固相萃取-氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法測定植物油中21種農(nóng)藥殘留

◎ 畢 軍

（盤錦檢驗(yàn)檢測中心，遼寧 盤錦 124000）

近年來，農(nóng)藥濫用現(xiàn)象時(shí)有發(fā)生，受其污染的食品種類在不斷增多[1-2]，其中包括植物油、雞蛋、谷物等。我國作為世界第一植物油消費(fèi)大國[3]，保證植物油的安全對于保障人民健康、促進(jìn)貿(mào)易發(fā)展具有重要意義。但植物油作為一種較復(fù)雜的基質(zhì)，若前處理方法選擇不當(dāng)往往會(huì)造成樣品凈化不完全，最終影響測定結(jié)果，對儀器也會(huì)造成損害。目前，對于植物油中農(nóng)殘主要的提取處理方法有：液液萃取法、固相萃取法、分散固相萃取以及凝膠滲透技術(shù)等；主要的檢測手段有：氣相色譜法（GC）、氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（GC/MS）、液相色譜法（LC）以及液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（LC/MS）等[4]。其中，三重四極桿質(zhì)譜技術(shù)與其他方法相比較可有效減少基質(zhì)干擾，且具有更高的靈敏度，測試結(jié)果可信度更高[5]。

本次研究基于上述技術(shù)背景，使用一種對于油脂類物質(zhì)具有較好凈化、吸附效果的專用固相萃取柱作為凈化柱，樣品經(jīng)凈化后，采用三重四極桿氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀法進(jìn)行檢測，建立了一種方便、高效的植物油中農(nóng)藥殘留的檢測方法。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

1.1.1 試劑耗材

乙腈，美國Fisher；正己烷，美國Fisher；甲醇，美國Fisher；乙酸乙酯，美國Fisher；Copure? 專用柱（2 000 mg/12 mL，貨號：COATO122000），深圳逗點(diǎn)生物技術(shù)有限公司；農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)溶液（δ-666、殺螟硫磷、三唑酮、三氯殺螨醇、氟蟲腈、腐霉利、多效唑、丙溴磷、p,p’-DDE、o,p’-DDD、p,p’-DDD、o,p’-DDT、異菌脲、亞胺硫磷、聯(lián)苯菊酯、高效氯氟氰菊酯、氯菊酯、噠螨靈、氟氯氰菊酯、氟氰戊菊酯和氰戊菊酯，濃度均為1 000 mg·L-1），農(nóng)業(yè)農(nóng)村部環(huán)境質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)測試中心（天津）；環(huán)氧七氯（純度：99.4%），Dr；微孔濾膜（0.22 μm），Agilent。

1.1.2 儀器設(shè)備

TSQ8000Evo型三重四極桿氣質(zhì)聯(lián)用儀，Thermo Fisher公司；BSA124S型電子天平，賽多利斯公司；HY-2A型振蕩器，常州市金壇新航儀器廠；HSC-24B型水浴加熱氮吹儀，天津市恒奧科技發(fā)展有限公司；VORTEX-6型旋渦混勻儀，海門市其林貝爾儀器制造有限公司；RV10數(shù)顯型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，IKA。

1.1.3 儀器測試條件

色譜柱：DB-5MS，30 m×0.25 mm×0.25 μm；色譜柱溫度：初溫40 ℃，保持1.5 min，20 ℃·min-1升至90 ℃，保持1.5 min，25 ℃·min-1升至180 ℃，5 ℃·min-1升至280 ℃，10 ℃·min-1升至300 ℃保持5 min；進(jìn)樣口溫度：280 ℃；GC-MS接口溫度：270 ℃；進(jìn)樣量：1 μL；進(jìn)樣方式：不分流進(jìn)樣，1.5 min后開閥；載氣：氦氣；流速1.2 mL·min-1；電離方式：EI；離子源溫度：300 ℃。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的配制

將實(shí)驗(yàn)中使用的農(nóng)殘標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行混合，制成農(nóng)殘混合標(biāo)準(zhǔn)溶液。精準(zhǔn)吸取一定量的上述混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，使用乙酸乙酯作為溶劑，進(jìn)行逐級稀釋，獲得濃 度 為 0.005 μg·mL-1、0.01 μg·mL-1、0.025 μg·mL-1、0.05 μg·mL-1、0.1 μg·mL-1和 0.5 μg·mL-1的標(biāo)準(zhǔn)曲線工作溶液。選擇空白基質(zhì)溶液，氮?dú)獯蹈?，加?0 μL環(huán)氧七氯（內(nèi)標(biāo)溶液，30 μg·mL-1），再分別加入1 mL配制好的標(biāo)準(zhǔn)曲線工作溶液復(fù)溶，過微孔濾膜后獲得系列基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)工作液，供上機(jī)測定，臨用現(xiàn)配。

1.2.2 樣品的提取和凈化

準(zhǔn)確稱取植物油1 g（精確至0.001 g）置于15 mL離心管中，加入1 mL正己烷，旋渦混勻2 min，再加入10 mL乙腈，旋渦混勻3 min，9 000 r·min-1，低溫（5 ℃）離心5 min，上清液吸出轉(zhuǎn)移至另一只離心管中，向裝有試樣的離心管中再次加入10 mL乙腈重復(fù)提取一次，合并上清液，待凈化。

依次使用5 mL甲醇、5 mL乙腈對固相萃取柱進(jìn)行活化，待液面下降至填料頂端但未露出填料時(shí)，將收集的上清液緩慢加至固相萃取柱中，緩緩滴出，收集流出液，最后用10 mL乙腈沖洗固相萃取柱，收集沖洗液。合并上述流出液和沖洗液，利用真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將上述溶液旋蒸至近干，加入20 μL環(huán)氧七氯內(nèi)標(biāo)溶液，再使用1 mL乙酸乙酯復(fù)溶，過微孔濾膜，待測定。

2 結(jié)果與分析

2.1 質(zhì)譜測定條件的優(yōu)化

利用TraceFinder軟件的AUTO SRM功能，對本次實(shí)驗(yàn)中所要考察的21種農(nóng)藥殘留的多反應(yīng)選擇監(jiān)測條件進(jìn)行優(yōu)化，優(yōu)化結(jié)果如表1中所示。使用優(yōu)化后的質(zhì)譜條件對21種農(nóng)藥殘留的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行測定，測定結(jié)果如圖1所示。

圖1 21種農(nóng)藥殘留的標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)譜圖

表1 多反應(yīng)選擇監(jiān)測的最優(yōu)條件表

2.2 前處理方法的選擇

本次研究所建立的前處理方法為利用固相萃取技術(shù)對植物油樣品進(jìn)行凈化，樣品在處理過程中使用正己烷進(jìn)行溶解、分散，目的是使植物油中農(nóng)藥殘留更好地溶解至提取液中。本次實(shí)驗(yàn)中對正己烷的加入量進(jìn)行了考察，結(jié)果如表2所示，當(dāng)正己烷加入量大于1mL時(shí)，極性較高的農(nóng)藥（如丙溴磷）其提取效率幾乎不變；但對于弱極性農(nóng)藥（如δ-666）的提取效率則會(huì)顯著降低，因此，本次實(shí)驗(yàn)確定正己烷的加入量為1 mL。此外，實(shí)驗(yàn)中還考察了使用乙腈進(jìn)行提取時(shí)，提取次數(shù)對于回收率的影響，結(jié)果如表3所示，每次使用10 mL乙腈對樣品進(jìn)行提取，當(dāng)提取次數(shù)為2次時(shí)，提取效果最佳，繼續(xù)增加提取次數(shù)，實(shí)驗(yàn)的回收率不會(huì)產(chǎn)生明顯變化，且提取次數(shù)的增加會(huì)延長過柱和濃縮時(shí)間，降低實(shí)驗(yàn)效率。

表2 正己烷加入量對提取效率的影響表

表3 乙腈提取次數(shù)對于回收率的影響表

2.3 線性范圍、檢出限和定量限

本次實(shí)驗(yàn)配制了濃度為0.005～0.5 μg·mL-1范圍內(nèi)的混合農(nóng)殘標(biāo)準(zhǔn)曲線工作溶液，其內(nèi)標(biāo)物（環(huán)氧七氯）標(biāo)準(zhǔn)工作液的加入量為20 μL。經(jīng)測定可知，21種農(nóng)殘?jiān)谏鲜鰳?biāo)準(zhǔn)曲線范圍內(nèi)，均具有良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)（R2）均大于0.99。以標(biāo)準(zhǔn)曲線中間濃度點(diǎn)為起始濃度，使用乙酸乙酯進(jìn)行逐級稀釋，分別記錄各濃度點(diǎn)下的信號強(qiáng)度并與相應(yīng)空白基質(zhì)溶液的信號強(qiáng)度進(jìn)行比較。分別以3倍信噪比考察方法的檢出限（LOD），以10倍信噪比考察方法的定量限（LOQ），經(jīng)測定、比較可知，本實(shí)驗(yàn)中21種農(nóng)殘的LOD和LOQ如表1中所示。

2.4 準(zhǔn)確度、精密度

選用5種品牌的植物油作為空白基質(zhì)，選取3個(gè)加標(biāo)水平（LOQ、10LOQ和100LOQ），全部樣品按照“1.2”中規(guī)定進(jìn)行處理，然后上機(jī)測定。每個(gè)濃度水平重復(fù)測定7次，通過不同濃度點(diǎn)的加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)來對文中所建立方法的準(zhǔn)確度和精密度進(jìn)行評價(jià)。經(jīng)測定分析得，在上述3個(gè)加標(biāo)濃度水平下，實(shí)驗(yàn)中的21種農(nóng)殘?jiān)诳瞻谆|(zhì)中的回收率范圍為87%～108%，精密度（RSD）范圍為1.1%～6.7%，結(jié)果如表4。上述結(jié)果表明該方法具有良好的準(zhǔn)確度和精密度。

表4 回收率和精密度匯總表

3 結(jié)論

本次研究利用固相萃取技術(shù)結(jié)合三重四極桿氣質(zhì)聯(lián)儀建立了一種植物油中農(nóng)藥殘留的檢測方法。經(jīng)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，在給定的濃度范圍（0.005～ 0.5 μg·mL-1）內(nèi)，21種農(nóng)藥殘留均表現(xiàn)出良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)（R2）均大于0.99；各組分在3個(gè)加標(biāo)水平（LOQ、10LOQ、100LOQ）下的回收率范圍為87%～108%，精密度范圍為1.1%～6.7%，該結(jié)果表明，文中方法具有良好的準(zhǔn)確度和精密度，且回收率穩(wěn)定。本工作為植物油中農(nóng)藥殘留的日常檢測提供了技術(shù)支持。