CD20、Ki-67 及P53 蛋白在彌漫大B 細(xì)胞淋巴瘤中的表達(dá)及其臨床意義

蔣磊 周穎 王銀花 許倩

近年來彌漫大B 細(xì)胞淋巴瘤治療取得了較大進(jìn)展，但仍有相當(dāng)多的患者治療反應(yīng)不敏感，治療后復(fù)發(fā)亦常有發(fā)生［1］。Ki-67、P53 均與彌漫大B 細(xì)胞淋巴瘤密切相關(guān)，而CD20 陰性彌漫大B 細(xì)胞淋巴瘤侵襲性較強(qiáng)且預(yù)后狀況較差［2-4］。由此可見，CD20、Ki-67 及P53 均可能與彌漫大B 細(xì)胞淋巴瘤病情和預(yù)后相關(guān)。聯(lián)合檢測(cè)多個(gè)基因蛋白表達(dá)可更全面準(zhǔn)確進(jìn)行預(yù)后判斷［5］。因此，本研究探討CD20、Ki-67 及P53 蛋白在彌漫大B 細(xì)胞淋巴瘤中的表達(dá)水平，并分析其對(duì)臨床病理特征及預(yù)后的判斷價(jià)值，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

分析2018 年3 月～2022 年3 月蘇州市第九人民醫(yī)院血液科收治的86 例彌漫大B 細(xì)胞淋巴瘤患者的臨床和病理學(xué)資料。其中男45 例，女41 例，平均年齡（53.68±9.85）歲，≥60 歲39 例，＜60 歲47 例，結(jié)外累及53 例，霍奇金淋巴瘤分期（staging of Hodgkin's lymphoma，Ann Arbor 分期）［6］為Ⅲ+Ⅳ分期患者55 例而Ⅰ+Ⅱ分期患者31 例，國(guó)際預(yù)后指數(shù)（international prognostic index，IPI 評(píng)分）［7］≥2 分39例而＜2 分47 例，東部腫瘤協(xié)作組體能狀態(tài)（Eastern Cooperative Oncology Group performance status，ECOG PS 評(píng)分）［8］≥2 分35 例而＜2 分51 例，漢斯（Hans）免疫分型為生發(fā)中心B 細(xì)胞型（Germinal center B cell，GCB）分型［9］30 例而ABC 分型56 例，骨髓浸潤(rùn)48 例。

納入標(biāo)準(zhǔn)：符合WHO（2016）關(guān)于淋巴組織腫瘤修訂版相關(guān)分類標(biāo)準(zhǔn)［10］，淋巴結(jié)活檢確診為彌漫大B 細(xì)胞淋巴瘤。均為成年患者。確診后生存期＞6 個(gè)月。檢查完善且資料齊全。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并壞死性淋巴炎、其他原發(fā)腫瘤疾病或轉(zhuǎn)移性腫瘤疾病、傳染性單核細(xì)胞增多癥、髓外白血病或全身重要臟器嚴(yán)重疾患者?；颊呔橥馇已芯拷?jīng)本院倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)。

1.2 研究方法

采用免疫組化法檢測(cè)腫瘤石蠟組織中CD20、Ki-67 及P53 蛋白表達(dá)。將石蠟組織切制成4～5 μm 厚連續(xù)切片，80℃烤箱烤片半小時(shí)，二甲苯脫蠟和常規(guī)梯度酒精水化，檸檬酸緩沖液煮沸修復(fù)抗原，磷酸鹽（PBS）緩沖液沖洗，3%過氧化氫阻斷內(nèi)源性過氧化物酶活性。向切片滴加一抗，在4℃恒溫箱中孵育過夜，PBS 緩沖液沖洗，滴加通用型免疫球蛋白G 抗體-辣根過氧化物酶多聚體，37℃恒溫箱中孵育15 min，PBS 緩沖液沖洗，行二氨基聯(lián)苯胺試劑染色、蘇木素輕度復(fù)染細(xì)胞核，PBS 緩沖液沖洗，梯度酒精脫水干燥，中性樹膠封片。陰性對(duì)照為采用PBS 代替一抗。

由2 名以上病理學(xué)專家確定免疫組化病理結(jié)果。當(dāng)腫瘤細(xì)胞內(nèi)有定位清晰的棕黃色或棕褐色顆粒時(shí)判斷為陽性，隨機(jī)選取10 個(gè)視野（200×）觀察，確定著色強(qiáng)度和陽性細(xì)胞數(shù)量占比，其中沒有著色0 分，淺黃色1 分，棕黃色2分，棕褐色3 分；陽性細(xì)胞數(shù)占比＜25%1 分，25%～50% 2 分，＞50% 3 分，取著色強(qiáng)度和陽性細(xì)胞數(shù)量占比分值相乘分值結(jié)果，分值在0～1 分陰性（-），2～4 分弱陽性（+），5～8 分中等陽性（++），9～12 分強(qiáng)陽性（+++），中等陽性和強(qiáng)陽性均計(jì)入陽性表達(dá)［11］。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 彌漫大B 細(xì)胞淋巴瘤組織CD20、Ki-67 及P53 蛋白表達(dá)水平分析

CD20 蛋白表達(dá)定位于細(xì)胞膜，Ki-67、P53 蛋白表達(dá)均定位于細(xì)胞核。86 例彌漫大B 細(xì)胞淋巴瘤患者腫瘤石蠟組織中CD20、Ki-67 及P53 蛋白陽性表達(dá)率分別為38.37%（33/86）、82.56%（71/86）和80.23%（69/86）。見圖1。

圖1 彌漫大B 細(xì)胞淋巴瘤組織CD20、Ki-67 及P53 蛋白表達(dá)免疫組化檢測(cè)結(jié)果（SP，×200）Figure 1 Immunohistochemical detection results of CD20，Ki-67 and P53 protein expression in diffuse large B-cell lymphoma tissue（SP，×200）

2.2 不同CD20、Ki-67 及P53 蛋白表達(dá)情況患者的臨床病理參數(shù)和預(yù)后參數(shù)比較

CD20、Ki-67 及P53 蛋白陽性和陰性表達(dá)患者的Ann ArborⅢ+Ⅳ分期患者比例、IPI 評(píng)分≥2 分患者比例、ECOG PS 評(píng)分≥2 分患者比例、Hans GCB分型患者比例、骨髓浸潤(rùn)發(fā)生率比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

表1 不同CD20、Ki-67 及P53 蛋白表達(dá)情況患者的臨床病理參數(shù)和預(yù)后參數(shù)比較［n（%）］Table 1 Comparison of clinicopathological parameters and prognostic parameters in patients with different CD20，Ki-67 and P53 protein expressions［n（%）］

2.3 彌漫大B 細(xì)胞淋巴瘤患者CD20、Ki-67 及P53 蛋白陽性表達(dá)狀況的危險(xiǎn)因素分析

彌漫大B 細(xì)胞淋巴瘤組織CD20、Ki-67 和P53蛋白表達(dá)均可影響其IPI 評(píng)分、ECOG PS 評(píng)分、Hans 分型、骨髓浸潤(rùn)狀況（P＜0.05）。見表2 和表3。

表2 變量賦值Table 2 Assignment of arguments

表3 彌漫大B 細(xì)胞淋巴瘤患者CD20、Ki-67 及P53 蛋白表達(dá)狀況的危險(xiǎn)因素分析Table 3 Analysis of risk factors for expression of CD20，Ki-67 and p53 protein of patients with diffuse large B-cell lymphoma

2.4 彌漫大B 細(xì)胞淋巴瘤組織CD20、Ki-67 及P53 蛋白表達(dá)情況對(duì)其臨床病理和預(yù)后狀況的判斷效能

彌漫大B 細(xì)胞淋巴瘤組織CD20、Ki-67 及P53蛋白表達(dá)情況對(duì)其IPI 評(píng)分、ECOG PS 評(píng)分、Hans分型、骨髓浸潤(rùn)等的判斷效能均良好，以三者聯(lián)合判斷效能最佳。見表4。

表4 彌漫大B 細(xì)胞淋巴瘤組織CD20、Ki-67 及P53 蛋白表達(dá)情況對(duì)其臨床病理和預(yù)后狀況的判斷效能Table 4 The efficacy of CD20，Ki-67 and P53 protein expression in diffuse large B-cell lymphoma tissue for evaluating its clinicopathological and prognostic status

3 討論

彌漫大B 細(xì)胞淋巴瘤約占非霍奇金淋巴瘤的32.5%，具有侵襲性強(qiáng)的特點(diǎn)，可侵犯患者全身多個(gè)部位，患者預(yù)后情況差［12］。對(duì)彌漫大B 細(xì)胞淋巴瘤進(jìn)行及時(shí)有效診治對(duì)改善其預(yù)后的重要意義，目前其治療以免疫化療為主，但有相當(dāng)一部分患者腫瘤治療困難且可出現(xiàn)疾病復(fù)發(fā)情況的發(fā)生［13］。因此，改善彌漫大B 細(xì)胞淋巴瘤療效和預(yù)后仍是目前需解決的重要醫(yī)療問題。彌漫大B 細(xì)胞淋巴瘤的發(fā)生發(fā)展涉及多種機(jī)制和相關(guān)基因蛋白的異常表達(dá)，目前已發(fā)現(xiàn)多種基因蛋白參與其中［14］。通過相關(guān)因子檢測(cè)早期確定腫瘤病情惡化或不良預(yù)后風(fēng)險(xiǎn)，可為其治療方案調(diào)控優(yōu)化和靶向治療提供參考。

Ki-67 是與多種腫瘤密切相關(guān)的核蛋白，可通過核糖體RNA 的轉(zhuǎn)錄影響細(xì)胞增殖活躍度，而張靜等［15］的研究免疫組化法檢測(cè)彌漫大B 細(xì)胞淋巴瘤患者癌組織和癌旁組織的Ki-67 蛋白的表達(dá)情況，結(jié)果表明其在彌漫大B 細(xì)胞淋巴瘤癌組織中異常高表達(dá)，且其癌組織中Ki-67 蛋白高表達(dá)甚至可作為患者不良預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。而本研究中彌漫大B 細(xì)胞淋巴瘤癌組織中的Ki-67 蛋白陽性表達(dá)率為82.56%，與張靜等［15］的研究中的90.14%差異不大，進(jìn)一步確定了Ki-67 蛋白表達(dá)在彌漫大B 細(xì)胞淋巴瘤中的高表達(dá)。本研究中，Ki-67蛋白陽性表達(dá)患者的Ann ArborⅢ+Ⅳ分期患者比例、IPI 評(píng)分≥2 分患者比例、ECOG PS 評(píng)分≥2 分患者比例、Hans GCB 分型患者比例、骨髓浸潤(rùn)發(fā)生率均高于其相應(yīng)蛋白陰性表達(dá)患者，彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤組織Ki-67 蛋白表達(dá)可影響其IPI 評(píng)分、ECOG PS 評(píng)分、Hans 分型、骨髓浸潤(rùn)狀況，而診斷性試驗(yàn)四格表分析肯定了彌漫大B 細(xì)胞淋巴瘤組織Ki-67 蛋白表達(dá)情況對(duì)其IPI 評(píng)分、ECOG PS 評(píng)分、Hans 分型、骨髓浸潤(rùn)等的判斷效能。

P53 基因調(diào)控細(xì)胞周期組織、衰老、凋亡等過程，且彌漫大B 細(xì)胞淋巴瘤中P53 蛋白陽性表達(dá)為其獨(dú)立預(yù)后因素，可作為其預(yù)后評(píng)估指標(biāo)［16］。本研究中彌漫大B 細(xì)胞淋巴瘤組織中P53 蛋白陽性表達(dá)率較高，且蛋白陽性表達(dá)和陰性患者的Ann ArborⅢ+Ⅳ分期患者比例、IPI 評(píng)分≥2 分患者比例、ECOG PS 評(píng)分≥2 分患者比例、Hans GCB 分型患者比例、骨髓浸潤(rùn)發(fā)生率有較大差異，彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤組織P53 蛋白表達(dá)可影響其IPI 評(píng)分、ECOG PS 評(píng)分、Hans 分型、骨髓浸潤(rùn)狀況且P53 蛋白表達(dá)對(duì)其IPI 評(píng)分、ECOG PS 評(píng)分、Hans 分型、骨髓浸潤(rùn)等具有較好的判斷效能。

CD20 陰性的彌漫大B 細(xì)胞淋巴瘤臨床較少見，但是CD20 陰性的彌漫大B 細(xì)胞淋巴瘤具有更強(qiáng)的腫瘤侵襲性，患者預(yù)后情況也更差［17］。本研究中，彌漫大B 細(xì)胞淋巴瘤組織CD20 陰性表達(dá)患者比例為38.37%，且相對(duì)于CD20 陽性患者，CD20陰性患者的Ann ArborⅢ+Ⅳ分期患者比例、IPI 評(píng)分≥2 分患者比例、ECOG PS 評(píng)分≥2 分患者比例、Hans GCB 分型患者比例、骨髓浸潤(rùn)發(fā)生率均更高，彌漫大B 細(xì)胞淋巴瘤組織CD20 蛋白表達(dá)可影響其IPI 評(píng)分、ECOG PS 評(píng)分、Hans 分型、骨髓浸潤(rùn)狀況，且對(duì)其IPI 評(píng)分、ECOG PS 評(píng)分、Hans 分型、骨髓浸潤(rùn)等的判斷效能均良好，CD20、Ki-67 及P53 蛋白表達(dá)三者聯(lián)合判斷彌漫大B 細(xì)胞淋巴瘤臨床病理和預(yù)后狀況的效能最佳，提示CD20、Ki-67 及P53 蛋白聯(lián)合檢測(cè)在彌漫大B 細(xì)胞淋巴瘤中具有更佳的應(yīng)用價(jià)值，可更好地指導(dǎo)彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤診治，從而改善療效和預(yù)后。

綜上所述，在彌漫大B 細(xì)胞淋巴瘤中Ki-67 及P53 蛋白陽性水平較高而CD20 蛋白陰性表達(dá)，三者與患者臨床病理和預(yù)后狀況均密切相關(guān)且聯(lián)合應(yīng)用可更好判斷其臨床病理和預(yù)后狀況，但本研究尚不能確定三者可作為彌漫大B 細(xì)胞淋巴瘤靶向干預(yù)基因，仍需更多的基因干預(yù)實(shí)驗(yàn)確定其可能性。