腫瘤的免疫逃逸進(jìn)程[32-33]，此外還有研究指出ADOR1的表達(dá)也參與了抗抑郁樣作用[34-35]，提示扶正調(diào)理液通過影響ADOR1的表達(dá)改善腫瘤患者的精神狀態(tài)或影響腫瘤進(jìn)展，非常值得進(jìn)一步深入研究。

本研究開展的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，扶正調(diào)理液顯著改善S180荷瘤小鼠脾臟腫大和胸腺萎縮的組織病變情況，增強(qiáng)荷瘤小鼠免疫器官功能，增加小鼠進(jìn)食量、體重和毛發(fā)光澤度等，與文中網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的研究結(jié)果不謀而合。本研究提示扶正調(diào)理液可能通過影響OPRK1、NR3C1、NR3C2、ADORA1、ESR1等基因的表達(dá)，影響神經(jīng)活動(dòng)配體-受體相互作用、鈣信號(hào)通路、血清素能突觸、味覺轉(zhuǎn)導(dǎo)、氨基酸代謝、唾液分泌等信號(hào)通路，改善焦慮、抑郁等負(fù)面心理狀態(tài)，改善睡眠質(zhì)量、減輕疲勞、改善食欲和營養(yǎng)狀況，增強(qiáng)免疫功能，抑制腫瘤的進(jìn)展，體現(xiàn)中藥復(fù)方的多靶點(diǎn)和整體性的作用特點(diǎn)，為進(jìn)一步研究扶正調(diào)理液分子作用機(jī)制提供了新思路。