副溶血性弧菌致病性和檢測(cè)方法研究進(jìn)展

陳媛媛 王亞男 劉士朋

副溶血性弧菌(vibrio parahaemolyticus)是一種常見的病原菌，主要棲息在海水中，存在于近海海水、海產(chǎn)品及鹽漬食品中。如果食用了副溶血性弧菌大量污染的食品，會(huì)引發(fā)食物中毒。世界第1例有記錄的副溶血性弧菌食物中毒發(fā)生在日本，1950年日本大阪發(fā)生一起食用青魚干引起的爆發(fā)性食物中毒事件，造成272人發(fā)病、20人死亡，日本人藤野從青魚干中最早分離得到副溶血性弧菌，這是副溶血性弧菌的首次報(bào)道[1]。1963年由日本人Sakazaki等正式命名。研究發(fā)現(xiàn)，食用被副溶血性弧菌污染的海產(chǎn)品可能會(huì)引起急性腸胃炎，一般情況下健康人群感染副溶血性弧菌后癥狀較輕，重癥患者可能會(huì)因脫水造成休克，少數(shù)患者可出現(xiàn)意識(shí)不清、痙攣、面色蒼白或發(fā)紺等現(xiàn)象，若治療不及時(shí)，甚至可導(dǎo)致死亡[2]。據(jù)我國(guó)食源性疾病監(jiān)測(cè)網(wǎng)資料統(tǒng)計(jì)，副溶血性弧菌已成為我國(guó)食物中毒首位病原菌[3]，在沿海地區(qū)副溶血性弧菌引起的食物中毒占比高達(dá)50%～70%[4-7]。2016年國(guó)家食品安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估中心發(fā)布《不可忽視的食源性致病菌——副溶血性弧菌》，指出近年來副溶血性弧菌已經(jīng)躍居我國(guó)食源性疾病微生物致病因子榜首。因此，充分了解副溶血性弧菌生物學(xué)特性、致病性、污染規(guī)律，對(duì)預(yù)防副溶血性弧菌感染具有重要意義。

1 副溶血性弧菌的生物學(xué)性狀

1.1 形態(tài)與培養(yǎng)特性 副溶血性弧菌屬于細(xì)菌界、變形菌門、γ-變形菌綱、弧菌目、弧菌科、弧菌屬，為革蘭氏陰性無芽孢桿菌，大小一般為(0.5～0.8)μm×(1.4～2.6)μm，易呈多形態(tài)，有棒狀、弧狀、卵圓狀、球狀、絲狀等；單端一根鞭毛，運(yùn)動(dòng)活潑，兩端濃染；排列不規(guī)則，多數(shù)散在，偶有成對(duì)排列。副溶血性弧菌屬于嗜鹽菌，在無鹽的情況下不生長(zhǎng)，在含有2%～3% NaCl的培養(yǎng)基內(nèi)生長(zhǎng)最為旺盛，在6% NaCl和8% NaCl的胰胨水中生長(zhǎng)旺盛，在10% NaCl的胰胨水中不生長(zhǎng)或微弱生長(zhǎng)，鹽濃度達(dá)到>11%時(shí)停止生長(zhǎng)。適宜生長(zhǎng)的pH值為5.3～10，最適pH值為7.4～8.2，最適生長(zhǎng)溫度為30～37℃。在固體培養(yǎng)基上菌落通常隆起，呈圓形，表面光滑，濕潤(rùn)，一般不會(huì)產(chǎn)生色素，但能生長(zhǎng)周鞭毛。在肉湯和胨水等液體培養(yǎng)基中菌體生長(zhǎng)單鞭毛，運(yùn)動(dòng)活潑，渾濁生長(zhǎng)，并會(huì)在表面形成菌膜。

1.2 生化特性 副溶血性弧菌在3%氯化鈉三糖鐵瓊脂上，能使底層變黃不變黑，斜面顏色不變或紅色加深，不產(chǎn)氣泡。副溶血性弧菌氧化酶陽性，有動(dòng)力，分解葡萄糖、甘露醇，分解葡萄糖不產(chǎn)氣，不分解蔗糖、乳糖，硫化氫試驗(yàn)陰性，Voges-Proskauer(V-P)試驗(yàn)陰性，β-半乳糖苷酶(ONPG)試驗(yàn)陰性[8]。

1.3 血清學(xué)性狀 副溶血性弧菌有三種抗原，即O抗原(菌體抗原)，K抗原(莢膜抗原)及H抗原(鞭毛抗原)。其中O抗原為耐熱性抗原，經(jīng)100℃加熱后仍保留抗原性。目前已記載12種O抗原和超過70種K抗原[9]。有5種K抗原被發(fā)現(xiàn)與兩個(gè)O群抗原的產(chǎn)生有關(guān)，因此，公認(rèn)有76種血清型。血清學(xué)檢測(cè)還未用于鑒定副溶血性弧菌，因?yàn)樗鼈儠?huì)與許多其他海洋生物發(fā)生交叉反應(yīng)。H抗原為所有菌株共有，無分型意義。

2 副溶血性弧菌的致病性

2.1 流行病學(xué)特征 副溶血性弧菌引起中毒的食品主要為海產(chǎn)品(魚、蝦、蟹、貝類等及其制品)，在淡水產(chǎn)品中也可被大量檢出[10]。副溶血性弧菌食物中毒多發(fā)生在夏、秋季節(jié)，發(fā)病急，潛伏期短，癥狀主要為腹痛、腹瀉，惡心、嘔吐、發(fā)熱，其次伴有頭痛、發(fā)汗、口渴等癥狀。副溶血性弧菌食物中毒常呈集體發(fā)生的特點(diǎn)，短時(shí)間內(nèi)驟然發(fā)生，病程較短，一般2～3 d即可痊愈，預(yù)后良好。目前我國(guó)依據(jù)WS/T 81-1996《副溶血性弧菌食物中毒診斷標(biāo)準(zhǔn)及處理原則》對(duì)副溶血性弧菌食物中毒進(jìn)行診斷和處理。

2.2 致病毒力因子 副溶血性弧菌的溶血毒素有3種，分別是不耐熱溶血毒素(thermolabile hemolysin， TLH)、耐熱性溶血毒素 (thermostable direct hemolysin， TDH)和耐熱相關(guān)溶血素(thermostable related hemolysin， TRH)[11]。

TLH由tlh基因編碼，tlh基因?qū)Ω比苎曰【蔫b定具有重要意義，tlh是副溶血性弧菌的種特異性基因，環(huán)境分離株和患者分離株都攜帶該基因[12]。有tlh編碼的TLH在我妻氏瓊脂上不出現(xiàn)溶血，其功能和致病性尚不完全清楚[13]。

TDH和TRH分別由tdh、trh 基因編碼，被認(rèn)為是副溶血性弧菌最重要的毒力因子。TDH是導(dǎo)致神奈川現(xiàn)象(Kanagawa phenomenon，KP)的溶血素，能耐受100℃ 10 min仍不失活，因此得名耐熱性溶血毒素[14]。1984年Kaper等[15]從KP+的副溶血性弧菌中克隆得到編碼TDH 的基因，并命名為tdh1，后續(xù)研究者發(fā)現(xiàn)tdh2、tdh3、tdh4、tdh5基因，與 tdh1 的序列相似性達(dá)到 97.20% 、96.75% 、96.70% 和 96.70%， tdh還存在于弧菌屬其他菌種。1987年Honda等[16]研究發(fā)現(xiàn)一株KP-副溶血性弧菌能產(chǎn)生不耐熱的毒素樣蛋白，這種毒素蛋白在60℃ 10 min 條件下被滅活，對(duì)小鼠具有毒性作用，高劑量可以致死，低劑量致腹瀉，該毒素與 TDH 抗原性有交叉，在免疫有相似之處，因此命名為TDH 相關(guān)溶血素，即TRH。測(cè)序發(fā)現(xiàn) trh與 tdh 基因有70%的序列相似性。

TDH和TRH兩種毒素與副溶血性弧菌的致病性密切相關(guān)，是判斷致病與否的重要標(biāo)志。調(diào)查發(fā)現(xiàn)幾乎所有臨床分離株都產(chǎn)TDH 或 TRH，90% 以上的臨床腹瀉患者分離株攜帶 tdh 和trh 基因或者攜帶其中一種，而環(huán)境分離株的攜帶率不到 6%，這充分說明 TDH 和 TRH 是導(dǎo)致腸胃炎的主要致病因子[16,17]。

3 副溶血性弧菌污染食品情況及流行特點(diǎn)

全世界溫帶地區(qū)的沿海水域和海產(chǎn)品中經(jīng)常分離到副溶血性弧菌。在日本，因?yàn)榫用癯Ｊ秤蒙~，副溶血性弧菌是日本食源性疾病的主要致病菌。在美國(guó)，食用牡蠣而引發(fā)的腸胃炎與副溶血性弧菌有關(guān)[18,19]，一些食品如螃蟹、蝦和龍蝦在食用前已煮過，但一些處理不當(dāng)?shù)淖龇?，如冷凍不適當(dāng)、加熱不充分、交叉污染或者二次污染都可能是疾病爆發(fā)的原因。1997年的西海岸[20]、1998年的紐約和德克薩斯州[21]的副溶血性弧菌爆發(fā)就可能與生吃牡蠣有關(guān)。在西海岸分離到的臨床菌株是尿素酶陽性，同時(shí)含有tdh和trh基因，德克薩斯州和紐約分離到的菌株是尿素酶陰性，O3：K6血清型，僅含tdh基因[20,21]。O3：K6血清型菌株已成為流行菌株，也是亞洲最常見的菌株[22,23]。

我國(guó)不同地區(qū)有副溶血性弧菌監(jiān)測(cè)事件的相關(guān)報(bào)道。北京市海淀區(qū)2010至2019年共發(fā)生143起食源性疾病暴發(fā)，有66起檢出致病菌46.2%，共檢出272株致病菌，其中副溶血性弧菌占30.1%(82株)，占比最高，其次為變形桿菌占25.7%(70株)、金黃色葡萄球菌占19.9%(54株)[24]。江蘇省2010至2018 年在13個(gè)市不同場(chǎng)所采集8類淡水產(chǎn)品1 170份中，副溶血性弧菌檢出率 28.0%，污染水平為- (1.01±1.58) lg MPN/g，毒力基因攜帶率3.7%，淡水蝦類污染水平最高為-(0.44±1.68)lg MPN/g[25]。遼寧省2021年在420份市售水產(chǎn)品中，副溶血性弧菌檢出率為 29.29%(123/420)，海水產(chǎn)品檢出率為33.44%，海水貝類檢出率最高為49.51%， 其中淡水產(chǎn)品中河蟹檢出率較高為61.29%，123 株菌 tlh 基因均陽性， tdh 和 trh 基因均陰性[26]。副溶血性弧菌主要污染生食產(chǎn)品和鮮活產(chǎn)品， 檢出率分別為 8.9% (16/180)和 6.0% (18/299)[27]。廣州市2018年對(duì)水產(chǎn)品致病菌監(jiān)測(cè)中發(fā)現(xiàn)副溶血性弧菌檢出率最高，為47.22%(102/216)，102株副溶血性弧菌均表達(dá) tlh 基因，均不表達(dá) trh 基因，有2 株菌株表達(dá) tdh 基因[28]。廈門市 2012至2016 年在408份海產(chǎn)品監(jiān)測(cè)中檢出副溶血性弧菌165 份，檢出率40.44%，其中，貝類的檢出率最高，為66.06%，9月和10 月檢出率最高，為61.43%，農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)的檢出率最高，為 66.67%[29]。

4 副溶血性弧菌食物中毒事件

吳國(guó)杰等[30]對(duì)江門市一起導(dǎo)致47人病例的食物中毒事件進(jìn)行調(diào)查，通過細(xì)菌分離培養(yǎng)、檢驗(yàn)和脈沖場(chǎng)凝膠電泳分子分型技術(shù)對(duì)采集病例肛拭子和剩余食品等進(jìn)行檢測(cè)，罹患率42.7%，回顧性隊(duì)列研究發(fā)現(xiàn)危險(xiǎn)食物是燒鴨，從剩余食品和病例的肛拭子中檢出副溶血性弧菌，血清型為O3∶K6，PFGE分子分型顯示高度同源，綜合判定O3:K6血清型副溶血性弧菌引起的食物中毒，可能是副溶血性弧菌污染了燒鴨，食用前未徹底加熱。

2021年敖華英等[31]報(bào)道，陽江市G醫(yī)院和B醫(yī)院同一天分別收治6名和12名出現(xiàn)腹瀉、伴腹痛、嘔吐癥狀的旅行團(tuán)人員，對(duì)可疑餐次及可疑食物進(jìn)行病例對(duì)照研究,對(duì)病例樣本及食品、環(huán)境進(jìn)行常見食物中毒致病菌的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)，結(jié)果共發(fā)現(xiàn)24名病例,主要臨床癥狀為腹瀉(100.00%)、伴腹痛(91.67%)、嘔吐(33.33%)。病例對(duì)照研究發(fā)現(xiàn)涼拌海蜇是可疑食品。檢出副溶血性弧菌,血清型為O10∶K4，綜合判定涼拌海蜇可能受到副溶血性弧菌的污染,是導(dǎo)致食物中毒的原因。

曾凡夫等[32]報(bào)道一起導(dǎo)致90人中毒的建筑工地食物中毒事件,罹患率17.7%(90/509),臨床表現(xiàn)以腹瀉(95.4%)、腹痛(77.8%)和嘔吐(53.3%)為主,對(duì)病例樣本進(jìn)行檢測(cè)，副溶血性弧菌陽性率70.7%(65/92),血清型為O3∶K6,經(jīng)PFGE分析,9份病例肛拭子樣品為100.0%同源。

孫健等[33]報(bào)道調(diào)查S公司14名疑似食物中毒患者食物中毒事件的致病因子和原因, 結(jié)果顯示,流行病學(xué)曲線推斷此次事件中毒餐次是7月22日晚餐,回顧性隊(duì)列研究提示,燒鴨與患者發(fā)病有關(guān)(RR=5.06,95%CI∶1.33～19.26),在14名患者肛拭子、剩余食品燒鴨、腌制秋刀魚中均檢出同源性副溶血性弧菌(O3∶K6血清型)。綜合判定此次食物中毒致病因子是副溶血性弧菌,食堂從業(yè)人員違反食品安全操作規(guī)范,造成生熟食物交叉污染是此次食物中毒的主要原因。

孫曉巖等[34]報(bào)道101份醫(yī)院送檢的患者腹瀉便樣中，檢出副溶血性弧菌陽性28份，屬于含副溶血性弧菌特異基因的O1∶K56血清型，tdh顯示陽性，但trh呈陰性，顯示這些菌群可能表達(dá)耐熱直接溶血素，但不表達(dá)直接耐熱相關(guān)溶血素。

張晶等[35]報(bào)道2017年廣州市一起副溶血性弧菌食物中毒特征，采用血清型鑒定,藥敏實(shí)驗(yàn),毒力基因(tdh、trh、tlh)、toxRS/new基因、orf8基因的PCR檢測(cè), PFG)和MLS)進(jìn)行分析。14株副溶血性弧菌血清型鑒定為O8∶K21,藥敏試驗(yàn)顯示14株菌對(duì)氨芐西林、甲氧芐氨嘧啶耐藥,對(duì)頭孢曲松、環(huán)丙沙星、氯霉素、磺胺甲口惡唑/甲氧芐啶、磺胺復(fù)合物、阿米卡星、萘啶酸、鏈霉素、四環(huán)素、慶大霉素敏感。毒力基因全部為tdh+ tlh+ trh-,均攜帶toxRS/new和orf8基因。經(jīng)PFGE聚類分析,14株判斷為高度相關(guān)株。經(jīng)MLST分析,結(jié)果全部為ST479型。結(jié)論引起此次食物中毒的病原菌是副溶血性弧菌O8∶K21型,彼此具有共同的遺傳特征,攜帶大流行克隆株的標(biāo)志性基因,應(yīng)進(jìn)一步加強(qiáng)對(duì)此類菌株的監(jiān)測(cè)和控制。

2020年鐘延旭等[36]報(bào)道，2019年廣西W市W酒店發(fā)生一起聚集性食物中毒，累計(jì)報(bào)道食物中毒病例140例，中毒罹患率12.5%(140/1 116)，平均潛伏期12 h，主要癥狀為腹瀉100%(140/140)、腹痛94.3%(132/140)、嘔吐58.6%(82/140)、惡心55.7%(78/140)，從11名患者、6名從業(yè)人員(發(fā)病2名、為健康帶菌者4名)、1份剩余食物、2份廢棄原材料(扇貝殼和生蠔殼)中檢出副溶血性弧菌，綜合分析確定該事件為一起副溶血性弧菌引起的食物中毒事件，致病原因?yàn)樯旖徊嫖廴尽?/p>

郭凱純等[37]報(bào)道2018年10月廣州市一起由副溶血性弧菌引起的食物中毒事件，血清型均為O8：K21,藥敏分析對(duì)14種抗生素反應(yīng)大致相同，其中對(duì)氨芐西林100%耐藥。副溶血性弧菌有75種血清型與人類腹瀉有關(guān)，廣州地區(qū)腹瀉患者臨床分離株種，血清型O3:K6和O4：K8為優(yōu)勢(shì)性別，二者所占比超過所有血清型的九成，O8：K21鮮少出現(xiàn)在副溶血性弧菌引起的食物中毒相關(guān)論文中，研究表明獨(dú)立基因可通過水平轉(zhuǎn)移方式從不同屬的致病性弧菌轉(zhuǎn)移到無毒的副溶血性弧菌中。

王爾群等[38]報(bào)道采用GB 4789.7—2013《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)副溶血性弧菌檢驗(yàn)》、WS 271—2007《感染性腹瀉診斷標(biāo)準(zhǔn)》方法,對(duì)食物中毒的樣本(患者大便/肛拭29份,廚師肛拭5份,食品及環(huán)境樣本23份)進(jìn)行病原菌分離,對(duì)分離的病原菌進(jìn)行血清學(xué)分型鑒定,運(yùn)用熒光定量PCR進(jìn)行tdh、trh毒力基因檢測(cè),脈沖場(chǎng)凝膠電泳技術(shù)進(jìn)行同源性分析。結(jié)果從57份標(biāo)本中分離到29株副溶血性弧菌,27株血清型為O4:KUT型,2株副溶血性弧菌的血清型為O1:KUT。PFGE聚類分析顯示,指紋圖譜按100%相似度,可分為3種PFGE帶型(P1、P2、P3),P1和P2帶型之間相似性較強(qiáng),為94%～96%,P3與P1和P2帶型之間的相似性都較差,為<70%。毒力基因檢測(cè)結(jié)果為,P1和P2型(27株)tdh+/trh-,P3型tdh-/trh-,tdh攜帶率為93.10%。綜合判定此起食物中毒主要為O4群攜帶有tdh毒力基因的多種不同型別副溶血性弧菌引起,污染源主要來自魚。

覃芳葵等[39]報(bào)道簡(jiǎn)陽市某酒店發(fā)生一起食物中毒事件，搜索到病例74例，臨床癥狀以腹痛、腹瀉、惡心、嘔吐為主，發(fā)病潛伏期最小值7.5 h，最大值25.5 h，中位數(shù)14.5 h。3名病例肛拭子、留樣食品私房熏魚和涼拌豬耳朵共5件樣品PCR檢測(cè)到副溶血性弧菌言行，涼拌豬耳朵、荷蘭豆拌豆干、口口脆共3件樣品細(xì)菌培養(yǎng)副溶血性弧菌陽性，調(diào)查發(fā)現(xiàn)酒店未配備食品加工器具消毒設(shè)施、食品盛裝容器洗消不規(guī)范和熱菜間存在盛裝容器生熟交叉污染的問題，可能污染途徑為生熟交叉污染。

周萌等[40]報(bào)道北京海淀區(qū)一起副溶血性弧菌食物中毒流行病學(xué)調(diào)查，共搜索到29例病例，有共同進(jìn)餐史，臨床癥狀相似，以腹痛、腹瀉、惡心、嘔吐、發(fā)熱為主，在8份病例肛拭樣品、1份嘔吐物樣品、1份可以食品鹵制鴨腿樣品中檢出副溶血性弧菌。

雖然副溶血性弧菌主要存在于海產(chǎn)品中，但是直接導(dǎo)致副溶血性弧菌食物中毒的食品并非都是海產(chǎn)品，涼拌菜、熟肉制品也曾檢出副溶血性弧菌，肉禽食品、蔬菜和熟食制品等由于加工保存不當(dāng)受到污染后，細(xì)菌大量繁殖，食用后皆有可能引起食物中毒事件的發(fā)生。

5 副溶血性弧菌檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)

5.1 限量要求:副溶血性弧菌食物中毒的發(fā)生與攝入量有關(guān)，試驗(yàn)證明其感染量為105～106CFU[19]。在我國(guó)食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)體系中，GB 29221-2021《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)預(yù)包裝食品中致病菌限量》和GB 31607～2021《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)散裝即食食品中致病菌限量》規(guī)定了檢驗(yàn)副溶血性弧菌的產(chǎn)品種類、檢測(cè)方法、限量要求。GB 29221～2021規(guī)定了即食生制動(dòng)物性水產(chǎn)制品和即食水產(chǎn)調(diào)味品需檢測(cè)副溶血性弧菌，檢測(cè)方法為GB 4 789.7，限量均設(shè)定為“n=5，c=1，m=100 MPN/g， M=1 000 MPN/g”(n：同一批次產(chǎn)品應(yīng)采集的樣品件數(shù)，c：最大可允許超過m值的樣品數(shù)，m：微生物指標(biāo)可接受水平限量值，M微生物指標(biāo)的最高安全限量值)。GB 31607-2021規(guī)定部分或未經(jīng)熱處理的含動(dòng)物性散裝即食水產(chǎn)品需檢測(cè)副溶血性弧菌，檢測(cè)方法為GB 4789.7，限量為≤1 000 MPN/g(ml)。在日本，副溶血性弧菌在生食海產(chǎn)品的限量為104CFU/100 g。

5.2 檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)

5.2.1 食品安全監(jiān)督抽檢標(biāo)準(zhǔn):在我國(guó)食品安全監(jiān)督抽檢中，依據(jù)GB 4789.7-2013 《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)副溶血性弧菌檢驗(yàn)》對(duì)副溶血性弧菌進(jìn)行檢測(cè)。GB 4789.7-2013為傳統(tǒng)培養(yǎng)法，檢測(cè)步驟分為：樣品制備、增菌、分離、純培養(yǎng)、初步鑒定、確定鑒定、血清學(xué)試驗(yàn)(選做)、神奈川試驗(yàn)(選做)。其中增菌分為定性檢測(cè)和定量檢測(cè)兩種，定性檢測(cè)是將樣品接種到3%氯化鈉堿性蛋白胨水36℃培養(yǎng)8～18 h后，劃線TCBS或弧菌顯色培養(yǎng)基。定量檢測(cè)是采用MPN 9管法，將樣品接種到3%氯化鈉堿性蛋白胨水后，選擇3個(gè)適宜的連續(xù)稀釋度分別接種3%氯化鈉堿性蛋白胨水3管后，劃線TCBS或弧菌顯色培養(yǎng)基。兩種方法后續(xù)通過氧化酶、革蘭氏染色、3%氯化鈉三糖鐵瓊脂、嗜鹽性等試驗(yàn)進(jìn)行鑒定。GB 4789.7-2013傳統(tǒng)培養(yǎng)法，總檢測(cè)時(shí)間為48～120 h。

5.2.2 進(jìn)出口食品檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn):在我國(guó)進(jìn)出口食品檢測(cè)中，副溶血性弧菌檢測(cè)依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)有5個(gè)，均是采用不同于GB 4789.7-2013傳統(tǒng)培養(yǎng)法的分子生物學(xué)檢測(cè)方法，分別是：SN/T 1869-2007《食品中多種致病菌快速檢測(cè)方法 PCR法》、SN/T 2424-2010《進(jìn)出口食品中副溶血性弧菌快速及鑒定檢測(cè)方法實(shí)時(shí)熒光PCR方法》、SN/T 2754.5-2011《出口食品中致病菌環(huán)介導(dǎo)恒溫?cái)U(kuò)增(LAMP)檢測(cè)方法第5部分：副溶血性弧菌》、SN/T 4603-2016《出口食品及水體中產(chǎn)毒副溶血性弧菌常見致病基因檢測(cè)方法多重PCR及多重實(shí)時(shí)熒光PCR法》、SN/T 5364.1-2021《出口食品中致病菌檢測(cè)方法微滴式數(shù)字PCR法第1部分：副溶血性弧菌》。

其中，SN/T 1869-2007是采用普通PCR技術(shù)，通過擴(kuò)增450 bp的tlh靶基因，快速檢測(cè)副溶血性弧菌；SN/T 2424-2010是針對(duì)gyrase基因設(shè)計(jì)特異性引物和探針，采用全自動(dòng)熒光定量PCR儀或普通PCR儀合并微量熒光檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)；SN/T 2754.5-2011是根據(jù)特有靶序列tox S基因設(shè)計(jì)兩對(duì)特殊的內(nèi)、外引物，特異性識(shí)別靶序列上的6個(gè)獨(dú)立區(qū)域，利用Bst酶啟動(dòng)循環(huán)鏈置換反應(yīng)，在toxS基因序列啟動(dòng)互補(bǔ)鏈合成，從dNTP析出的焦磷酸根離子與反應(yīng)溶液中的Mg2+結(jié)合，產(chǎn)生副產(chǎn)物(焦磷酸鎂)形成乳白色沉淀，加入顯色劑，通過顏色變化觀察判定結(jié)果；SN/T 4603-2016則可以判定是否含有副溶血性弧菌及產(chǎn)毒副溶血性弧菌，第一法是通過同時(shí)檢測(cè)副溶血性弧菌gyrase、tdh和trh致病基因，根據(jù)擴(kuò)增條帶(gyrase 91 bp；tdh 269 bp；trh 458 bp)的有無判定，第二法是通過同時(shí)檢測(cè)tdh和trh基因，根據(jù)熒光通道出現(xiàn)的擴(kuò)增曲線和相應(yīng)的Ct值判定；SN/T 5364.1-2021是針對(duì)副溶血性弧菌β-內(nèi)酰胺酶編碼基因(blaCARB)保守序列設(shè)計(jì)引物探針，采用微滴式數(shù)字PCR進(jìn)行檢測(cè)，規(guī)定檢測(cè)限為～5 CFU/25 g(或～5 CFU/25 ml)，是首個(gè)設(shè)定檢出限的副溶血性弧菌檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)。

從進(jìn)出口食品5個(gè)檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)可以看出，對(duì)副溶血型弧菌檢測(cè)方法經(jīng)歷了由普通PCR發(fā)展到熒光PCR再到數(shù)字PCR，從僅檢測(cè)副溶血性弧菌到檢測(cè)致病性的副溶血性弧菌，再到定量檢出限的過程，相比較GB 4789.7-2013傳統(tǒng)培養(yǎng)檢測(cè)法，具有快速判定定陰性樣品及區(qū)分致病性和非致病性菌株的優(yōu)勢(shì)。

6 副溶血性弧菌食物中毒預(yù)防方法

國(guó)家食品安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估中心發(fā)布《不可忽視的食源性致病菌——副溶血性弧菌》提到預(yù)防食源性疾病，要做到世界衛(wèi)生組織推薦的食品安全5要點(diǎn)：在日常生活中要做到保持清潔；食物生熟分開切分開儲(chǔ)存；食物要燒熟煮透完全煮熟；食物要保存在安全的溫度下；確保水和食物原料安全。副溶血性弧菌存活能力強(qiáng)，在抹布和砧板上能生存1個(gè)月以上，預(yù)防副溶血性弧菌的關(guān)鍵措施是不生吃海產(chǎn)品，同時(shí)防止交叉污染。