青貯飼料對(duì)波麻雜交羊血清指標(biāo)和 背最長(zhǎng)肌脂肪酸組成的影響

索效軍，張 年

(1.湖北省農(nóng)業(yè)科學(xué)院 畜牧獸醫(yī)研究所，湖北 武漢 430064；2.動(dòng)物胚胎工程及分子育種湖北省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，湖北 武漢 430064)

脂肪酸組成是衡量肉類營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和風(fēng)味的重要指標(biāo)，受年齡、性別、品種和飼養(yǎng)管理等多種因素的影響，與人體健康息息相關(guān)，羊肉脂肪酸組成已成為研究熱點(diǎn)。飼糧類型的變化可引起血液內(nèi)營(yíng)養(yǎng)代謝物質(zhì)的變化。因此，研究飼糧對(duì)肉羊血清指標(biāo)和肌肉脂肪酸組成的影響具有十分重要的意義。波麻雜交羊是以波爾山羊?yàn)楦副荆槌呛谏窖驗(yàn)槟副?，采用?dǎo)入雜交方法，歷經(jīng)10余年培育的一個(gè)“黑頭白身”新類群，主要飼養(yǎng)于湖北省西北部低丘崗地、江漢平原地區(qū)，以舍飼為主，具有耐粗飼、耐濕熱、性早熟等優(yōu)點(diǎn)。由于波麻雜交羊尚未大面積推廣，飼養(yǎng)范圍較小，基礎(chǔ)性資料、技術(shù)研究及產(chǎn)業(yè)化開發(fā)利用不足，尚未形成一定的生產(chǎn)規(guī)模，關(guān)于青貯飼料對(duì)肉羊血清指標(biāo)和肌肉脂肪酸組成影響的報(bào)道較少。鑒于此，本試驗(yàn)旨在研究飼糧中添加不同青貯料對(duì)波麻雜交羊血清指標(biāo)、背最長(zhǎng)肌脂肪酸組成的影響，為波麻雜交羊肉品質(zhì)的提高提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

花生蔓于2019年8月10日風(fēng)干后，粉碎至2～3 cm，直接使用；非全株青貯玉米是將收獲籽粒后的玉米秸稈切短、裝填、鎮(zhèn)壓而制成；全株青貯玉米是將乳熟后期至蠟熟前期的整株玉米收獲(包括果穗在內(nèi)的地上全部綠色植株，含水量為55%～70%)，經(jīng)切短、裝填、鎮(zhèn)壓而制成；飼料桑(L.)，在高為1.2 m左右時(shí)，收獲第2茬，使用揉絲機(jī)處理后，按照全株玉米45%、桑枝45%、麩皮10%進(jìn)行桑枝+全株玉米混合青貯?；ㄉ⒎侨昵噘A玉米、全株青貯玉米、桑枝+全株玉米混合青貯均為荊門景陽畜禽有限公司自種加工。營(yíng)養(yǎng)成分詳見表1。

表1 青貯料營(yíng)養(yǎng)成分(風(fēng)干基礎(chǔ))Table 1 Nutritional ingredient of silage(air-dry basis) %

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

本試驗(yàn)于2019年10月12日至12月18日在荊門某畜禽有限公司的種羊場(chǎng)進(jìn)行，試驗(yàn)期67 d，其中預(yù)試期7 d，正式期60 d。選用體重為(35.3±1.5)kg的10月齡健康波麻雜交羊48只，公母各半，隨機(jī)分為4組，Ⅰ組為對(duì)照組，無添加，Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ組為試驗(yàn)組，分別添加非全株青貯玉米、全株青貯玉米、桑枝+全株玉米混合青貯。試驗(yàn)采用全混合飼糧，以等能等氮形式設(shè)計(jì)配方。日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平詳見表2。

表2 飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))Table 2 Compositions and nutritional levels of diets(air-dry basis)

1.3 飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)羊?yàn)樯谑斤曫B(yǎng)，每天07:30、18:00飼喂2次，飼喂量按實(shí)際需要量的1.1倍供給，保證料槽有余料，自由采食、自由飲水，每次飼喂前清理掉前一次的剩料，保證料槽的清潔衛(wèi)生。

1.4 樣品采集

試驗(yàn)組停止飼喂飼料后，每組隨機(jī)選取8只羊，頸靜脈抽血10 mL，在3 000 r·min的條件下離心15 min，血清分離后，-20 ℃冰箱保存，用于血清指標(biāo)測(cè)定。按照國(guó)家實(shí)驗(yàn)動(dòng)物處理飼喂準(zhǔn)則屠宰(宰前24 h禁食，2 h禁水)，迅速摘取第10～12胸椎處背最長(zhǎng)肌，去除筋膜，用錫紙包裹后，立即放入液氮凍存，運(yùn)輸至實(shí)驗(yàn)室后-80 ℃保存?zhèn)溆茫糜谥舅岷繙y(cè)定。

1.5 指標(biāo)測(cè)定

1.5.1 飼料常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分測(cè)定 參照《飼料中中性洗滌纖維的測(cè)定》(GB/T 20806-2006)、《飼料中酸性洗滌纖維的測(cè)定》(NY/T 1459-2007)、《飼料中粗蛋白的測(cè)定》(GB/T 6432-2018)，《飼料中鈣的測(cè)定》(GB/T 6436-2002)、《飼料中總磷的測(cè)定》(GB/T 6437-2002)、《動(dòng)物性蛋白質(zhì)飼料胃蛋白酶消化率的測(cè)定》(GB/T 17811-2008)方法，進(jìn)行飼料中性洗滌纖維、酸性洗滌纖維、粗蛋白、鈣、磷、胃蛋白酶消化率的測(cè)定。

1.5.2 血清生化指標(biāo)測(cè)定 抗氧化指標(biāo)包括總抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(T-SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)活性，丙二醛(MDA)含量；免疫指標(biāo)包括免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白M(IgM)、腫瘤壞死因子(TNFα)等，以上指標(biāo)均采用武漢三倍體生物有限公司的試劑盒測(cè)定，測(cè)定方法嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行。

1.5.3 背最長(zhǎng)肌脂肪酸組成測(cè)定 取背最長(zhǎng)肌組織樣品，修剪去筋膜和脂肪組織，手工切成小肉丁，加入液氮進(jìn)行速凍。樣品的預(yù)處理：稱取樣品100 mg于2 mL研磨管中，加入一個(gè)小鋼珠，再加入1 mL氯仿:甲醇(V/V=1:1)，置于冷凍研磨儀中研磨3 min；低溫超聲15 min，-20 ℃靜置15 min。4 ℃，6 000 r·min離心10 min，吸取上清液到5 mL EP管中；再加入1 mL二氯甲烷到樣本中，重復(fù)上述步驟進(jìn)行兩次萃?。坏?dú)獯蹈刹⒓尤? mL 0.5 mol·L氫氧化鈉-甲醇溶液，渦旋30 s，60 ℃水浴0.5 h；水浴冷卻后，加入1 mL正己烷，渦旋30 s。再加入1 mL飽和氫氧化鈉水溶液，渦旋30 s，4 ℃，6 000 r·min離心10 min，取上層(正己烷層)溶液到1.5 mL離心管中；氮?dú)獯蹈桑尤?00 μL正己烷，渦旋30 s復(fù)溶。4 ℃，6 000 r·min離心5 min，取上清溶液到進(jìn)樣小瓶，進(jìn)GC-MS檢測(cè)。色譜條件：CP-SIL 88毛細(xì)管柱(100 m，0.25 mm，0.25 μm，Agilent J&W Scientific，F(xiàn)olsom，CA，USA)，載氣為高純氦氣(純度不小于99.999%)，流速1.0 mL·min，進(jìn)樣口的溫度為260 ℃。進(jìn)樣量1 μL，分流進(jìn)樣，分流比10:1。程序升溫：柱溫箱的初始溫度為60 ℃，以20 ℃·min程序升溫至110 ℃，4 ℃·min升溫至230 ℃保持16 min，后運(yùn)行235 ℃保持2 min。質(zhì)譜條件：電子轟擊離子源(EI)，離子源溫度230 ℃，四級(jí)桿溫度150 ℃，傳輸線溫度235 ℃，電子能量70 eV。掃描方式為選擇離子掃描(SIM)模式。

1.6 統(tǒng)計(jì)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)經(jīng)Excel 2019簡(jiǎn)單分析后，采用SPSS 23.0中ANOVA過程進(jìn)行單因素方差分析，使用Duncan's法進(jìn)行多重比較，<0.05表示組間差異顯著，<0.01表示組間差異極顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 添加不同青貯料對(duì)肉羊血清生化指標(biāo)的影響

由表3可知，與對(duì)照組相比，三個(gè)試驗(yàn)組背最長(zhǎng)肌T-AOC活性顯著增加(<0.05)，Ⅲ和Ⅳ組T-SOD、GSH-Px活性極顯著增加(<0.01)；與對(duì)照組相比，三個(gè)試驗(yàn)組MDA含量均降低，其中Ⅲ和Ⅳ組MDA含量極顯著低于對(duì)照組(<0.01)；三個(gè)試驗(yàn)組IgA、IgG、IgM、TNFα含量較對(duì)照組均有所增加，其中Ⅲ和Ⅳ組各指標(biāo)極顯著高于對(duì)照組(<0.01)，說明飼糧中添加青貯料對(duì)肉羊血清生化指標(biāo)含量產(chǎn)生了一定影響。

表3 添加不同青貯料對(duì)肉羊血清生化指標(biāo)的影響(n=8)Table 3 Effect of different silage on serum biochemical indexes of goats(n=8)

2.2 添加不同青貯料對(duì)背最長(zhǎng)肌脂肪酸含量的影響

由表4可知，各組共檢測(cè)出12種飽和脂肪酸(SFA)，其中棕櫚酸(C16:0)和硬脂酸(C18:0)含量較高，其余種類含量較少，Ⅰ組棕櫚酸含量顯著高于試驗(yàn)組(<0.05)；共檢測(cè)出20種不飽和脂肪酸(UFA)，其中油酸(C18:1n9c)含量最高，Ⅲ、Ⅳ組與Ⅰ組差異顯著(<0.05)。Ⅳ組SFA占總脂肪酸比例最低，UFA占總脂肪酸比例最高，Ⅳ組的SFA、UFA占總脂肪酸比例與Ⅰ組差異顯著(<0.01)；Ⅲ和Ⅳ組的n-6/n-3含量顯著低于Ⅰ和Ⅱ組(<0.05)，說明飼糧中添加青貯料對(duì)肉羊脂肪酸含量產(chǎn)生了一定影響。

表4 添加不同青貯料對(duì)肉羊背最長(zhǎng)肌脂肪酸組成的影響(n=8)Table 4 Effect of different silage on fatty acid composition of longissimus dorsi muscle of goats (n=8)

3 討 論

3.1 添加不同青貯料對(duì)肉羊血清生化指標(biāo)的影響

李偉玲采用發(fā)酵桑葉粉飼喂蒙古羯羊，結(jié)果發(fā)現(xiàn)血清T-AOC和T-SOD活性升高，MDA活性降低；Cheong等等研究發(fā)現(xiàn)，在韓牛的全混合日糧中添加10%青貯桑葉可提高T-SOD、GSH-Px等抗氧化物酶的活性；劉華等研究表明，在飼糧添加24.15%花生蔓+27.55%全株玉米青貯能夠提高肉牛抗氧化和抗應(yīng)激能力。與上述研究結(jié)果類似，本研究發(fā)現(xiàn)，各試驗(yàn)組波麻雜交羊T-AOC活性較Ⅰ組顯著增加，T-SOD、GSH-Px活性較Ⅰ組極顯著增加，而MDA活性均降低，其中Ⅲ和Ⅳ組MDA活性極顯著低于Ⅰ組，Ⅳ組抗氧化相關(guān)指標(biāo)與Ⅰ組差值最大，這提示波麻雜交羊血清抗氧化能力跟飼糧類型有關(guān)，可能由于青貯飼料中的黃酮類化合物、T-SOD等物質(zhì)所致，而黃酮類化合物具有抗氧化作用，T-SOD則能夠清除自由基。張霞等研究發(fā)現(xiàn)，杜泊羊和小尾寒羊飼喂玉米青貯后血清T-AOC和T-SOD活性無明顯變化，與本試驗(yàn)存在一定差異，可能是由于肉羊品種及飼料成分差異較大所致，仍有待作進(jìn)一步研究。

李偉玲研究發(fā)現(xiàn)，飼喂添加桑葉可以提高肉羊機(jī)體的免疫能力。任偉忠等采用全株玉米青貯飼喂干奶前期奶牛，結(jié)果發(fā)現(xiàn)IgA、IgG和IgM均增高；在本試驗(yàn)中，添加青貯料試驗(yàn)組的血清IgA、IgG、IgM、TNFα含量與Ⅰ組相比有不同程度增多，Ⅳ組的IgA、IgG、IgM、TNFα含量顯著高于Ⅰ組，與上述研究結(jié)果一致，說明在肉羊飼糧中添加桑葉和全株玉米青貯料能夠使肉羊血清中的免疫球蛋白含量增多，有利于增強(qiáng)機(jī)體免疫能力，促進(jìn)生長(zhǎng)發(fā)育。

3.2 不同青貯料對(duì)背最長(zhǎng)肌脂肪酸組成的影響

索朗達(dá)等研究表明，飼糧類型可顯著影響肌肉脂肪酸含量，可通過調(diào)整飼糧結(jié)構(gòu)來調(diào)控羊肉品質(zhì)。侯川川等研究發(fā)現(xiàn)，湖羊飼喂全混合日糧顯著降低了SFA、增加了UFA在總脂肪酸中的比例，且可改善羊肉品質(zhì)。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，試驗(yàn)組背最長(zhǎng)肌SFA在總脂肪酸中所占比例顯著降低，UFA在總脂肪酸中所占比例顯著增加，主要是SFA中的棕櫚酸比例下降，UFA中的油酸比例升高，原因可能是添加青貯料后飼糧營(yíng)養(yǎng)特性發(fā)生改變，瘤胃微生物通過氫化作用合成了部分脂肪酸，提高了瘤胃微生物活性，瘤胃微生物對(duì)飼糧UFA氫化強(qiáng)度隨著青貯料的加入而增加，可見青貯飼料可顯著改善羊肉脂肪酸組成，提高肉品質(zhì)。

張秋旭等研究表明，可通過動(dòng)物飼糧的調(diào)控來提高反芻動(dòng)物肌肉脂肪酸中n-3多不飽和脂肪酸的含量。本研究結(jié)果表明，與Ⅰ組相比，試驗(yàn)組波麻雜交羊背最長(zhǎng)肌n-3多不飽和脂肪酸含量增加，n-6脂肪酸含量降低，n-6/n-3的比值降低，說明添加全株青貯玉米和青貯混合桑改善了羊肉脂肪酸的構(gòu)成，這可能是由于桑枝+全株青貯玉米混合青貯飼料中含有的活性成分具有抗菌作用，影響了反芻動(dòng)物瘤胃微生物對(duì)不飽和脂肪酸的生物氫化作用，也說明波麻雜交羊?qū)︼暳现衝-3多不飽和脂肪酸有著良好的吸收能力，添加青貯料顯著提高了背最長(zhǎng)肌中n-3多不飽和脂肪酸含量，降低了n-6/n-3的比值，這與樊懿萱等的結(jié)果相一致。綜合分析，Ⅳ組波麻雜交羊背最長(zhǎng)肌中n-6/n-3比值更低，更符合人類健康的需求。

4 結(jié) 論

在本試驗(yàn)條件下，飼喂添加青貯飼料的飼糧可提高肉羊的免疫和抗氧化能力，降低肉羊肌肉SFA含量和n-6/n-3的比值，可改善羊肉脂肪酸的構(gòu)成，在3個(gè)青貯料添加組中，桑枝+全株玉米混合青貯組(Ⅳ組)的效果最顯著。