歐李增殖培養(yǎng)基優(yōu)化的研究

李月勝，陳申寬，張赭苒，牟玉杰，龐龍，孫秀殿

(1.扎蘭屯職業(yè)學院，內(nèi)蒙古扎蘭屯162650；2.呼倫貝爾科技特派員創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)協(xié)會， 內(nèi)蒙古海拉爾021000)

1 歐李組織培養(yǎng)研究概況

歐李[Cerasushumilis(Bge.) Sok.]。因果實含鈣高又稱高鈣果。薔薇科櫻屬灌木植物，高0.4～1.5 m。小枝灰褐色或棕褐色，被短柔毛。冬芽卵形，疏被短柔毛或幾無毛。葉片倒卵狀長橢圓形或倒卵狀披針形，長2.5～5 cm，寬1～2 cm，中部以上最寬，先端急尖或短漸尖，基部楔形，邊緣有單鋸齒或重鋸齒，上面深綠色，無毛，下面淺綠色，無毛或被稀疏短柔毛，側(cè)脈6～8對；葉柄長2～4 mm，無毛或被稀疏短柔毛；托葉線形，長5～6 mm，邊有腺體。花單生或2～3花簇生，花葉同開；花梗長5～10 mm，被稀疏短柔毛；萼筒長寬近相等，約3 mm，外面被稀疏柔毛，萼片三角卵圓形，先端急尖或圓鈍；花瓣白色或粉紅色，長圓形或倒卵形；雄蕊30～35枚；花柱與雄蕊近等長，無毛。核果成熟后近球形，紅色或紫紅色，直徑1.5～1.8 cm；核表面除背部兩側(cè)外無棱紋。花期4～5月，果期6～10月。

歐李具有特殊的抗旱本領(lǐng)，適合干旱地區(qū)種植。旱時能避旱，雨季能蓄積水。在干旱的春季，歐李不僅葉片含水量較高，而且保水力強。歐李葉片小而厚，雖然氣孔密度大，但氣孔小，水分散失的少。在干旱季節(jié)地上部生長速度減緩，土壤植株基部產(chǎn)生多量基生芽，這些芽不萌發(fā)，一旦遇到降雨時基生芽可形成地下莖在土壤中伸長，形成根狀莖或萌出地表形成新的植株。這種生理特點是歐李抗旱的內(nèi)在因素。

歐李常見的繁殖方法主要有播種、分株、扦插和嫁接，但是由于種子處理比較繁瑣，播種繁殖比較困難；分株繁殖系數(shù)又比較低，嫩枝扦插成活率也不高，所以利用組織培養(yǎng)技術(shù)可以快速提供大量苗木。

歐李組培苗繼代增殖的周期和增殖的倍數(shù)是工廠化生產(chǎn)的保證， 試驗以愈傷組織產(chǎn)生的叢生苗作為材料，通過基本培養(yǎng)基篩選、細胞分裂素篩選和生長素的篩選，提高增殖擴繁的速度，為今后歐李組培苗規(guī)?；鲋硵U繁培養(yǎng)提供現(xiàn)實依據(jù)。

2 材料和方法

2.1 材料

歐李增殖材料來自2018年3月份扎蘭屯職業(yè)學院組培室的無菌組培苗。

2.2 方法

2.2.1 基本培養(yǎng)基的選擇。從歐李組培增殖最常用的WPM、1/4MS及Read三種培養(yǎng)基中選取，以MS培養(yǎng)基為對照，激素均為1.0 mg/L ZT+0.5 mg/L NAA。試驗設4個處理，每個處理做30個樣本，3個重復，定期觀察記錄，30天后統(tǒng)計增殖周期和增殖倍數(shù)。

2.2.2 細胞分裂素的篩選。從初步篩選出的ZT、TDZ和6-BA中選擇?；九囵B(yǎng)基為Read+1.0 mg/L NAA，其因素水平表見表1。

表1 細胞分裂素的篩選因素水平表

其試驗方案的設計采用正交試驗設計法，選用三因素四水平正交表L16(43) ,見表2。

表2 細胞分裂素的篩選三因素四水平正交表 L16(43)

2.2.3 生長素的篩選。生長素類主要從最常用的NAA和IBA兩種中選出，其基本培養(yǎng)基采用Read+1.0 mg/L ZT因素水平表見3

表3 生長素的篩選因素水平表

2.2.4 培養(yǎng)條件及數(shù)據(jù)分析處理。以上各階段都是在23～27 ℃，光照強度2000～3000 lx，光照時間12 h/d，相對濕度60%～80%條件下培養(yǎng)，每組實驗的每個處理做30個樣本，3個重復，定期觀察、記錄 ，30天后統(tǒng)計誘導數(shù)據(jù)和誘導率。試驗中培養(yǎng)基配方方案均采用正交設計，數(shù)據(jù)采用SPSS軟件分析。

3 結(jié)果與分析

3.1 基本培養(yǎng)基選擇

經(jīng)過30天的培養(yǎng)統(tǒng)計歐李叢生芽增殖情況見表4。

表4 基本培養(yǎng)基選擇歐李叢生芽增殖倍數(shù)統(tǒng)計表

從表4可知增殖倍數(shù)從大到小的順序是Read,1/4MS、WPM、MS，其增殖倍數(shù)依次為3.3、3.2、2.7、2.1.由此可見Read和1/4MS培養(yǎng)基更適合歐李叢生芽的增殖培養(yǎng)，WPM和MS培養(yǎng)基增殖倍數(shù)也達到2以上，也可以用于叢生芽的增殖培養(yǎng)。

3.2 細胞分裂素選擇

經(jīng)過30天的培養(yǎng)統(tǒng)計歐李叢生芽增殖情況見表5

表5 歐李增殖細胞分裂素篩選增殖倍數(shù)統(tǒng)計表

由表5可知增殖倍數(shù)最高的是處理9，及培養(yǎng)基1/4MS+0.5 mg/L ZT+0 mg/L TDZ+2.5 6-BA+1.0 mg/L NAA,增殖倍數(shù)為2.9，其次為處理6、處理11和處理5，其增殖倍數(shù)都在2.5以上，他們皆可作為歐李增殖用的培養(yǎng)基。其他處理增殖倍數(shù)都在2.5以下，不建議作為增殖培養(yǎng)基。

3.3 生長素的選擇

生長素的篩選結(jié)果見表6

表6 歐李增殖生長素篩選增殖倍數(shù)統(tǒng)計表

由表6可見增殖倍數(shù)由高到低依

次為處理3、處理1、處理4、處理5和處理2， 增殖倍數(shù)分別為2.5、2.3、2.2、2.0、1.7，所以處理3最適合歐李的增殖培養(yǎng)，處理3的培養(yǎng)基為1/4MS+1.0 mg/L ZT+0.4 mg/L NAA+0 mg/L IBA。由此可見生長素NAA比IBA更適合作為歐李增殖用的激素。

4 分析和討論

在基本培養(yǎng)基篩選中，適合歐李增殖最佳培養(yǎng)基是Read和1/4MS培養(yǎng)基。

在細胞分裂素篩選中，適合歐李增殖培養(yǎng)的激素是ZT,ZT的使用濃度是0.5～1 mg/L 。

生長素的選擇中NAA比IBA更適合作為歐李增殖用的激素，0.4～1 mg/L NAA。

5 結(jié)論

綜上所述，歐李叢生芽增殖的最適基本培養(yǎng)基為Read培養(yǎng)基。最適細胞分裂素為ZT，使用濃度為1 mg/L 。最適生長素為NAA，使用濃度為0.5 mg/L。從而可知歐李叢生芽增殖培養(yǎng)的最適培養(yǎng)基是Read+1 mg/L ZT+0.5 mg/L NAA。