銀杏葉荷葉總黃酮的提取及保健飲料的研制*

李玲玲

(重慶工貿(mào)職業(yè)技術(shù)學(xué)院健康學(xué)院，408000，重慶市)

0 引 言

荷葉具有特殊的藥理保健功效，被衛(wèi)生部列為藥食兩用原料[1].對荷葉有效成分的檢測、分離純化、藥理功能等的研究受到廣泛關(guān)注[2-4].荷葉是傳統(tǒng)的降暑祛火飲品[5]，然而目前僅有極少部分的荷葉資源被用于醫(yī)療、食品及保健等行業(yè)，因此很有必要加強(qiáng)荷葉相關(guān)產(chǎn)品的開發(fā).

銀杏葉為銀杏科銀杏屬植物銀杏的干燥葉，具有活血化瘀、通絡(luò)止痛、斂肺平喘、調(diào)血脂的功效.銀杏葉的生物活性成分復(fù)雜，其中包含銀杏黃酮、銀杏內(nèi)酯、銀杏酸和聚異戊烯醇等[6].黃酮類化合物可以清除體內(nèi)的自由基，調(diào)節(jié)腸胃，有延緩衰老、養(yǎng)生保健的效果[7].

目前已有將中藥材加入飲料增加功能性的研究報(bào)道[8,9].荷葉和銀杏葉同時(shí)飲用時(shí)有清熱去火、通絡(luò)止痛、斂肺平喘、調(diào)血脂等作用.因此本研究擬采用銀杏葉和荷葉為原料制備復(fù)合飲料，為黃酮類保健飲料的開發(fā)提供參考.

1 材料與方法

1.1 材料

銀杏葉、荷葉：重慶衡生中藥制藥有限公司；白砂糖、檸檬酸為食品級，市售；硝酸鋁、氫氧化鈉、甲醇均為分析純；蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品：中國食品藥品檢定研究院.

1.2 儀器與設(shè)備

HH-2型電熱恒溫水浴鍋(鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司)；SF320型粉碎機(jī)(浙江永康市素鋒工貿(mào)有限公司)；ZA220R4型分析天平(上海越平科學(xué)儀器有限公司)；T6紫外分光光度計(jì)(屹譜儀器制造(上海)有限公司)；SHB-DIII型循環(huán)水式真空泵(上海豫康科教儀器設(shè)備有限公司)；LDZX-75KBS型高壓滅菌鍋(上海申安醫(yī)療器械廠)；SHP-250型生化培養(yǎng)箱(上海三發(fā)科學(xué)實(shí)驗(yàn)有限公司)

1.3 方法

1.3.1 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

參照文獻(xiàn)[10]的方法繪制蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線.

蘆丁對照品溶液的制備：稱取0.0052 g蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品，加少量甲醇溶解，并用甲醇定容至25 mL，搖勻后靜置，配成對照品溶液(蘆丁濃度 0.208 mg/mL).

取對照品溶液0 mL、1 mL、2 mL、3 mL、4 mL、5 mL、6 mL分別于25 mL比色管中，加蒸餾水6 mL，加5%亞硝酸鈉溶液1 mL，混勻，放置6 min；然后加10%硝酸鋁溶液1 mL，混勻，放置6 min；最后加1 mol/L氫氧化鈉溶液10 mL，用甲醇定容至25 mL，混勻，放置15 min.在波長506 nm處測定吸光度值.以蘆丁濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，繪制蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線圖，得出回歸方程.

1.3.2 銀杏葉、荷葉總黃酮最佳浸提工藝的確定

將干燥的銀杏葉和荷葉用粉碎機(jī)粉碎，分別過80目篩，收集細(xì)粉.銀杏葉和荷葉細(xì)粉分別與蒸餾水按照1∶20混合，放入水浴鍋中恒溫浸提一段時(shí)間后，真空抽濾泵抽濾，濾液作為銀杏葉浸提液和荷葉浸提液.

分別將1 mL銀杏葉浸提液和荷葉浸提液置于25 mL比色管中，按照1.3.1的方法測定銀杏葉和荷葉浸提液的吸光度，根據(jù)回歸方程計(jì)算出總黃酮含量C，代入下面的公式計(jì)算銀杏葉浸提液和荷葉浸提液總黃酮含量R

(1)

式中，C為由回歸方程計(jì)算出的總黃酮濃度；V1為比色管的體積(25 mL)，mL；V2為測定吸光度時(shí)吸取的浸提液體積(1 mL)，mL,R的單位是mg/mL.

進(jìn)一步計(jì)算銀杏葉粉和荷葉粉總黃酮的提取率η

(2)

式中，R為銀杏葉浸提液或荷葉浸提液的總黃酮含量，單位mg/mL；V3為浸提后銀杏葉或荷葉濾液的總體積，單位mL；m為銀杏葉粉或荷葉粉的質(zhì)量，單位g.

根據(jù)總黃酮提取率確定銀杏葉和荷葉的最佳浸提工藝.

1.3.3 調(diào)配

將白砂糖、檸檬酸加熱溶解，與荷葉浸提液、銀杏浸提液按照一定比例混合均勻，用蒸餾水定容至100 mL.

將配制好的飲料置于滅菌鍋內(nèi)90 ℃殺菌25 min，即為成品.

1.4 單因素試驗(yàn)

1.4.1 銀杏葉浸提液添加量的確定

固定添加荷葉浸提液20%(體積百分比濃度、下同)、白砂糖8%(質(zhì)量百分比濃度、下同)、檸檬酸0.15%(質(zhì)量百分比濃度、下同)，分別添加體積百分比濃度為5%,10%,15%,20%,25%的銀杏葉浸提液，混合、定容至100 mL，進(jìn)行感官評定.

1.4.2 荷葉浸提液添加量的確定

固定添加銀杏葉浸提液20%,白砂糖8%,檸檬酸0.15%，分別添加5%,10%,15%,20%,25%的荷葉浸提液，混合、定容至100 mL，進(jìn)行感官評定.

1.4.3 白砂糖添加量的確定

固定添加荷葉浸提液20%,銀杏葉浸提液10%,檸檬酸0.15%，分別添加5%,6%,7%,8%,9%,10%的白砂糖，混合、定容至100 mL，進(jìn)行感官評定.

1.4.4 檸檬酸添加量的確定

固定添加荷葉浸提液20%,銀杏葉浸提液10%,白砂糖9%，分別添加0.05%,0.10%,0.15%,0.20%,0.25%的檸檬酸，混合、定容至100 mL，進(jìn)行感官評定.

使用保水劑并于澆水后每隔10天測定一次結(jié)果，澆水后第一次測定的結(jié)果進(jìn)行分析，施用保水劑后相比對照土壤的含水量有明顯增加。經(jīng)過3次土壤含水量的測定，保水劑顯示出對土壤水分的保持作用，但3種保水劑保水效果存在明顯差異。旱地寶農(nóng)林專用保水劑和農(nóng)林用長效型保水劑均在測定中后期表現(xiàn)出了良好的保水能力，延長了土壤有效水的供應(yīng)時(shí)間，且旱地寶蓄水能力更強(qiáng)。R101型保水劑在測定中期表現(xiàn)出良好的保水能力，但后期差別逐漸減小，說明保水劑保存的水分可能已部分供應(yīng)作物吸收利用。綜上所述，保水劑對土壤含水量的影響為：旱地寶農(nóng)林專用保水劑＞農(nóng)林用長效型保水劑＞R101型保水劑。

1.5 正交實(shí)驗(yàn)

在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，采用正交試驗(yàn)優(yōu)化保健飲料的配方.正交試驗(yàn)因素與水平見表1.

表1 正交試驗(yàn)因素水平

1.6 感官評價(jià)

為了評價(jià)保健飲料的感官質(zhì)量，制定了感官評分表[11]，見表2.

表2 銀杏葉荷葉保健飲料感官評分標(biāo)準(zhǔn)

續(xù)表2 銀杏葉荷葉保健飲料感官評分標(biāo)準(zhǔn)

1.7 微生物指標(biāo)檢測

微生物指標(biāo)(大腸菌群[12]、菌落總數(shù)[13]、霉菌和酵母[14])按照國標(biāo)GB7101-2015[15]進(jìn)行檢測.

1.8 保健飲料總黃酮含量測定

取1mL制備好的保健飲料，按照1.3.1的方法測定吸光度值，由回歸方程計(jì)算出比色管中飲料的總黃酮含量，代入1.3.2的公式(1)計(jì)算出保健飲料的總黃酮含量.

2 結(jié)果與分析

2.1 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線

以蘆丁濃度為橫坐標(biāo)，相應(yīng)濃度的吸光度為縱坐標(biāo)，繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線，見圖1，同時(shí)得回歸方程y=10.915x-0.0046，相關(guān)系數(shù)R2=0.9995.

圖1 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.2 單因素試驗(yàn)

2.2.1 銀杏葉最佳浸提工藝的確定

固定料液比1∶20，在80 ℃,90 ℃條件下分別浸提30 min,40 min,50 min,60 min，測定銀杏葉總黃酮含量，結(jié)果見表3.

表3 不同浸提溫度和時(shí)間對銀杏葉總黃酮含量的影響

由表3可知，80 ℃浸提50 min時(shí)銀杏葉浸提液中總黃酮含量最高,此時(shí)，銀杏葉粉總黃酮提取率為8.78 mg/g.

2.2.2 荷葉最佳浸提工藝的確定

固定料液比1∶20，在80 ℃和90 ℃恒溫條件下分別浸提不同時(shí)間，測定荷葉總黃酮含量，結(jié)果見表4.

表4 不同浸提溫度和時(shí)間對荷葉總黃酮含量的影響

由表4可知，90 ℃浸提50 min時(shí)荷葉浸提液總黃酮含量最高,此時(shí)荷葉粉總黃酮提取率為53.50 mg/g.

2.2.3 荷葉浸提液對復(fù)合飲料感官的影響

荷葉浸提液會影響復(fù)合飲料的顏色和口感.荷葉浸提液添加量低于15%時(shí)，保健飲料的銀杏葉口感較重，荷葉味道不突出；添加量大于20%后，荷葉口感過濃；因此荷葉浸提液最佳添加量為20%，此時(shí)保健飲料的氣味協(xié)調(diào).

2.2.4 銀杏葉浸提液對復(fù)合飲料感官的影響

研究過程中發(fā)現(xiàn)，銀杏葉浸提液添加量為5%時(shí)，保健飲料中銀杏葉口感淡，荷葉味較重；添加量大于10%后，保健飲料中銀杏的口感逐漸增強(qiáng)；含量繼續(xù)增加，苦澀感加重.因此銀杏葉浸提液最佳添加量為10%.

2.2.5 白砂糖添加量的確定

白砂糖會影響保健飲料的甜度.白砂糖含量低于7%時(shí)，保健飲料過酸；含量達(dá)到8%時(shí)，口感微酸；白砂糖含量達(dá)到10%時(shí)，甜度過大.因此白砂糖最佳添加量為9%.

2.2.6 檸檬酸添加量的確定

檸檬酸會影響保健飲料的酸甜度.檸檬酸添加量低于0.10%時(shí)，保健飲料過甜；檸檬酸添加量大于0.20%時(shí)，保健飲料又過酸. 因此最佳的檸檬酸添加量為0.15%.

2.3 正交試驗(yàn)結(jié)果

保健飲料配方優(yōu)化正交試驗(yàn)結(jié)果見表5.

由表5中的R值可以看出，影響保健飲料感官質(zhì)量最大的因素是荷葉浸提液，其次是檸檬酸，然后是銀杏葉浸提液和白砂糖；結(jié)合K值大小得出最佳組合為A3B3C3D2，此組合不在表5中，為考察最佳條件，需進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn).

對最佳組合A3B3C3D2進(jìn)行驗(yàn)證，最終感官評價(jià)總分96分，此時(shí)保健飲料口感最好，顏色為淡黃色，澄清透明，口感不澀，酸甜適中，有銀杏葉和荷葉特有的清香.

表5 正交試驗(yàn)結(jié)果與分析

2.4 微生物指標(biāo)檢測結(jié)果

微生物指標(biāo)：銀杏葉荷葉保健飲料的菌落總數(shù)、霉菌和酵母菌、大腸菌群均未檢測出，微生物指標(biāo)符合國標(biāo)GB7101-2015中關(guān)于飲料微生物限度的規(guī)定.

2.5 總黃酮含量測定結(jié)果

經(jīng)測定，保健飲料的吸光度值為0.2933，由2.1的回歸方程y=10.915x-0.0046可以計(jì)算出保健飲料的總黃酮含量為0.027 mg/mL，將此濃度代入公式(1)中，計(jì)算出保健飲料最終總黃酮含量為0.68 mg/mL.

3 結(jié) 論

銀杏葉總黃酮最佳浸提工藝為：料液比1∶20，80 ℃浸提50 min，此條件下銀杏葉總黃酮提取率為8.78 mg/g；荷葉總黃酮最佳浸提工藝為：90 ℃浸提50 min，此條件下荷葉總黃酮提取率為53.50 mg/g.銀杏葉荷葉保健飲料的最優(yōu)配方為：銀杏葉浸提液15%(體積百分比濃度)，荷葉浸提液20%(體積百分比濃度)，白砂糖10%(質(zhì)量百分比濃度)，檸檬酸0.15%(質(zhì)量百分比濃度).此條件下，銀杏葉荷葉保健飲料呈淡黃色，色澤均勻，酸甜適中，總黃酮含量為0.68 mg/mL.