邵占梅,仲繼冬,房玉明,馬永強(qiáng)*
(1.東北林業(yè)大學(xué) 林學(xué)院,黑龍江 哈爾濱 150040;2.哈爾濱秋林飲料科技股份有限公司,黑龍江 哈爾濱 150040;3.黑龍江省谷物食品與谷物資源綜合加工重點實驗室,黑龍江 哈爾濱 150076)
胃是重要的消化器官,承擔(dān)著人體消化、儲存和吸收各類營養(yǎng)物質(zhì)的功能[1]。長期情緒波動、不規(guī)律的生活作息以及不當(dāng)?shù)娘嬍沉?xí)慣都會破壞胃粘膜的結(jié)構(gòu),從而導(dǎo)致胃部病變,誘發(fā)胃潰瘍(gastric ulcer,GU)、胃部炎癥、急性胃炎等多種疾病[2],嚴(yán)重者甚至?xí)D(zhuǎn)變?yōu)槲赴?,威脅人體生命安全,因此保護(hù)胃粘膜結(jié)構(gòu)狀態(tài)對預(yù)防人體胃部疾病有著十分重要的意義。自由基的化學(xué)性質(zhì)十分活潑,有很強(qiáng)的氧化性,對人體細(xì)胞的細(xì)胞膜、線粒體膜造成傷害,并與膜上的不飽和脂肪酸反應(yīng),造成脂質(zhì)過氧化增強(qiáng),使機(jī)體內(nèi)產(chǎn)生更多自由基,這樣膜結(jié)構(gòu)完整性受到破壞,進(jìn)而使局部細(xì)胞死亡[3]。此外,自由基還會攻擊人體細(xì)胞的細(xì)胞核,破壞脫氧核糖核酸(deoxyribo nucleic acid,DNA),導(dǎo)致人體內(nèi)酵素?zé)o法修補(bǔ),產(chǎn)生細(xì)胞癌變。在產(chǎn)生眾多的脂質(zhì)過氧化物中,丙二醛(maleic dialdehyde,MDA)的毒性最大,它可以有效的反映機(jī)體過氧化的速率,間接反映局部組織和細(xì)胞受損傷程度[4]。超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)是一類人體必需的天然抗氧化劑,可以平衡機(jī)體的脂質(zhì)過氧化反應(yīng),有效保護(hù)胃粘膜結(jié)構(gòu),調(diào)節(jié)血管因子,保護(hù)胃部平緩消化刺激性食物,起到預(yù)防胃部疾病的作用[5]。
胃潰瘍是一種人體常見的消化類疾病,常伴隨著腹部脹痛、食欲不振、惡心、頭暈、嘔吐等癥狀,發(fā)病周期較長,是一種常見的慢性疾病[6]。隨著現(xiàn)代社會年輕人生活節(jié)奏的加快,胃潰瘍患病率也不斷上升,嚴(yán)重影響了人們的身體健康和生活工作,中醫(yī)學(xué)機(jī)理認(rèn)為,脾胃虛寒是引起胃潰瘍的病理基礎(chǔ),肝胃燥熱、胃郁內(nèi)熱、肝胃不和、胃部瘀血等臨床表征都是胃潰瘍的常見癥狀[7],因此建立脾胃虛寒的模型對研究胃潰瘍機(jī)理有著十分重要的意義。
格瓦斯是一種以面包發(fā)酵為主要手段的日常飲品,口感甘甜、爽口,富含鈣元素、維生素、多種氨基酸和酵母菌群、乳酸菌群等有益菌群,其作用是在發(fā)酵過程中可以有效延長產(chǎn)品保質(zhì)期,抑制其他有害微生物細(xì)菌的生長[8],長期飲用對人體有健脾、開胃,促進(jìn)腸道消化的功能,另外格瓦斯中酒精含量低,市售格瓦斯每瓶酒精含量只有0.2%~0.4%[9],適應(yīng)各類人群的日常需求,適當(dāng)?shù)呐淞蠎?yīng)用還可調(diào)制出不同口味的格瓦斯飲品,適宜的酸澀甜味,少量的二氧化碳中和形成了格瓦斯飲料獨有的風(fēng)味口感。本研究通過冰食醋法和醋酸涂抹法建立脾胃虛寒型胃潰瘍大鼠模型,經(jīng)過格瓦斯灌胃實驗,觀察給藥前后體質(zhì)量變化、攝食量變化、胃潰瘍指數(shù)、胃潰瘍大小、胃液pH值、胃部超氧化物歧化酶、丙二醛、血清一氧化氮的含量,研究格瓦斯飲料對于脾胃虛寒型胃潰瘍的緩解作用,為后續(xù)探討其作用機(jī)制提供科學(xué)依據(jù)。
1.1.1 動物
Wistar雄性大鼠60只:體質(zhì)量為(190±200)g,購于長春億斯實驗動物中心,質(zhì)量合格證序號202000034165,許可證號碼為SCXK(吉)-2018-0007。實驗前先適應(yīng)性飼養(yǎng)7 d,飼養(yǎng)于哈爾濱商業(yè)大學(xué)藥學(xué)院無特定病原體(specific pathogen free,SPF)級動物房,飼養(yǎng)條件為溫度22~25 ℃,相對濕度(65±5)%,12 h晝夜循環(huán),正常喂予普通飼料和純凈水。
1.1.2 試劑
格瓦斯、食醋、安胃瘍膠囊:市售;一氧化氮(NO)、超氧化物岐化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、胃泌素(gastrin,GAS)檢測盒:南京建成生物工程研究所;10%甲醛溶液:上海國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。
TDL80-2臺式離心機(jī):上海安亭科技儀器廠;SpectraMax 190全波長酶標(biāo)儀:美國Molecular Devices公司;TU-1900紫外可見分光光度計:上海元析儀器有限公司;PHSJ-4FpH計:上海雷磁儀器廠;HHS-ZK4恒溫水浴鍋:天津市泰斯特儀器有限公司。
1.3.1 脾胃虛寒大鼠模型的建立
采取冰食醋法[10]建立模型,取SPF級雄性Wistar大鼠50只,每日早上灌胃1次約4 ℃的食醋,灌胃量為10 mL/kg,下午灌胃豬油脂(脂肪含量≥98%,溫度30~33 ℃),連續(xù)灌胃10 d,正常喂食,造模期間監(jiān)測大鼠的攝食量和體質(zhì)量狀況,待大鼠出現(xiàn)進(jìn)食減少、疲倦少動、四肢溫度降低,體質(zhì)量明顯減輕、大便變稀的癥狀后即說明造模成功。
1.3.2 脾胃虛寒型胃潰瘍大鼠模型的建立
在成功建立脾胃虛寒大鼠模型的基礎(chǔ)上,采用醋酸涂抹[11]的方法建立胃潰瘍的模型,脾胃虛寒癥大鼠造模成功后禁食不禁水24 h,注入1.5 mL 2%的水合氯醛溶液麻醉大鼠,將大鼠的四肢固定于手術(shù)臺上,于腹部切開1~2 cm的切口,打開大鼠腹腔后,輕拉出胃部器官,用長度約為1.8 cm的小塑料管按在在胃部的前部的漿膜面上[12],力度不宜過重,防止胃部損傷出現(xiàn)出血現(xiàn)象,向小塑料管內(nèi)注入0.1~0.2 mL 4 ℃的冰醋酸約30 s,結(jié)束后用生理鹽水沖洗牽拉出的局部器官,包覆此過程出現(xiàn)的損傷部位,將胃部器官輕放回腹腔相應(yīng)部位,用消毒針線逐層縫合腹部切口,然后再向腹部切口損傷處注射0.1~0.2 mL的青霉素鈉注射液[13],用來防止大鼠的傷口術(shù)后感染,待大鼠麻醉狀態(tài)結(jié)束完全清醒后放回飼養(yǎng)箱中,正常給予飲食和水,術(shù)后當(dāng)日時時觀察大鼠活動狀態(tài),防止大鼠劇烈活動造成傷口破裂感染。次日開始恢復(fù)自由飲食飲水,手術(shù)恢復(fù)24 h后進(jìn)行分組及給藥灌胃。
1.3.3 大鼠分組及給藥方案
60只Wistar大鼠隨機(jī)分成6組,每組10只,空白組和模型組大鼠正常給予普通飼料和水,參照人體的等效劑量進(jìn)行各組給藥,安胃瘍陽性組大鼠每日灌胃一次,灌胃量為0.15 g/kg,高劑量格瓦斯組大鼠每日灌胃一次,灌胃劑量為16 g/kg(此劑量為人體正常等效劑量的2倍),格瓦斯中劑量組大鼠每日灌胃一次,灌胃劑量為8 g/kg(此劑量為人體正常的等效劑量),格瓦斯低劑量組大鼠每日灌胃一次,灌胃劑量為4 g/kg(此劑量為人體正常等效劑量的1/2),3 mL/d持續(xù)灌胃7 d,末次給藥后禁食8 h采用頸椎脫臼法處死大鼠。
1.3.4 攝食量測定
適應(yīng)性飼養(yǎng)期間每只大鼠禁食不禁水12 h后,按照分組轉(zhuǎn)移到單獨的鼠籠內(nèi)單獨飼養(yǎng),適應(yīng)30 min后,在特殊的容器中放入稱過質(zhì)量的鼠糧喂養(yǎng)鼠籠中的大鼠,2 h后拿出鼠糧再次稱質(zhì)量,兩次數(shù)據(jù)之差即為大鼠的攝食量(期間注意拿取鼠糧時殘渣的掉落)。同時,在脾胃虛寒型胃潰瘍大鼠造模成功后和灌胃相應(yīng)藥物后測量大鼠的攝食量,方法同上。
1.3.5 大鼠血清及部分器官樣本采集
末次給藥后,禁食不禁水8 h,注射5%水合氯醛麻醉大鼠,固定大鼠四肢于手術(shù)臺上,采用腹腔主動脈取血[14]的方法,打開大鼠腹腔,用采血針傾斜45°扎進(jìn)主動脈,取2~3 mL血液,3 000 r/min離心15 min,取上層血清備用,結(jié)扎賁門和幽門,沿胃部器官大彎處切開,用注射器吸出全部胃液,使用生理鹽水快速沖洗胃部殘留成分和血污,將取下的胃放置在白色濾紙上,觀察測量潰瘍的面積狀況。稱取約0.2 g的胃潰瘍組織部分,加4 ℃冰生理鹽水混合勻漿形成10%的胃潰瘍組織勻漿液,置于10 mL規(guī)格的EP管中,3 500 r/min離心15 min,取上清液[15],余下的潰瘍組織在手術(shù)后立即放入10%的甲醛組織固定液中,結(jié)束后將它們均放于-80 ℃的冰箱保存。
1.3.6 大鼠胃潰瘍面積、指數(shù)和胃液pH值測定
用游標(biāo)卡尺測量大鼠胃潰瘍部分的縱徑(Z1)和橫徑(D1),按公式(1)計算胃潰瘍面積。
式中:S為胃潰瘍面積,mm2;Z1為胃潰瘍縱向直徑,mm;D1為胃潰瘍橫向直徑,mm。
參照GUTH P H等[16]的標(biāo)準(zhǔn),以局限于胃部胃上皮的潰瘍、糜爛和出血灶等長度測量進(jìn)行積分累積,正常組織的記為0分,有部分斑點糜爛的記為1分,糜爛最大橫徑小于1 mm的記為2分,在1~2 mm之間的記為3分,在3~4 mm之間的記為4分,>4 mm的記為5分,各項分值相加總和為大鼠胃潰瘍面積指數(shù)結(jié)果,并用精密pH試紙測試抽出胃液的pH。
1.3.7 大鼠胃部組織SOD、MDA含量測定
根據(jù)試劑盒中說明書提供的方法操作,測定各組大鼠胃部組織超氧化物歧化酶活力值和丙二醛含量。
1.3.8 大鼠血清NO、GAS含量測定
根據(jù)試劑盒中說明書提供的方法操作,測定各組大鼠血清的一氧化氮和胃泌素含量
1.3.9 統(tǒng)計方法
數(shù)據(jù)采用SPSS 23.0軟件處理,所有指標(biāo)數(shù)據(jù)均使用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”的形式表示,對數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析進(jìn)行數(shù)據(jù)的差異性分析,當(dāng)P<0.05時數(shù)據(jù)具有顯著性差異,P<0.01時數(shù)據(jù)具有極顯著差異,并使用Origin 2018軟件作圖。
2.1.1 狀態(tài)變化
適應(yīng)性飼養(yǎng)期間大鼠活動迅速,體質(zhì)量增長較快,脾胃虛寒造模期間,除空白組外其余各組大鼠均有疲倦感,活動頻率降低,進(jìn)食量開始呈現(xiàn)下降趨勢,在造模第4天開始出現(xiàn)大便稀溏[17]的狀況,毛色暗淡無光澤。
脾胃虛寒型胃潰瘍造模手術(shù)結(jié)束后,各組大鼠恢復(fù)意識后,活動頻率和強(qiáng)度明顯降低,意識恢復(fù)緩慢,飲水量和進(jìn)食量逐漸降低,大便情況更加稀溏,恢復(fù)24 h后進(jìn)行給藥,給藥期間大鼠活動頻率和速度有明顯的加強(qiáng),食欲在給藥第2天有所恢復(fù),體質(zhì)量逐漸增加,中劑量和低劑量組大鼠的體質(zhì)量,食欲和大便情況均有改善,但沒有安胃瘍陽性給藥組和高劑量組大鼠情況改善明顯,模型組大鼠狀況持續(xù)走低,大鼠無明顯活動能力,腹部腫大,體質(zhì)量持續(xù)降低,身體時常呈現(xiàn)蜷縮狀[18],喜扎堆。
2.1.2 體質(zhì)量變化
造模前后及給藥后各組大鼠體質(zhì)量變化結(jié)果見圖1。由圖1可知,有的大鼠出現(xiàn)體質(zhì)量下降的趨勢,而空白組大鼠整體狀態(tài)良好,體質(zhì)量平緩上升,行動迅速,無疲倦感,大便呈現(xiàn)明顯的顆粒狀。造模成功后和空白組對比,各組大鼠體質(zhì)量增長呈現(xiàn)減緩趨勢,模型組大鼠體質(zhì)量呈現(xiàn)明顯下降趨勢,給藥后高、中、低劑量組大鼠體質(zhì)量均有增加,與空白組相比,模型組大鼠體質(zhì)量呈現(xiàn)明顯的下降趨勢(P<0.05);與模型組相比,高劑量組和安胃瘍陽性給藥組大鼠體質(zhì)量均有顯著增加,且差異具有一定的統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)果表明,安胃瘍藥物和格瓦斯飲料能有效改善脾胃虛寒型胃潰瘍所導(dǎo)致的體質(zhì)量下降的趨勢,且格瓦斯飲料緩解這一表征效果趨近于安胃瘍陽性藥物。
圖1 各組大鼠體質(zhì)量變化狀況Fig.1 Changes in body mass of rats in each group
各組大鼠不同時期攝食量變化結(jié)果見表1。由表1可知,造模后陽性組、模型組、中劑量組和低劑量組大鼠的攝食量均顯著低于空白組(P<0.05),模型組大鼠攝食量顯著低于陽性組(P<0.05),說明整體大鼠造模手術(shù)比較成功,除空白組外各組大鼠的攝食量均有所減少,灌胃后結(jié)果顯示,陽性組、高劑量、中劑量和低劑量組大鼠攝食量均顯著高于模型組(P<0.05),而模型組顯著低于陽性組大鼠(P<0.05),說明格瓦斯飲料和陽性藥物安胃瘍對于脾胃虛寒型胃潰瘍大鼠有一定的緩解作用,可以在一定程度上增加胃部組織已受損大鼠的進(jìn)食量。
表1 各組大鼠不同時期攝食量變化Table 1 Changes in food intake of rats in different periods in each group
各組大鼠胃潰瘍面積及指數(shù)變化結(jié)果見表2。由表2可知,潰瘍面積方面,與模型組相比,安胃瘍陽性組、高劑量組、中劑量組和低劑量組大鼠均有顯著性減?。≒<0.05),潰瘍指數(shù)方面,與模型組相比,安胃瘍陽性組和格瓦斯高劑量組大鼠的潰瘍面積極顯著減少(P<0.01),中劑量組和低劑量組大鼠有顯著性差異(P<0.05),這可能是由于格瓦斯飲料和安胃瘍刺激了大鼠的胃黏膜,使黏膜中的脂蛋白發(fā)揮保護(hù)作用,防止H+和Na+擴(kuò)散至胃內(nèi)部,保護(hù)了胃黏膜屏障不被破壞[19],由此說明陽性藥物安胃瘍和格瓦斯飲料能夠有效改善大鼠胃潰瘍狀況,且高劑量的格瓦斯對于緩解脾胃虛寒型胃潰瘍出血糜有著更好的效果。
表2 各組大鼠胃潰瘍面積及指數(shù)變化Table 2 Changes in gastric ulcer area and index of rats in each group
各組大鼠胃液pH值變化結(jié)果見表3。由表3可知,空白組、安胃瘍陽性組、高劑量組、中劑量組和低劑量組大鼠胃液pH均與模型組呈現(xiàn)顯著性差異(P<0.05),與空白組相比,模型組大鼠胃液pH值有明顯上升,說明大鼠胃上皮胃粘膜處有較大損傷,胃腺壁細(xì)胞破環(huán)嚴(yán)重,導(dǎo)致胃部不能正常分泌大量胃酸,和模型組相比,安胃瘍陽性組和格瓦斯給藥組大鼠胃液pH值均有所下降,說明胃粘膜結(jié)構(gòu)和胃腺壁細(xì)胞受到的損傷較小,實驗結(jié)果表明,陽性藥物和格瓦斯飲料對脾胃虛寒型胃潰瘍有較為明顯的改善作用,這可能是由于格瓦斯在一定程度上消解了胃部的蛋白酶,促進(jìn)了胃酸的分泌,可以在一定程度上有效修復(fù)胃粘膜結(jié)構(gòu)和胃腺細(xì)胞,促使大鼠胃部分泌大量胃酸[20]。
表3 各組大鼠胃液pH值Table 3 pH of gastric juice of rats in each group
各組大鼠胃部組織SOD含量及MDA含量見圖2。由圖2可知,與空白組相比,模型組和陽性給藥組大鼠胃組織SOD含量明顯降低(P<0.05),MDA含量顯著升高(P<0.05),與模型組相比,格瓦斯高劑量組大鼠胃部組織SOD含量有明顯的升高,MDA含量有明顯降低(P<0.05),與陽性組相比,高劑量組大鼠胃組織的SOD含量有顯著性差異(P<0.05),模型組大鼠胃組織SOD含量顯著降低(P<0.05),由結(jié)果可知,陽性藥物安胃瘍和格瓦斯飲料能有效增強(qiáng)大鼠胃部器官的超氧化物歧化酶活力,提升大鼠機(jī)體自主清除自由基的能力,提高抗氧化能力,丙二醛含量明顯下降可能是由于格瓦斯阻斷了機(jī)體中蛋白質(zhì)、多種酶等大分子的聚合,使體內(nèi)的脂肪發(fā)生一定程度的氧化反應(yīng)[21],說明安胃瘍和格瓦斯飲料能有效改善脾胃虛寒型胃潰瘍的癥狀。
圖2 各組大鼠胃部組織超氧化物歧化酶含量(A)及丙二醛含量(B)Fig.2 Superoxide dismutase content (A) and malondialdehyde content (B) in stomach tissue of rats in each group
各組大鼠血清NO含量測定結(jié)果見圖3。一氧化氮是一種底物為左旋精氨酸的神經(jīng)傳導(dǎo)遞質(zhì),在機(jī)體的催化作用下生成,能有效保護(hù)胃粘膜細(xì)胞結(jié)構(gòu),促進(jìn)胃壁細(xì)胞生長因子快速生長。由圖3可知,與空白組相比,模型組大鼠血清中的NO含量顯著降低(P<0.05),與模型組相比,高、中、低劑量組大鼠血清NO含量均有顯著性差異(P<0.05),與陽性給藥組相比,高劑量組大鼠血清NO含量也呈現(xiàn)顯著性差異(P<0.05),整體結(jié)果表明,三組格瓦斯飲料給藥組能有效提高大鼠機(jī)體內(nèi)NO含量,使NO發(fā)揮其保護(hù)生長因子的作用,舒展胃部血管,增加胃粘膜周圍的血流量,從而有效抑制脾胃虛寒型胃潰瘍、胃上皮糜爛和出血的現(xiàn)象[22],降低有害物質(zhì)對胃器官的損傷,保證胃粘膜的完整性。
圖3 各組大鼠血清一氧化氮含量Fig.3 Nitric oxide content in serum of rats in each group
各組大鼠血清中GAS含量見表4。由表4可知,模型組大鼠血清GAS含量顯著低于空白組大鼠(P<0.05),陽性組、高劑量、中劑量、低劑量大鼠血清GAS含量顯著高于模型組大鼠(P<0.05),說明陽性藥物安胃瘍和格瓦斯飲料能在一定程度上提高大鼠體內(nèi)GAS這種胃腸激素,這可能是與反饋作用有關(guān),安胃瘍和格瓦斯內(nèi)的功效成分刺激了大鼠的神經(jīng)系統(tǒng),刺激了胃平滑肌細(xì)胞的收縮反映,增加了胃部的消化運動,有效修復(fù)胃部損傷的黏膜組織[23]。
表4 各組大鼠血清中胃泌素含量Table 4 Gastrin content in serum of rats in each group
格瓦斯是一種經(jīng)過多種復(fù)合菌共同發(fā)酵之后形成的低酒精飲品,日常飲用能有效促進(jìn)人體消化,保護(hù)脾胃,消除疲勞感,還可以很好的促進(jìn)脾胃消化,有利于人體吸收各類營養(yǎng)物質(zhì)[24]。胃潰瘍作為21世紀(jì)以來人類慢性病的一大殺手,對人體的危害不言而喻,其發(fā)生的原因一般多是外部細(xì)菌大面積侵害,胃酸過少等原因,當(dāng)機(jī)體內(nèi)消化系統(tǒng)平衡被打破時,會極大程度的破壞體內(nèi)黏膜-黏液的保護(hù)屏障,造成胃部的病變[25],例如胃酸過多過少,胃腺壁細(xì)胞損傷,從而導(dǎo)致急性胃炎、胃潰瘍,甚至是胃癌等疾病的發(fā)生。此外,有關(guān)研究發(fā)現(xiàn),一些非甾體抗炎藥[26]對人體胃腸道有著嚴(yán)重的不良反應(yīng),具體表現(xiàn)為淤血、斑點、胃上皮糜爛出血等癥狀[27],目前臨床治療中一般以抑制胃酸膽汁過多分泌,清除體內(nèi)幽門螺旋桿菌[28]和保護(hù)胃部黏膜結(jié)構(gòu)為主,楊希良等[29]通過利用提取出的蛋黃油對大鼠胃潰瘍模型灌胃研究發(fā)現(xiàn)高濃度的蛋黃油對潰瘍面積有明顯的的減少,且大鼠腸胃便稀的情況也有逐漸改善。本研究參考人體等效劑量對各組脾胃虛寒型胃潰瘍大鼠進(jìn)行灌胃治療,結(jié)果存在一定的指導(dǎo)作用,但由于人體和動物體的差異性,格瓦斯飲料對人體胃潰瘍疾病的修復(fù)效果和機(jī)理仍有待進(jìn)一步探討。
本研究通過對Wistar大鼠進(jìn)行灌胃實驗,證明了格瓦斯對脾胃虛寒型胃潰瘍病癥的拮抗作用,實驗結(jié)果顯示,針對SOD、MDA和NO指標(biāo)來說,格瓦斯高劑量組與模型組相比有著顯著性差異(P<0.05),從胃潰瘍面積指數(shù)和胃液pH值兩個指標(biāo)來看,安胃瘍給藥組和格瓦斯給藥組與模型組大鼠相比有極顯著性差異(P<0.01),說明格瓦斯飲料可以在一定程度上修復(fù)被破壞的胃部組織,減少胃潰瘍的面積,抑制胃酸分泌過剩造成的惡心嘔吐等癥狀,此外,在給藥期間大鼠活動狀態(tài)較為良好,活動頻率增加,造模期間的蜷縮狀疲倦感逐漸消失,毛色由暗淡無光澤逐漸變?yōu)槿犴樄饬粒@一表征也可以說明長期飲用格瓦斯能有效緩解機(jī)體疲勞感,清除體內(nèi)過剩的自由基,從而有效改善脾胃虛寒型的胃潰瘍疾病,但其對機(jī)體胃部病變部分的作用機(jī)理仍有待進(jìn)一步的研究探討。