豬偽狂犬病疫苗的研究進(jìn)展

陳玉波

（內(nèi)蒙古巴林左旗農(nóng)牧業(yè)綜合行政執(zhí)法大隊，內(nèi)蒙古赤峰 025450）

豬偽狂犬病是由偽狂犬病毒感染引起的急性病毒性的疫病，偽狂犬病毒在世界各國的豬場中廣泛分布，由于偽狂犬病毒可造成豬、牛、羊等多種經(jīng)濟(jì)動物發(fā)病死亡，對養(yǎng)殖業(yè)可造成嚴(yán)重的影響，因此世界動物衛(wèi)生組織將其列為必須通報的動物疫病，我國將該病列為二類動物疫病[1,2]。偽狂犬病最早見于1813年，在美國的牛群中被發(fā)現(xiàn)，由于其臨床癥狀與狂犬病類似，因此被稱為偽狂犬病，隨后在多種動物中發(fā)現(xiàn)該病，并在世界各國出現(xiàn)不同程度的流行，當(dāng)前，美國、加拿大、新西蘭等國家已成功根除該病。豬感染偽狂犬病毒后可出現(xiàn)呼吸道癥狀、神經(jīng)癥狀，臨床表現(xiàn)為仔豬出現(xiàn)高熱、角弓反張、眼球震顫等，病死率可高達(dá)100%；母豬感染后會出現(xiàn)繁殖障礙，表現(xiàn)為流產(chǎn)、產(chǎn)死胎[3]；種公豬感染后可出現(xiàn)睪丸腫脹、萎縮、繁殖性能降低；由于偽狂犬病毒感染后可造成仔豬較高的死淘率和母豬繁殖障礙，給豬養(yǎng)殖業(yè)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失[4]。

1 我國豬偽狂犬病的流行情況

1947年，我國首次報道了貓偽狂犬病，隨后在豬、牛、羊等動物群體中發(fā)現(xiàn)該病，并給我國家畜養(yǎng)殖業(yè)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。在20世紀(jì)80年代，偽狂犬病在我國養(yǎng)豬場中廣泛流行，并隨著國內(nèi)生豬市場貿(mào)易活動和豬場的集約化管理，導(dǎo)致豬偽狂犬病的廣泛傳播并造成較高的發(fā)病率和病死率。為了控制豬偽狂犬病，我國從匈牙利引進(jìn)了Bartha-K61減毒活疫苗，使得該病得到了有效的控制。但在2011年，國內(nèi)許多豬場再次發(fā)生豬偽狂犬病疫情，盡管這些豬場已接種了Bartha-K61疫苗，但感染的新生仔豬死亡率仍高達(dá)50%[5]。對新的偽狂犬病病毒進(jìn)行分子生物學(xué)分析，分離的病毒株與經(jīng)典的偽狂犬病病毒相比基因序列已出現(xiàn)了明顯的變異，Bartha-K61減毒活疫苗不能給接種豬提供完全的保護(hù)力。

目前，偽狂犬病病毒可分為2種基因型，其中基因Ⅰ型主要流行于歐洲、美洲和中國部分地區(qū)，基因Ⅱ型主要分離自亞洲的國家[6]。在20世紀(jì)90年代我國主要流行的是基因Ⅰ型毒株，而2011年流行的是基因型Ⅱ型的變異毒株，這也就解釋了Bartha-K61毒株（基因型Ⅰ）的疫苗為何不能給2011年后的變異毒株感染提供完全的保護(hù)能力[7]。

有研究報道，在調(diào)查的29個省份中豬偽狂犬病病毒gE抗體血清平均陽性率為29.87%，2018—2019年江蘇、河南、江西3個省份的豬血清中偽狂犬病病毒陽性率超過35%（1398/3675），而2016—2018年24個省份的偽狂犬病毒血清流行率超過35%（1398/3675）[8]。這些研究結(jié)果表明，盡管國內(nèi)豬場飼養(yǎng)管理水平有所提高，偽狂犬病疫苗得到廣泛應(yīng)用，但近年來偽狂犬病病毒野毒株在豬群中的流行情況仍十分很嚴(yán)重，偽狂犬病毒對我國養(yǎng)豬業(yè)的威脅仍持續(xù)存在。在國內(nèi)9個省份的野豬群中偽狂犬病病毒血清陽性率在30%以上，華北、華東、華中和華南地區(qū)的野豬血清陽性率高于東北、西北和西南地區(qū)，這可能與野豬的品種、季節(jié)等因素有關(guān)[9]。2021年至今，國內(nèi)豬群總體的核酸陽性率為11.5%，并且在華東和華中地區(qū)偽狂犬病的發(fā)病率均在10%以上[8]。

2 偽狂犬病病毒的病原特點(diǎn)

偽狂犬病病毒是皰疹病毒科甲型皰疹病毒亞科水痘病毒屬的成員，與牛皰疹病毒Ⅰ型、馬皰疹病毒Ⅰ型有較近的親緣性[10]。偽狂犬病病毒粒子呈準(zhǔn)球形，直徑為150～180 nm，基因組為線性雙鏈DNA，基因組大小約1.43×105kb，并包含一個獨(dú)特長區(qū)（UL）、一個獨(dú)特短區(qū)（US）、一個末端重復(fù)序列（TRS）和內(nèi)部重復(fù)序列[11]。目前已鑒定出的偽狂犬病病毒基因組編碼了至少11種糖蛋白[12]，其中g(shù)B、gD、gH、gL和gK是必需的糖蛋白，其他糖蛋白被認(rèn)為是非必要的，但gE基因缺失可造成偽狂犬病病毒毒力顯著下降，該蛋白對偽狂犬病病毒在神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)傳播起重要作用，gE缺失株不能入侵宿主的神經(jīng)系統(tǒng)。此外，偽狂犬病病毒基因組還編碼有幾種非結(jié)構(gòu)蛋白，如胸腺激酶（TK）和蛋白激酶（PK），這2種非結(jié)構(gòu)蛋白與病毒的毒力有關(guān)。

偽狂犬病病毒可在多種哺乳動物細(xì)胞上繁殖，如豬腎細(xì)胞、牛睪丸細(xì)胞等原代細(xì)胞以及Vero、PK-15、BHK-21等傳代細(xì)胞。偽狂犬病病毒僅有1種血清型，但有2種基因型，不同的基因型在世界各國的分布情況不同。偽狂犬病病毒對外界環(huán)境的抵抗能力較強(qiáng)，如在44℃的環(huán)境中靜置5 h仍有28%的存活率，但在55～60℃作用 30～50 min，70℃ 10～15 min、80℃ 3 min可滅活該病毒，在100℃的環(huán)境中病毒可立即滅活。在干燥的條件下或陽光直射時，病毒可快速滅活。病毒對乙醚、氯仿、X射線或紫外線等物理或化學(xué)方式滅活。病毒在pH值6～8時最穩(wěn)定，在-70℃可存活較長時間，凍干的病毒培養(yǎng)物可保存數(shù)年。

3 豬偽狂犬病疫苗研究進(jìn)展

3.1 臨床上使用的疫苗

國內(nèi)市售的豬用偽狂犬病疫苗主要分為滅活疫苗和弱毒活疫苗。豬偽狂犬病滅活疫苗主要為滅活的豬偽狂犬病毒鄂A株或gE基因缺失的HNX-12毒株，通過頸部注射，免疫期一般為6個月，在仔豬斷奶前接種1次，間隔28～42 d后加強(qiáng)免疫1次，以后間隔6個月免疫1次，妊娠母豬產(chǎn)前免疫1次。弱毒活疫苗使用的毒株有Bartha-K61毒株、TK-gG基因缺失的HB-98株、TK-gI-gE基因缺失的SA215株和豬偽狂犬病滅活疫苗PRV_(SX)-gE株[2]。Bartha-K61毒株疫苗采取肌肉注射的方式接種，可給免疫的動物提供12個月的免疫保護(hù)期。SA215株疫苗采取肌肉注射的方式進(jìn)行免疫，免疫期為112 d，仔豬被動免疫期為21～28 d。HB-98株疫苗主要采取皮下或肌肉注射方式免疫，仔豬可采取滴鼻或肌肉注射，可提供6個月的免疫期。上述弱毒活疫苗應(yīng)在仔豬出生后7 d、斷奶前接種免疫，成年豬在每年春、秋兩季各免疫1次，后備母豬在產(chǎn)前1個月左右接種免疫1次。

3.2 研發(fā)中的疫苗

近年來，基于經(jīng)典或變異偽狂犬病病毒毒株的一系列新型基因修飾疫苗已被研發(fā)出來。已證實(shí)gE、gI和TK基因與偽狂犬病病毒毒株的毒力接近，但不影響病毒免疫原性，因此，這些基因是研究人員研制針對PR的基因工程疫苗的理想靶標(biāo)，目前，已商品化的有三基因缺失（gE、gI、TK）疫苗，于2003年獲批的偽狂犬病病毒F株生產(chǎn)的疫苗，基于偽狂犬病病毒Ea株開發(fā)的另一種TK/gG缺失疫苗2006年獲得許可[13]。自2011年以來，大量研究人員基于新出現(xiàn)的偽狂犬病病毒變種開發(fā)了新型基因工程疫苗，但迄今為止只有2種類型的疫苗獲得許可，包括2019年基于偽狂犬病病毒HeN1201毒株的gE基因缺失滅活疫苗，以及2017年基于偽狂犬病病毒C株的另一種天然四基因缺失（gI、gE、Us9、Us2）疫苗[14]。雖然上述疫苗可有效保護(hù)免疫的豬只不受經(jīng)典或變異偽狂犬病毒毒株攻擊，但疫苗的安全性還需反復(fù)進(jìn)行動物試驗(yàn)驗(yàn)證。

考慮到PRV基因組較大，耐受基因修飾的特性也可以作為表達(dá)其他外源蛋白的優(yōu)良載體，同時不影響PRV本身的感染性和免疫原性，一些可以編碼其他動物病原體關(guān)鍵抗原的減毒PRV重組活疫苗已經(jīng)被創(chuàng)造出來[15]。研究人員開發(fā)了一種減毒的重組偽狂犬病毒，rPR重組病毒表達(dá)了豬繁殖與呼吸障礙綜合征的GP5包膜蛋白，能夠?qū)臃N豬提供明顯的保護(hù)作用，并減少由PRRSV攻擊引起的致病性損傷[16]。Song等[17]構(gòu)建了表達(dá)豬圓環(huán)病毒ORF2基因的重組偽狂犬病病毒，該重組病毒免疫后引發(fā)豬只對偽狂犬病病毒和2型圓環(huán)病毒的顯著體液免疫反應(yīng)，其中在免疫后49 d可以檢測到2型圓環(huán)病毒特異性淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)。此外，以偽狂犬病毒為載體構(gòu)建的口蹄疫病毒VP1重組偽狂犬病毒、豬細(xì)小病毒VP2重組偽狂犬病毒、豬瘟病毒E2重組偽狂犬病毒等均取得了一定成果，這些多病原聯(lián)合疫苗的研發(fā)為養(yǎng)豬業(yè)的疫苗免疫提供了新的思路[18,19]。

4 小結(jié)

目前，國內(nèi)豬偽狂犬病的防控基本得到了控制，通過疫苗免疫、病原監(jiān)測、淘汰病豬的綜合性防控措施，該病得到了較好的防控效果，但國內(nèi)豬場中的偽狂犬病仍表現(xiàn)零星散發(fā)，距離全國統(tǒng)一凈化豬群中的偽狂犬病病毒還有很長的路要走。下一步，需對偽狂犬病病毒與豬的相互作用、病毒的傳播途徑以及復(fù)制過程進(jìn)行深入研究，對病毒編碼的蛋白功能和作用進(jìn)行深入驗(yàn)證，為新型疫苗和特效藥物的研發(fā)提供新的靶標(biāo)，從而推動新型防控手段的研究。