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      蒙藥蘇格木勒-3湯對IDCM心律失常作用研究

      2022-01-21 08:15:52胡鵬飛解玉蘭耿婉如馬奎影邵立群陳少青
      關(guān)鍵詞:室早蒙藥心肌病

      胡鵬飛,解玉蘭,耿婉如,馬奎影,邵立群,于 淼,陳少青,王 羽,趙 明

      (1.內(nèi)蒙古民族大學(xué)附屬醫(yī)院心內(nèi)科,內(nèi)蒙古 通遼 028007;2.內(nèi)蒙古民族大學(xué),內(nèi)蒙古 通遼 028043;3.內(nèi)蒙古民族大學(xué)醫(yī)學(xué)院,內(nèi)蒙古 通遼 028043)

      獲得性擴(kuò)張型心肌?。╠ilated cardiomyopathy,DCM)是心血管疾病中常見的疾病,其中最常見的是免疫性DCM(Immune dilated cardiomyopathy,IDCM).研究發(fā)現(xiàn)病毒性心肌炎(viralmyoearditis,VMC)可演變?yōu)镮DCM[1].蒙藥SD-3作為傳統(tǒng)蒙藥,可以調(diào)節(jié)三根、七素平衡,起到鎮(zhèn)靜、安神等作用,筆者臨床研究中發(fā)現(xiàn)其有減少房早、室早發(fā)生率同時改善心率變異性,抗心律失常具有一定效果[2].而蒙藥SD-3對IDCM并發(fā)心律失常作用尚未見報道,本研究目的是明確蒙藥SD-3對IDCM并發(fā)心律失常作用及可能的機(jī)制.

      1 材料與方法

      1.1 實(shí)驗(yàn)材料

      實(shí)驗(yàn)動物為30只Balb/c雄性小鼠(13~15 g),購買于吉林大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院動物中心,許可證號:scxk(吉)2011-0004;CVB3(Nancy株)由吉林大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院微生物教研室贈送,病毒原液效價為10-5TCID50/L.CX40抗體、CX43抗體、內(nèi)參抗體β-actin購于Abcam公司.

      1.2 免疫性擴(kuò)張型心肌病動物模型構(gòu)建及給藥

      小鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)后,隨機(jī)分成對照組(每組10只),IDCM組(每組10只),蒙藥SD-3組(每組10只).IDCM組、蒙藥SD-3組腹腔內(nèi)注射0.1 mL10-5TCID50CVB3,以后每4周腹腔內(nèi)重復(fù)接種0.1 mL 10-5TCID50CVB3,對照組腹腔注射不含病毒的培養(yǎng)液,共3個月模型制備成功后,蒙藥SD-3組給予蒙藥SD-3(15 mg·kg-1),灌胃處理,一日一次;對照組和IDCM組小鼠則分別灌胃給予0.9% NaCl 0.2 mL,給藥4周.

      1.3 心電圖檢查及病理取材、切片制作

      給藥4周后,行心電圖檢測后高濃度CO2處死動物,4%多聚合甲醛(500 mL)經(jīng)腔靜脈灌流心臟,固定心臟,包埋,切片后,進(jìn)行病理檢測.

      1.4 免疫印跡檢測相關(guān)蛋白的表達(dá)

      免疫印跡實(shí)驗(yàn)檢測心肌組織中縫隙連接蛋白的表達(dá)情況.

      1.5 統(tǒng)計學(xué)方法

      應(yīng)用統(tǒng)計軟件SPSS17.0對相關(guān)的數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析檢驗(yàn)判斷均數(shù)差異的顯著性,統(tǒng)計的數(shù)據(jù)用(±s)表示.

      2 結(jié)果

      2.1 小鼠的一般情況

      對照組小鼠活動自如無死亡;IDCM組小鼠在實(shí)驗(yàn)開始第2周,出現(xiàn)明顯的活動減少、精神不佳、毛蜷縮無光澤、進(jìn)食量減少,無死亡;蒙藥SD-3組小鼠一般狀態(tài)不如對照組小鼠,但強(qiáng)于IDCM組小鼠.

      2.2 病理學(xué)改變

      通過HE染色結(jié)果可知,對照組小鼠的心臟心肌組織整齊,無心肌壞死病理改變;IDCM組小鼠心肌排列紊亂,間質(zhì)出現(xiàn)水腫,心肌間隔變寬,并出現(xiàn)淋巴細(xì)胞聚集等現(xiàn)象,給予蒙藥SD-3后上面現(xiàn)象有所改善.通過Masson染色結(jié)果可知,與對照組相比,IDCM組小鼠心肌纖維化明顯,而給予蒙藥SD-3后,心肌纖維化明顯受到抑制,見圖1、圖2.

      圖1 各組小鼠心肌HE染色(×200)Fig.1 HE staining of mouse myocardial muscle in each group(×200)

      圖2 各組小鼠心肌masson染色(×200)Fig.2 Masson staining of mouse myocardial muscle in each group(×200)

      2.3 各組小鼠心肌組織CX40、CX43表達(dá)變化

      較對照組小鼠心肌組織中蛋白CX40(1900±280)、CX43(545±57),IDCM組小鼠心肌組織CX40(733±89)、CX43(323±46)表達(dá)減少;與IDCM組小鼠相比,蒙藥SD-3組小鼠CX40(1869±341)、CX43(538±72)表達(dá)明顯增加(P<0.05),見圖3.

      圖3 蒙藥蘇格木勒-3對小鼠心肌組織中CX40、CX43表達(dá)的影響Fig.3 Effect of Mongolian medicine Sugemule-3 decoction on CX40 and CX43 expression in mouse myocardium

      2.4 各組小鼠心電圖變化

      對照組小鼠未見明顯心律失常,IDCM組小鼠室早明顯增多,與IDCM組小鼠相比,蒙藥SD-3組小鼠室早明顯減少,見圖4.

      圖4 各組小鼠心電圖變化Fig.4 Changes of mouse electrocardiograms in each group

      3 討論

      心肌病是由于多種原因?qū)е碌男募“l(fā)生炎癥性的改變,其中由于病毒感染繼發(fā)的免疫調(diào)節(jié)異常,即IDCM,在青少年中發(fā)病率呈逐年上漲的趨勢.而目前IDCM的治病機(jī)制不明且尚未找到有效抵抗病毒的藥物.因此,探索IDCM的致病機(jī)制和尋找到有效的干預(yù)手段已成為國內(nèi)外研究的重點(diǎn)內(nèi)容.

      心肌細(xì)胞之間通過閏盤連接,閏盤作為一個蛋白網(wǎng),參與心肌電傳導(dǎo)等生理過程,當(dāng)發(fā)生心肌纖維化、心肌重構(gòu)等病理改變時,閏盤蛋白在上述病理改變后也會發(fā)生改變.閏盤中包括縫隙連接,其是由兩個六聚體在細(xì)胞間相互對接形成,負(fù)責(zé)心肌細(xì)胞之間電信號的傳導(dǎo),心肌細(xì)胞縫隙連接蛋白由connex-in40、connexin43和connexin45構(gòu)成[3].大量文獻(xiàn)報道,當(dāng)各種原因?qū)е耤onnexin蛋白表達(dá)減少,可誘發(fā)心律失常[4-5].本研究團(tuán)隊也在前期實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),阿霉素心肌病并發(fā)心律失常大鼠的心肌中,通過電子顯微鏡檢測,可觀察大鼠心室肌的閏盤結(jié)構(gòu)被破壞,connexin40、connexin43及p-connexin43的表達(dá)明顯減低[6-7],文獻(xiàn)報道,病毒性心肌炎小鼠心肌中CX 43和CX 45表達(dá)明顯減少[8].筆者在臨床研究中發(fā)現(xiàn)蒙藥蘇格木勒-3湯有抗心律失常作用,但對IDCM心律失常作用及機(jī)制尚未清楚.本研究結(jié)果明確蒙藥SD-3可減少IDCM并發(fā)心律失常,其作用機(jī)制可能與降低IDCM心肌纖維水平,提高心肌組織中Cx40、Cx43表達(dá)相關(guān).

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